Name: Un modèle de souris de dommages péritonéaux induits par le gluconate de chlorhexidine (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-04-28T14:45:00.000+00:00
Duration: 4 min 25 s
Description: Découvrez un modèle de souris simple pour étudier la fibrose péritonéale induite par le gluconate de chlorhexidine. Cette méthode facilite la recherche sur la dialyse péritonéale et améliore la compréhension des changements pathologiques.

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Nous remercions sincèrement Shin-Han Tseng pour la discussion critique et l’exécution partielle de l’étude. Cette étude a été soutenue par EDAHP110003 et NCKUEDA110002 de la Fondation de recherche de l’hôpital E-DA et de l’Université nationale Cheng Kung, Taiwan.

Toutes les expériences sur les souris ont été approuvées par le Centre des animaux de laboratoire de l’hôpital E-DA / Université I-Shou et ont été traitées conformément au « Guide for the Care and Use of Laboratory Animals » (NRC, États-Unis 2011). Des souris mâles C57BL/6, âgées de 7 à 8 semaines, ont été utilisées pour la présente étude.
1. Préparation chimique
<ol><li>Préparer l’irritant chimique en diluant le gluconate de chlorhexidine à 0,1 % (CG, voir le tableau des matières) dans de l’éthanol à 15 %.</li>
</ol>2. Traitement des animaux
<ol><li>Assignez trois souris comme groupe témoin. Effectuer une injection intrapéritonéale (i.p.) de 1 mL/kg de solution saline normale à 0,9 % tous les deux jours pendant 3 semaines, pour un total de neuf fois.</li>
	<li>Assignez trois souris au groupe de fibrose péritonéale. Induire une fibrose péritonéale à l’aide de gluconate de chlorhexidine (CG) en administrant des injections i.p. de 0,1% de CG dans de l’éthanol à 15% (étape 1.1) à une dose de 12,5 μL / g de poids corporel. Effectuez cela tous les deux jours pendant 3 semaines, pour un total de neuf fois.</li>
</ol>3. Tests de la fonction péritonéale (test d’équilibre péritonéal modifié)
<ol><li>Préparez une solution de dialyse contenant 4,25% de glucose. Prélever 0,5 mL d’échantillon de dialysat avec une seringue, puis vérifier la concentration de glucose dans l’échantillon de dialysat. NOTE: La concentration de glucose est déterminée selon la méthode hexokinase/G6PD. Les échantillons de dialysat ont été consultés pour le test Glu 2 de type L et étudiés à l’aide d’un analyseur biochimique (voir le tableau des matériaux). Il s’agit de la concentration initiale de glucose du dialysat.</li>
	<li>Anesthésier les souris par injection intramusculaire de Zoletil et de Xylazine (préparées dans un rapport de 1:2 en volume, voir le tableau des matières) à une dose de 20 μL/20 gw. De plus, utilisez une pommade vétérinaire sur les yeux pour prévenir la sécheresse sous anesthésie.</li>
	<li>Effectuer l’instillation intraveineuse de la solution de dialyse (2 mL/20 g de poids corporel).</li>
	<li>Après 30 min, évaluer et vérifier la profondeur de l’anesthésie avec absence de réflexe de pincement des orteils. Ensuite, effectuez une incision verticale dans la ligne médiane de l’abdomen (sous le processus xiphoïde), puis ouvrez l’abdomen des souris et recueillez le liquide intrapéritonéal avec une seringue (définie comme « volume 1 »). Ensuite, mesurez le poids d’un coton propre et sec et mettez le coton dans la cavité abdominale des souris pour absorber le liquide intrapéritonéal résiduel. Enfin, mesurez à nouveau le poids du coton. NOTE: Le gain de poids du coton est égal au poids du liquide intrapéritonéal résiduel. Ensuite, convertissez au volume obtenu (densité : 1 g/cm3 ; défini comme « volume 2 »). Le volume final du dialysat est le volume 1 plus le volume 2.</li>
	<li>Utilisez 0,5 mL d’échantillon de dialysat (dialysat final) pour mesurer la concentration de glucose. Il s’agit de la concentration finale de glucose du dialysat.</li>
	<li>Calculer l’ultrafiltration nette à l’aide de la formule15 : <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63903/63903eq01.jpg" style="margin: auto;"></li>
	<li>Calculer la perméabilité péritonéale à l’aide de la formule15 suivante : <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/63903/63903eq02.jpg" style="margin: auto;"></li>
</ol>4. Préparation tissulaire du muscle de la paroi abdominale et du foie et analyse histologique
<ol><li>Sacrifier les souris par ponction cardiaque (phlébotomie)3,16.</li>
	<li>Couper la paroi abdominale (1 cm x 1 cm) et hépatectomie totale. Fixez la paroi abdominale et les tissus hépatiques des souris pendant la nuit dans du formol tamponné neutre à 10%.</li>
	<li>Préparer des sections de paraffine de 3 μm d’épaisseur du muscle et du foie de la paroi abdominale et effectuer une analyse histologique à la suite du rapport17 publié précédemment.</li>
	<li>Évaluer le péritoine pariétal de la paroi abdominale et le péritoine viscéral des surfaces hépatiques des souris à l’aide de la morphométrie18.</li>
	<li>Effectuer des analyses statistiques à l’aide de statistiques et de logiciels graphiques (voir le tableau des matériaux). Exprimer toutes les données sous forme de moyenne ± écart-type et analyser la signification statistique à l’aide d’un test t19. Définissez des valeurs avec P &lt; 0,05 comme résultats significatifs.</li>
</ol>

