Utilisation d’une électrode bipolaire pour créer un modèle murin d’épilepsie du lobe temporal par allumage électrique de l’amygdale

Ce protocole proposait un modèle d’épilepsie avec l’amygdale comme origine. Il ouvre la voie à l’étude des structures du lobe temporal mésial. Ce modèle pourrait être interprété comme la base de l’expérience.

Comme ce protocole est une méthode peu coûteuse et efficace, il peut être mis en œuvre rapidement dans la plupart des laboratoires. La démonstration de la procédure sera Yongchang Lu, un étudiant de troisième cycle dans notre laboratoire. Commencez par rassembler les composants pré-préparés en commençant par des morceaux de fil de tungstène revêtu de téflon de deux centimètres de long avec un diamètre d’ours de 76,2 micromètres.

Une pièce de fil d’argent d’un diamètre d’ours de 127 micromètres de même longueur et un jeu de goupilles de corde calibres de deux par deux. Utilisez un briquet pour brûler une extrémité de chaque fil de tungstène afin d’enlever cinq millimètres du revêtement isolant. Décollez une section de fil multibrin ultra fin.

Déballez du bas à l’extrémité supérieure où il commence à faire sombre en continuant vers le haut. Combinez ce fil super fin et le fil de tungstène en pinçant une extrémité et en tordant doucement l’autre, ce qui permet aux deux matériaux d’être facilement entrelacés. Tirez doucement pour vous assurer que les fils sont bien enroulés et coupez l’excès de fil super fin.

Essayez de garder le fil de tungstène droit tout au long du processus. Fixez la goupille de la corde à la pince de la table de soudage avec le côté le plus long des broches tourné vers l’extérieur. Utilisez l’aiguille de la seringue pour ramasser de la pâte à souder et appliquez-la sur les épingles.

Chauffez la torche de soudage à 320 degrés Celsius. Faites fondre et enduisez du fil d’étain sans plomb avec la pointe de la torche. Chevauchez l’extrémité supérieure du fil de tungstène avec une aiguille des goupilles de corde et utilisez la soudure sur la torche pour lier le fil de tungstène à la goupille.

Soudez un autre fil de tungstène et un autre fil d’argent à la goupille de la corde de la même manière afin que chaque fil corresponde à une aiguille. Coupez deux tubes thermorétractables légèrement plus longs que l’extrémité supérieure du fil de tungstène. Placez-les sur le joint de soudure de deux fils de tungstène en veillant à ce que la partie conductrice soit entièrement recouverte dans le tube afin que le circuit des deux fils de tungstène ne soit pas placé en série.

Retirez l’électrode de la pince de la table de soudage et maintenez doucement l’électrode avec de grandes pinces, car il est facile pour les électrodes de perdre leur forme lors du chauffage du tube rétractable. Utilisez une bonne pince de conductivité thermique avec un peu plus de force. Allumez le conduit d’air et chauffez jusqu’à ce qu’une température de 320 degrés Celsius soit atteinte.

Soufflez le tube thermorétractable pendant plusieurs secondes jusqu’à ce qu’il soit serré. Renforcez l’électrode avec un adhésif thermofusible. Tenez les deux fils de tungstène et tordez-les ensemble, en gardant leurs extrémités séparées.

Coupez les fils de tungstène torsadés à environ 10 millimètres de longueur afin que la séparation aux extrémités ne dépasse pas 0,5 millimètre. Vérifiez les électrodes avec un multimètre en plaçant une barre du multimètre sur le côté non soudé des goupilles de corde et en touchant doucement l’extrémité du fil de tungstène ou du fil d’argent à l’autre barre. Vérifier si le circuit est lisse.

Assurez-vous que les lignes ne sont pas placées en série. Décollez cinq millimètres de la peau isolante à chaque extrémité pour exposer le fil métallique à l’intérieur. Ajouter une section de tube thermorétractable à chaque fil de démarrage.

Soudez chaque fil avec la fiche du connecteur de périphérique EEG. Rétrécir le tube thermorétractable avec de l’air chaud. Ajouter une section de tube thermorétractable à chaque fil de rotor.

Vissez les parties conductrices des fils rouges et oranges ensemble et soudez-les à un joint et à l’en-tête pour qu’ils s’adaptent à la goupille de la corde. Soudez les deux autres fils de l’en-tête à chaque joint. Pesez la souris.

