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Un protocole de dosage en fosse simple pour visualiser et quantifier la résorption ostéoclastique...
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A Simple Pit Assay Protocol to Visualize and Quantify Osteoclastic Resorption In Vitro

Un protocole de dosage en fosse simple pour visualiser et quantifier la résorption ostéoclastique in vitro

Full Text
7,562 Views
07:03 min
June 16, 2022

DOI: 10.3791/64016-v

Wanjing Cen1, Siegmar Reinert1, Meltem Avci-Adali2, Dorothea Alexander1, Felix Umrath1,3

1Department of Oral and Maxillofacial Surgery,University Hospital Tübingen, 2Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery,University Hospital Tübingen, 3Department of Orthopaedic Surgery,University Hospital Tübingen

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article presents a reliable method for conducting osteoclastic resorption assays using calcium phosphate coated cell culture plates. The protocol allows for simultaneous visualization of resorption pits and cells, enhancing the assay's effectiveness.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Cell Biology
  • Bone Biology

Background

  • Osteoclastic activity is crucial for bone resorption.
  • Traditional methods using opaque materials limit visualization.
  • Calcium phosphate coatings provide a clearer view of cellular interactions.
  • The method can be adapted for various cell types.

Purpose of Study

  • To develop a simple and effective assay for osteoclastic resorption.
  • To improve visualization of resorption pits and cells.
  • To provide a protocol that can be easily implemented in laboratories.

Methods Used

  • Preparation of calcium phosphate coated cell culture plates.
  • Use of PBMCs for osteoclast differentiation.
  • Visualization of resorption pits using standard lab materials.
  • Application of the method to other cell types like bone marrow derived monocytes.

Main Results

  • The calcium phosphate coating allows for effective visualization of resorption.
  • PBMCs successfully differentiate into osteoclasts using this method.
  • Adaptability of the protocol for various cell types was demonstrated.
  • Results indicate improved assay reliability and simplicity.

Conclusions

  • The developed assay is a valuable tool for studying osteoclastic activity.
  • Calcium phosphate coatings enhance the visualization of cellular processes.
  • This method can facilitate further research in bone biology.

Frequently Asked Questions

What is the main advantage of using calcium phosphate coatings?
Calcium phosphate coatings allow for better visualization of resorption pits and cells compared to opaque materials.
Can this method be used with cell types other than PBMCs?
Yes, the protocol can also be applied to bone marrow derived monocytes and Raw 264.7 cells.
What materials are needed for this assay?
Standard lab materials and flat bottom 96 well cell culture plates are required.
How does this method improve assay reliability?
The method provides clear visualization of cellular interactions, enhancing the accuracy of results.
Is this protocol easy to implement in a laboratory setting?
Yes, the protocol is designed to be simple and can be easily followed in most labs.

Nous présentons ici une procédure de dosage simple et efficace pour les essais en fosse de résorption utilisant des plaques de culture cellulaire revêtues de phosphate de calcium.

Notre protocole décrit une méthode simple et fiable pour un test de résorption ostéoclastique. L’utilisation de plaques de culture cellulaire revêtues de phosphate de calcium peut être facilement préparée et visualisée à l’aide de matériaux disponibles en laboratoire. Contrairement aux tranches opaques d’os ou de dentine, le revêtement de phosphate de calcium permet de visualiser les fosses de résorption et les cellules en même temps.

Dans ce protocole, nous utilisons des PBMC pour la différenciation des ostéoclastes. Cependant, il peut également être appliqué à d’autres types de cellules comme les monocytes dérivés de la moelle osseuse ou les cellules Raw 264.7. Prenez d’abord une plaque de culture cellulaire à fond plat de 96 puits et pipettez 300 microlitres de solution de phosphate de calcium préalablement préparée dans chaque puits.

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