<ol><li>Han, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+outcome+of+CAPD%3A+twenty-five+years%27+experience+in+a+single+Korean+center%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Improving outcome of CAPD: twenty-five years' experience in a single Korean center.</a> Peritoneal Dialysis International. 27 (4), 432-440 (2007).</li>
<li>Kawaguchi, Y., Hasegawa, T., Nakayama, M., Kubo, H., Shigematu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Issues+affecting+the+longevity+of+the+continuous+peritoneal+dialysis+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International+Supplements%22%5BJournal%5D)">Issues affecting the longevity of the continuous peritoneal dialysis therapy.</a> Kidney International Supplements. 62, 105-107 (1997).</li>
<li>Lee, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitamin+D+can+ameliorate+chlorhexidine+gluconate-induced+peritoneal+fibrosis+and+functional+deterioration+through+the+inhibition+of+epithelial-to-mesenchymal+transition+of+mesothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Vitamin D can ameliorate chlorhexidine gluconate-induced peritoneal fibrosis and functional deterioration through the inhibition of epithelial-to-mesenchymal transition of mesothelial cells.</a> BioMed Research International. 2015, 595030(2015).</li>
<li>Nakamoto, H., Kawaguchi, Y., Suzuki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+technique+survival+on+peritoneal+dialysis+better+in+Japan%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Is technique survival on peritoneal dialysis better in Japan.</a> Peritoneal Dialysis International. 26 (2), 136-143 (2006).</li>
<li>Schaefer, F., Klaus, G., Muller-Wiefel, D. E., Mehls, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+practice+of+peritoneal+dialysis+in+children%3A+results+of+a+longitudinal+survey.+Mid+European+Pediatric+Peritoneal+Dialysis+Study+Group+%28MEPPS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Current practice of peritoneal dialysis in children: results of a longitudinal survey. Mid European Pediatric Peritoneal Dialysis Study Group (MEPPS).</a> Peritoneal Dialysis International. 19, Suppl 2 445-449 (1999).</li>
<li>Woodrow, G., Turney, J. H., Brownjohn, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technique+failure+in+peritoneal+dialysis+and+its+impact+on+patient+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Technique failure in peritoneal dialysis and its impact on patient survival.</a> Peritoneal Dialysis International. 17 (4), 360-364 (1997).</li>
<li>Schmidt, D. W., Flessner, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+treatment+of+encapsulating+peritoneal+sclerosis%3A+basic+and+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and treatment of encapsulating peritoneal sclerosis: basic and translational research.</a> Peritoneal Dialysis International. 28, Suppl 5 10-15 (2008).</li>
<li>Augustine, T., Brown, P. W., Davies, S. D., Summers, A. M., Wilkie, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encapsulating+peritoneal+sclerosis%3A+clinical+significance+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron+Clinical+Practice%22%5BJournal%5D)">Encapsulating peritoneal sclerosis: clinical significance and implications.</a> Nephron Clinical Practice. 111 (2), 149-154 (2009).</li>
<li>Di Paolo, N., Nicolai, G. A., Garosi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+peritoneum%3A+from+histological+studies+to+mesothelial+transplant+through+animal+experimentation%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">The peritoneum: from histological studies to mesothelial transplant through animal experimentation.</a> Peritoneal Dialysis International. 28, Suppl 5 5-9 (2008).</li>
<li>Fusshoeller, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histomorphological+and+functional+changes+of+the+peritoneal+membrane+during+long-term+peritoneal+dialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Histomorphological and functional changes of the peritoneal membrane during long-term peritoneal dialysis.</a> Pediatric Nephrology. 23 (1), 19-25 (2008).</li>
<li>Goffin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+membrane+structural+and+functional+changes+during+peritoneal+dialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Dialysis%22%5BJournal%5D)">Peritoneal membrane structural and functional changes during peritoneal dialysis.</a> Seminars in Dialysis. 21 (3), 258-265 (2008).</li>
<li>Ito, T., Yorioka, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+damage+by+peritoneal+dialysis+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Peritoneal damage by peritoneal dialysis solutions.</a> Clinical and Experimental Nephrology. 12 (4), 243-249 (2008).</li>
<li>Io, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SAHA+suppresses+peritoneal+fibrosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">SAHA suppresses peritoneal fibrosis in mice.</a> Peritoneal Dialysis International. 35 (3), 246-258 (2015).</li>
<li>Yoh, K., Ojima, M., Takahashi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Th2-biased+GATA-3+transgenic+mice+developed+severe+experimental+peritoneal+fibrosis+compared+with+Th1-biased+T-bet+and+Th17-biased+RORgammat+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Animals%22%5BJournal%5D)">Th2-biased GATA-3 transgenic mice developed severe experimental peritoneal fibrosis compared with Th1-biased T-bet and Th17-biased RORgammat transgenic mice.</a> Experimental Animals. 64 (4), 353-362 (2015).</li>
<li>Karl, Z. J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+Equilibration+Test%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Peritoneal Equilibration Test.</a> Peritoneal Dialysis International. 7 (3), 138-148 (1987).</li>
<li>Lee, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+implication+of+vitamin+D+nanomedicine+for+peritoneal+dialysis-related+peritoneal+damage%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">The clinical implication of vitamin D nanomedicine for peritoneal dialysis-related peritoneal damage.</a> International Journal of Nanomedicine. 14, 9665-9675 (2019).</li>
<li>Goldner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modification+of+the+masson+trichrome+technique+for+routine+laboratory+purposes%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Modification of the masson trichrome technique for routine laboratory purposes.</a> The American Journal of Pathology. 14 (2), 237-243 (1938).</li>
<li>Cheng, F. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+application+of+magnetite+nanoparticle-mediated+vitamin+D3+delivery+for+peritoneal+dialysis-related+peritoneal+damage%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Novel application of magnetite nanoparticle-mediated vitamin D3 delivery for peritoneal dialysis-related peritoneal damage.</a> International Journal of Nanomedicine. 16, 2137-2146 (2021).</li>
<li>Ross, A., Willson, V. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRoss%2C+A+%22Basic+and+Advanced+Statistical+Tests%3A+Writing+Results+Sections+and+Creating+Tables+and+Figures%22">Basic and Advanced Statistical Tests: Writing Results Sections and Creating Tables and Figures</a>. , SensePublishers. 13-16 (2017).</li>
<li>Suga, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventive+effect+of+pirfenidone+against+experimental+sclerosing+peritonitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Preventive effect of pirfenidone against experimental sclerosing peritonitis in rats.</a> Experimental and Toxicologic Pathology. 47 (4), 287-291 (1995).</li>
<li>Ishii, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+sclerosing+encapsulating+peritonitis+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">An experimental sclerosing encapsulating peritonitis model in mice.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 16 (6), 1262-1266 (2001).</li>
<li>Nishino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antisense+oligonucleotides+against+collagen-binding+stress+protein+HSP47+suppress+peritoneal+fibrosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Antisense oligonucleotides against collagen-binding stress protein HSP47 suppress peritoneal fibrosis in rats.</a> Kidney International. 64 (3), 887-896 (2003).</li>
<li>Mishima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+expression+of+heat+shock+protein+47+in+rat+model+of+peritoneal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Enhanced expression of heat shock protein 47 in rat model of peritoneal fibrosis.</a> Peritoneal Dialysis International. 23 (1), 14-22 (2003).</li>
<li>Kushiyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+liposome-encapsulated+clodronate+on+chlorhexidine+gluconate-induced+peritoneal+fibrosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Effects of liposome-encapsulated clodronate on chlorhexidine gluconate-induced peritoneal fibrosis in rats.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 26 (10), 3143-3154 (2011).</li>
<li>Nishino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+lymphocyte+infiltration+in+the+progression+of+mouse+peritoneal+fibrosis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Renal+Failure%22%5BJournal%5D)">Involvement of lymphocyte infiltration in the progression of mouse peritoneal fibrosis model.</a> Renal Failure. 34 (6), 760-766 (2012).</li>
<li>Lua, I., Li, Y., Pappoe, L. S., Asahina, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myofibroblastic+conversion+and+regeneration+of+mesothelial+cells+in+peritoneal+and+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Myofibroblastic conversion and regeneration of mesothelial cells in peritoneal and liver fibrosis.</a> The American Journal of Pathology. 185 (12), 3258-3273 (2015).</li>
<li>Kitamura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigallocatechin+gallate+suppresses+peritoneal+fibrosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Chemico-Biological+Interactions%22%5BJournal%5D)">Epigallocatechin gallate suppresses peritoneal fibrosis in mice.</a> Chemico-Biological Interactions. 195 (1), 95-104 (2012).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Dans cette étude, un modèle de MP murine est présenté par injection i.p. de CG, et les résultats ont montré une fibrose péritonéale et une détérioration fonctionnelle dans ce modèle, qui imitait l’état du patient MP.
Le protocole comporte plusieurs étapes critiques. Tout d’abord, pour effectuer une injection intra-électrique de CG ou NS, la peau de la paroi abdominale de la souris doit être ramassée à l’aide d’une pince pour prévenir les dommages aux organes intrapéritonéaux induits par la pon...