Lorsque la souris est complètement anesthésiée, rasez les poils de l’œil à la région de l’oreille avec un rasoir. Fixez la souris sur le cadre stéréotaxique. Placez les dents supérieures antérieures dans la barre d’incisive et insérez les deux barres d’oreille à des profondeurs égales dans les oreilles.

Appliquez une pommade oculaire à l’érythromycine sur les yeux pour prévenir la sécheresse et la cécité causées par une lumière vive pendant la chirurgie. Désinfectez la zone chirurgicale au moins trois fois avec des écouvillons alternés d’iodophor et d’alcool à 75%. Faites une incision longitudinale pour exposer complètement la zone chirurgicale ou faites une incision triangulaire tant qu’elle expose les fontanelles antérieure et postérieure et les sites d’implantation des électrodes.

Rouler un petit morceau de coton en boule et le mouiller avec 3% de peroxyde d’hydrogène. Retirez les tissus mous attachés au crâne en frottant doucement la zone exposée avec une petite boule de coton jusqu’à ce que les fontanelles antérieure et postérieure soient visibles. Ajustez les hauteurs antérieure et postérieure de sorte que la fontanelle antérieure et postérieure soit horizontale.

Considérons la position de la fontanelle antérieure comme étant l’origine des axes. Fixez une vis en acier inoxydable au crâne cérébelleux gauche. Réglez les coordonnées de l’allumage de l’amygdale à partir du bregma et ajustez le dispositif stéréotaxique pour localiser cet endroit et le marquer.

Percez un trou sur la tache de marche avec une perceuse à crâne de 0,5 millimètre de diamètre. Fixez les électrodes à la tige de localisation de l’appareil stéréotaxique. Placez l’électrode verticalement au-dessus du trou et abaissez lentement la position à moins 4,9 millimètres.

Enroulez trois fois le fil d’argent autour de la vis. Veillez à ne pas secouer le corps de l’électrode pendant le fonctionnement. Mélangez le ciment dentaire et appliquez-le doucement sur l’électrode et la surface du crâne.

Lorsque le ciment dentaire durcit, modifiez l’extérieur jusqu’à ce que le ciment qui entoure l’électrode fixe se transforme en cône. Libérez ensuite l’électrode du dispositif stéréotaxique. Retirez la souris et replacez-la dans la cage.

Le garder séparé des autres souris. Placez la souris dans une boîte personnalisée avec des câbles pantouflants reliant l’électrode sur la tête de la souris et le dispositif EEG. Faites passer le câble à travers un trou dans le couvercle de la boîte et ajustez la longueur laissée dans la boîte pour permettre à la souris de se déplacer librement.

Allumez l’appareil EEG et assurez-vous qu’il fonctionne correctement. Réglez les paramètres du stimulateur pour fournir des impulsions d’ondes carrées monophasiques d’une milliseconde à 60 hertz pendant une durée de train d’une seconde pendant 10 cycles de stimulation. Commencez avec une intensité de courant de 50 microampères pour la première stimulation.

Surveiller l’EEG après la décharge caractérisée par des pics à haute fréquence. Si aucune décharge n’est observée, ajoutez 25 microampères au stimulus suivant et continuez ce processus toutes les 10 minutes jusqu’à ce qu’une décharge après soit observée et dure cinq secondes. Stimulez la souris avec l’intensité de courant déterminée toutes les 15 minutes, pas plus de 20 fois par jour.

Surveillez les réponses comportementales au stimulus. La chirurgie d’implantation d’électrodes a été réalisée sur six souris adultes adultes C57 noires 6 en bonne santé et une stimulation électrique a été effectuée deux semaines après la chirurgie. Le niveau de crise comportementale a progressivement augmenté avec l’augmentation du nombre de stimuli et le nombre de stimuli requis pour un allumage complet a été enregistré.

L’EEG après les décharges a duré de cinq à 15 secondes. Puis les décharges spontanées intracrâniennes se sont intensifiées et les symptômes comportementaux ont commencé. La durée des crises était généralement inférieure à une minute, ce qui réduit le risque de décès par convulsions graves entraînant une apnée.

L’expression de c-Fos dans le tissu cérébral a été détectée par immunohistochimie deux heures après l’allumage complet. Les résultats montrent que l’expression de c-Fos dans l’amygdale ipsilatérale a significativement augmenté en vérifiant la faisabilité de ce modèle. La séparation des extrémités du fil de tungstène ne doit pas dépasser la moitié des millimètres, sinon elle ne passera pas à travers le trou cérébral.

La longueur de l’électrode ne doit pas être trop longue, sinon cela affectera l’activité des souris.