Induction et divers indicateurs d’évaluation de l’encéphalomyélite auto-immune expérimentale

Actuellement, il n’existe pas de remède complet pour la sclérose en plaques. Notre protocole permet la construction efficace d’un modèle expérimental d’encéphalomyélite auto-immune pour aider à explorer les thérapies de la sclérose en plaques. Le principal avantage de notre protocole est une évaluation plus complète du traitement de l’encéphalomyélite auto-immune expérimentale sous de multiples perspectives.

Préparez d’abord l’émulsion de peptide glycoprotéine oligodendrocytaire de myéline en dissolvant le peptide lyophilisé et le PBS pré-refroidi stérile sans ions calcium et magnésium à pH 7,4. Ajouter une bille d’acier stérilisée de cinq millimètres à un tube microcentrifuge propre de deux millilitres. Ajoutez ensuite 500 microlitres d’adjuvant de Freuds complet contenant cinq milligrammes par millilitre de microbactérie tuberculeuse lyophilisée et 500 microlitres d’émulsion peptidique glycoprotéine oligodendrocytaire de myéline dans le tube.

Maintenant, faites osciller le tube sur un lyser tissulaire pendant 10 minutes. Ensuite, refroidissez les tubes sur de la glace pendant 10 minutes. Répétez le processus quatre fois jusqu’à ce qu’une solution visqueuse blanche soit formée.

Ensuite, diluez la solution de tige de la toxine de la coqueluche 50 fois dans du PBS stérile de pH 7,4 sans ions calcium et magnésium pour obtenir une concentration finale de 200 nanogrammes par 100 microlitres. Pour précipiter toute l’émulsion peptidique glycoprotéique oligodendrocytaire de myéline initialement préparée au fond du tube, centrifuger le tube à quatre degrés Celsius pendant deux à trois secondes, en appuyant sur le bouton d’impulsion de l’équipement. Aspirer l’émulsion peptidique glycoprotéine oligodendrocytaire de myéline avec une seringue d’un millilitre équipée d’une aiguille de calibre 22 et transférer l’émulsion dans un nouveau baril de seringue de 1 millilitre.

Fixez une aiguille de calibre 26 au canon et fixez la connexion avec un film d’étanchéité. Injecter 100 microlitres de l’émulsion peptidique glycoprotéine oligodendrocytaire de myéline par voie sous-cutanée de chaque côté de la colonne dorsale d’une souris. Après l’injection, observez la formation automatique de masses bulbeuses sous la peau et le dos.

Ensuite, par voie intrapéritonéale, injectez 100 microlitres de toxine coqueluche dans la même souris. Préparer une chambre de réaction en plein champ et mettre en place un système d’analyse vidéo pour enregistrer la locomotion de la souris. Pour nettoyer la chambre de réaction avant l’expérience, vaporisez de l’éthanol à 70% sur toute la zone et essuyez avec une serviette en papier propre.

Ensuite, placez une souris dans le coin d’une chambre de réaction. Pour commencer la prise de vue, cliquez sur le bouton de démarrage de la capture dans la barre de menu du système d’enregistrement vidéo et enregistrez l’heure. En gardant le silence dans la salle de test, laissez la souris bouger librement pendant cinq minutes.

Ensuite, arrêtez l’enregistrement et enregistrez la vidéo. Remettez la souris dans sa cage. Nettoyez ensuite la zone de test avec de l’éthanol à 70% et passez à la souris suivante.

Gardez la souris euthanasiée à plat sur un plateau de dissection et fixez les extrémités. Tenez la peau des membres postérieurs chez la souris avec une pince et ouvrez la peau et les muscles avec des ciseaux. Ensuite, séparez le fémur du tibia et de l’os de la hanche en utilisant soigneusement les ciseaux.

Enlevez les muscles adhérant au fémur avec des ciseaux. Placez ensuite le fémur dans de l’éthanol à 70% à température ambiante. Dans cette étude, la capacité du peptide dérivé de la glycoprotéine oligodendrocytaire de myéline à induire l’EAE a été évaluée.

Les souris injectées avec le peptide ont connu une perte de poids progressive. Après six à neuf jours d’injection, ils ont développé des symptômes d’EAE qui ont culminé après 14 à 16 jours. Les tracés de piste du test en plein champ ont démontré que l’EAE modifie le comportement exploratoire normal des souris.

Par rapport aux souris normales, les souris atteintes d’EAE ont parcouru beaucoup moins de distance dans les phases précoces, de pic et de rémission. Les souris atteintes d’EAE avaient également une durée d’activité significativement réduite dans les phases de pic et de rémission de la maladie. De plus, dans les trois phases, les souris EAE avaient beaucoup moins de distance de déplacement et de temps passé dans le centre.

La tomodensitométrie des fémurs de souris EAE a révélé une architecture trabéculaire différente de celle des souris normales. Les fémurs des souris EAE avaient une densité minérale osseuse et un rapport volume osseux / volume tissulaire significativement inférieurs à ceux des souris normales. De plus, les fémurs de souris atteintes d’EAE avaient une densité de connexion trabéculaire, un nombre trabéculaire et une épaisseur trabéculaire inférieurs à ceux de souris normales.

Par rapport aux souris normales, l’espacement trabéculaire a été amélioré et l’épaisseur de l’os cortical a été réduite chez les souris EAE. Nous pouvons également isoler le code du cerveau et de la colonne vertébrale des souris EAE au plus fort de la maladie et analyser la production de cellules immunitaires et de cytokines par cytométrie grippale.