La dialyse péritonéale (DP) est un type de thérapie de remplacement rénal. Cependant, la MP a des problèmes qui ne peuvent pas être résolus. Par exemple, le traitement à long terme de la MP peut causer des dommages péritonéaux, entraînant éventuellement un échec de l’ultrafiltration et l’arrêt du traitement 1,2,3,4,5,6. La fibrose péritonéale est l’une des complications les plus graves 7,8. La fibrose péritonéale est caractérisée par le dépôt et l’accumulation de matrice extracellulaire dans l’interstitium, ainsi que par la néo-angiogenèse et la vasculopathie du péritoine 9,10.
Les principales causes de ces changements péritonéaux sont la péritonite récurrente et la non-biocompatibilité du dialysat, qui sont hyperosmotiques, hyperglycémiques, faible pH et accumulation de produits de dégradation du glucose11,12. Par conséquent, des modèles expérimentaux animaux appropriés peuvent aider les chercheurs à mieux étudier les changements physiologiques et pathologiques du péritoine pendant le traitement par MP. Par conséquent, l’établissement d’un modèle animal de MP est important pour améliorer la technologie de la MP et l’efficacité de la dialyse et prolonger la survie des patients. Cette étude visait à générer un modèle murin par injection intrapéritonéale (i.p.) de gluconate de chlorhexidine (CG), comme décrit précédemment13,14. Ce modèle de souris est simple, facile à utiliser et réalisable par rapport aux autres modèles animaux.

<table><tbody><tr><td>0,9 % de solution saline normale</td><td>Y F CHEMICAL CORP., New Taipei City, Taïwan-10</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>% de formol tamponné neutre</td><td>Taiwan Burnett International Co., Ltd., Taipei City, Taïwan</td><td>00002A</td><td></td></tr><tr><td>Analyseur biochimique automatique</td><td>Hitachi Ltd., Tokyo, Japon</td><td>Labospect Series 008</td><td>pour déterminer la concentration de glucose</td></tr><tr><td>Solution de digluconate de chlorhexidine, 20 % dans H2O</td><td>Sigma-Aldrich, MO, USA</td><td>C9394</td><td>dilué à 0,1 % avec 15 % d’éthanol pour injection</td></tr><tr><td>Éthanol</td><td>Avantor Performance Materials, LLC, PA, USA</td><td>BAKR8006-05</td><td>dilué à 15 % avec une solution saline normale pour la concentration de travail</td></tr><tr><td>Glucose (Dianeal)</td><td>Baxter International, Inc., IL, États-Unis</td><td>FNB9896</td><td>Solution de dialyse commerciale (4,25 %)</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 8.0</td><td>Logiciel GraphPad, Inc., CA, US</td><td></td><td></td></tr><tr><td>L-type Glu 2 test</td><td>FUJIFILM Wako, Japon</td><td>461-32403</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine 20</td><td>Juily Pharmaceutical Co., Ltd., New Taipei City,</td> <td>Taiwan-Zoletil</td><td></td></tr> <tr><td>50</td><td>Virbac Laboratories, Carros, France</td><td>-</td><td></td></tr></tbody></table>

un modèle de souris de dommages péritonéaux induits par le gluconate de chlorhexidine

A Mice Model of Chlorhexidine Gluconate-Induced Peritoneal Damage

La fibrose péritonéale est une complication importante de la dialyse péritonéale (MP). Pour étudier et résoudre ce problème, un modèle animal approprié de MP est nécessaire. Le présent protocole établit un modèle de fibrose péritonéale induite par le gluconate de chlorhexidine (CG) qui imite l’état d’un patient atteint de la MP. La fibrose péritonéale a été induite par injection intrapéritonéale de 0,1% de CG dans de l’éthanol à 15% pendant 3 semaines (administrée tous les deux jours), pour un total de neuf fois chez des souris mâles C57BL/6. Des tests fonctionnels péritonéaux ont ensuite été effectués le jour 22. Après le sacrifice des souris, le péritoine pariétal de la paroi abdominale et le péritoine viscéral du foie ont été récoltés. Ils étaient plus épais et plus fibrotiques lorsqu’ils étaient analysés au microscope après la coloration trichrome de Masson. Le taux d’ultrafiltration a diminué et le transport de masse de glucose a indiqué une augmentation de la perméabilité péritonéale induite par CG. Le modèle de MP ainsi établi peut avoir des applications dans l’amélioration de la technologie de la MP, l’efficacité de la dialyse et la prolongation de la survie des patients.

Dans la figure 1A,B, le péritoine pariétal de la paroi abdominale était nettement plus épais et plus fibrotique sous la coloration trichrome de Masson17, ce qui indique que dans le groupe exposé à CG, la fibrose péritonéale est plus grave que dans le groupe témoin saline (NS). Dans la figure 2A,B, le péritoine viscéral des surfaces hépatiques était également nettement plus épais et plus fibrotique, prouvant ainsi que dans...

Le présent protocole établit un modèle murin de dialyse péritonéale () de fibrose péritonéale induite par le gluconate de chlorhexidine (CG). Le modèle actuel est simple et facile à utiliser par rapport aux autres modèles animaux de DP.

Un modèle de souris de dommages péritonéaux induits par le gluconate de chlorhexidine

Peritoneal fibrosis is an important complication of peritoneal dialysis (PD). To investigate and address this problem, an appropriate animal model of PD ...

L’établissement d’un modèle animal pour la dialyse péritonéale, MP, est très important. Nous espérons qu’il pourra améliorer la technologie et l’efficacité de la thérapie MP et éventuellement améliorer la survie du patient. Ce modèle murin de dialyse péritonéale est simple, facile à utiliser et visible par rapport aux autres modèles animaux de dialyse péritonéale.Un modèle animal de dialyse péritonéale approprié peut aider les chercheurs à étudier le changement péritonéal, physiologique et pathologique au cours de la thérapie MP. La démonstration de la procédure sera assurée par Fang-Ling Liao, un assistant de recherche de mon laboratoire. Pour commencer, préparez l’irritant chimique en diluant 0,1% de gluconate de chlorhexidine dans de l’éthanol à 15%.Ensuite, assignez trois souris comme groupe témoin et injectez un millilitre par kilogramme de solution saline normale à 0,9% par voie intrapéritonéale tous les deux jours pendant trois semaines pour un total de neuf fois. Ensuite, assignez trois souris au groupe de fibrose péritonéale et induisez une fibrose péritonéale en administrant une injection intrapéritonéale de solution de gluconate de chlorhexidine à 0,1% préparée plus tôt à une dose de 12,5 microlitres par kilogramme de poids corporel. Pour les tests de la fonction péritonéale, préparer une solution de dialyse contenant 4,25% de glucose.Ensuite, utilisez une seringue pour prélever 0,5 millilitre d’échantillon de dialysat. Préparez une injection de zletil et de xylazine et anesthésiez les souris en administrant une injection intramusculaire. Effectuer l’installation intrapéritonéale de la solution de dialyse à une dose de deux millilitres par 20 grammes de poids corporel.Faites une petite incision dans la ligne médiane de l’abdomen et recueillez le principal liquide intrapéritonéal avec une seringue. Après 30 minutes, effectuez une incision verticale dans la ligne médiane de l’abdomen sous le processus xiphoïde et ouvrez l’abdomen de la souris pour recueillir le liquide intrapéritonéal résiduel avec une seringue. Ensuite, mesurez le poids d’un coton-tige propre et sec.Mettez le coton dans la cavité abdominale de la souris pour absorber le liquide intrapéritonéal résiduel, puis retirez-le. Mesurez à nouveau le poids du coton. La coloration trichrome de Masson a montré que le péritoine pariétal de la paroi abdominale dans le groupe exposé au gluconate de chlorhexidine était nettement plus épais et fibrotique que le groupe témoin.Le péritoine viscéral des surfaces hépatiques était également significativement plus épais et fibrotique dans le groupe exposé au gluconate de chlorhexidine que dans le groupe témoin salin, ce qui indique que la fibrose péritonéale est plus grave dans le groupe exposé au gluconate de chlorhexidine. Le groupe exposé au gluconate de chlorhexidine a montré une diminution du taux d’ultrafiltration et une augmentation du transport de masse de glucose, indiquant que la perméabilité péritonéale augmente chez les souris exposées au gluconate de chlorhexidine. Lors d’une procédure d’injection intrapéritonéale, utilisez les pinces et prélevez la peau abdominale de la souris pour prévenir les dommages aux organes intrapéritonéaux induits par la ponction.

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Source : de Vries, C. R., et.al. Un modèle d’inoculation retardée de l’infection chronique de la plaie de Pseudomonas aeruginosa . J. Vis. Exp. (2020)Cette vidéo montre l’inoculation retardée de Pseudomonas aeruginosa luminescente dans une souris portant deux plaies dorsales d’épaisseur complète recouvertes d’un pansement de film transparent. Cela facilite la formation de biofilms et l’établissement d’infections chroniques. Un suivi régulier de la bioluminescence permet de quantifier la charge...

Développement d’un modèle murin d’infection cutanée chronique de Pseudomonas aeruginosa 

Nous décrivons ici un nouveau modèle murin diabétique utilisant des souris sans poils pour en temps réel, non invasif, surveillance des infections de plaies du biofilm de bioluminescent Pseudomonas aeruginosa. Cette méthode peut être adaptée pour évaluer l’infection d’autres espèces de bactéries et micro-organismes génétiquement modifiés, y compris les biofilms multi-espèces et tester l’efficacité des stratégies antibiofilm.

Venez sur le côté de la lumière: In Vivo surveillance des Infections à Pseudomonas aeruginosa Biofilm dans les plaies chroniques dans un modèle murin glabres diabétique

Cet article présente la méthode pour le placement chirurgical chez les souris d’un cathéter intrapéritonéal attaché à un port d’accès qui est placé à l’arrière de l’animal. En outre, il explique la procédure pour une néphrectomie 5/6 ressembler à l’État et urémique de patients Parkinsoniens.

Techniques chirurgicales pour le Placement de cathéter et néphrectomie 5/6 dans les modèles murins de la dialyse péritonéale

Les blessures chroniques sont développées des blessures aigues sur un modèle diabétique de souris en induisant des niveaux élevés de stress oxydatif après une blessure cutanée pleine épaisseur. La plaie est traitée avec des inhibiteurs pour la catalase et le peroxidase de glutathion, ayant pour résultat la guérison altérée et le développement de biofilm par les bactéries présentes dans le microbiome de peau.

Protocole pour créer des blessures chroniques chez les souris diabétiques

Ici, nous présentons un protocole pour induire localement la parodontite apical chez les souris. Nous montrons comment percer un trou dans la dent de la souris et exposer sa pulpe, afin de provoquer une inflammation locale. Des méthodes d'analyse pour étudier la nature de cette inflammation, telles que le micro-CT et l'histologie, sont également démontrées.

Induire la parodontite apicale chez les souris

Le présent protocole décrit une méthode chirurgicale normalisée pour le modèle AAA induit par l’élastase par l’application directe d’élastase à l’adventice de l’aorte abdominale infrarénale chez la souris.

Modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale de souris induit par l’application périvasculaire d’élastase

Cet article décrit les modifications d’une procédure d’implantation d’un cathéter de dialyse péritonéale dans un modèle murin afin d’éviter les problèmes techniques majeurs observés avec les techniques conventionnelles.

Une approche d’implantation rétrograde pour la mise en place d’un cathéter de dialyse péritonéale chez la souris

Cette étude présente deux techniques expérimentales cruciales : la construction d’un modèle de plaie murine pour évaluer la fermeture de la plaie et la préparation de suspensions unicellulaires à partir de peau murine pour préserver la viabilité cellulaire.

Modèles de plaies chez la souris et préparation de suspensions de cellules uniques

Ce manuscrit présente un protocole permettant d’établir un modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale chez la souris à l’aide de chlorure de calcium et d’élastase, combinant les avantages des méthodes de modélisation précédentes. Ce modèle peut être utilisé pour étudier les mécanismes physiopathologiques sous-jacents aux anévrismes de l’aorte abdominale.

Un modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale chez la souris par infiltration péri-adventice de chlorure de calcium et d’élastase

L’administration intrapéritonéale de médicaments est une approche non invasive sûre et efficace pour induire des lésions pancréatiques. Cette étude a comparé cinq protocoles d’injection intrapéritonéale distincts sur des souris pour induire divers degrés de lésions pancréatiques et a établi un modèle de lésions pancréatiques sévères pour étudier les changements pathologiques et les stratégies de traitement de la pancréatite aiguë sévère (PAS).

Préparation d’un modèle murin de pancréatite aiguë sévère par une combinaison de céruleine et d’injection intrapéritonéale de lipopolysaccharide

Découvrez un modèle de souris simple pour étudier la fibrose péritonéale induite par le gluconate de chlorhexidine. Cette méthode facilite la recherche sur la dialyse péritonéale et améliore la compréhension des changements pathologiques.

Un modèle de souris de dommages péritonéaux induits par le gluconate de chlorhexidine

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