Préparation standardisée de l’anneau coronaire de rat et enregistrement en temps réel des changements de tension dynamiques le long du diamètre du vaisseau

Ce protocole présente en détail la localisation, la séparation et la fixation de l’anneau musculaire des artères coronaires de rat. Fournir une nouvelle méthode pour les mécanismes, l’exploration et le traitement de diverses maladies cardiovasculaires. Le système est adapté à l’enregistrement stable des changements dynamiques de la tension artérielle in vitro, en lisant en diamètre de 60 micromètres à 10 millimètres.

Nous suggérons que les novices comprennent d’abord avec précision l’emplacement anatomique de chaque vaisseau et puissent commencer par un vaisseau légèrement plus grand tel que l’artère thoracique et l’artère mésentérique. Après avoir dissocié et retiré le cœur, commencez par drainer le sang résiduel de toutes les cavités cardiaques en serrant légèrement avec des pinces en plastique médicales. Placez rapidement le cœur prétraité dans une boîte de Pétri contenant 95% d’oxygène et 5% de dioxyde de carbone saturé de solution saline physiologique à quatre degrés Celsius, ayant une valeur de pH de 7,40.

Pour identifier avec précision la position anatomique des artères coronaires, ajustez la posture du cœur isolé au microscope optique selon le schéma schématique. Coupez les cavités ventriculaires gauche et droite le long du septum inter ventriculaire à partir de la racine de l’artère pulmonaire avec des ciseaux chirurgicaux et une pince à épiler. Pour dissocier les artères coronaires gauche et droite du tissu myocardique, disséquez le ventricule droit sous un microscope anatomique optique pour exposer complètement la branche de l’artère coronaire droite.

Ensuite, identifiez la position de l’artère coronaire gauche en faisant pivoter le tissu cardiaque de 45 degrés dans le sens des aiguilles d’une montre. Après avoir retiré le tissu myocardique collant environnant, discernez explicitement les artères coronaires gauche et droite pulsées. Séparez immédiatement les artères coronaires au milieu et immergez-les complètement dans une solution saline physiologique à quatre degrés Celsius.

Acquérir un anneau artériel d’environ deux millimètres en coupant verticalement l’artère détachée avec des ciseaux anatomiques pour enregistrer la tension vasculaire sous différents stimuli. Préparez deux fils en acier inoxydable de deux centimètres et pré-trempez dans une solution saline physiologique de quatre degrés Celsius saturée de 95% d’oxygène et de 5% de dioxyde de carbone. Passez les deux fils parallèlement à travers l’anneau artériel avec la direction du vaisseau sous un microscope anatomique optique et avec des fils de longueur égale exposés aux deux extrémités de la cavité vasculaire.

Fixez l’anneau artériel avec le fil d’acier à l’avant et à l’arrière dans le bain de la micrographie de fil remplie de solution de sel physiologique bouillonnante avec 95% d’oxygène et 5% de dioxyde de carbone. Faites pivoter le bouton de vis horizontal pour un espacement approprié entre l’avant et l’arrière afin que les deux fils soient horizontaux et que l’anneau artériel soit dans un état naturel de relaxation. Après avoir installé le bain DMT sur l’appareil thermostatique, ouvrez le logiciel d’acquisition de données pour vous assurer que le signal de chemin correspondant a été enregistré.

Définissez les paramètres. Atteindre la tension initiale optimale de l’anneau artériel en appliquant une tension raisonnable le long du diamètre du vaisseau. À ce stade, réglez la valeur de tension vasculaire affichée sur zéro.

Ensuite, appliquez un stimulus d’impulsion de Newton de trois millis sur l’anneau artériel en faisant pivoter l’axe en spirale du bain. Cliquez sur l’écran LCD pour le régler sur zéro milli Newton et le maintenir pendant une heure. Après une incubation d’une heure dans un tampon de solution saline physiologique saturée en oxygène à 37 degrés Celsius pH 7,40, réglez à nouveau la valeur de tension à zéro milli Newton sur le panneau de commande de tension de la micrographie à fil.

Effectuer l’activité contractile de l’anneau artériel coronaire avec la technique du myographe filaire et valider en trois opérations distinctes en stimulant avec 60 millimolaires de solution d’ions potassium pendant 10 minutes chacune. Après chaque stimulation, rincez le bain avec la solution de sel physiologique saturée d’oxygène jusqu’à ce que le tonus vasculaire revienne à son état initial. Ajouter 0,3 micromolaire U46619 au bain et observer pendant 10 minutes.

Ajouter une apigénine micromolaire et observer les effets vasculaires. Lorsque la dilatation atteint un plateau, ajoutez la concentration suivante. Ajouter une apigénine micromolaire à une solution pré-rétrécissante de potassium de 60 millimolaires pour observer l’effet vasculaire.

Lorsque la dilatation atteint un plateau, ajoutez la concentration suivante. Ajouter 28 millimolaires d’ion potassium à l’anneau vasculaire au repos. Lorsque la contraction atteint un plateau, ajoutez la concentration suivante.

Ajouter 0,01 micromolaire U46619 à l’anneau vasculaire au repos. Lorsque la contraction atteint un plateau, ajoutez la concentration suivante. Après qu’une tension initiale de trois milli Newton a été appliquée à l’anneau artériel, sa tension a dépassé plus de deux milli Newton en appliquant une concentration d’ions potassium de 60 millimolaires en parallèle trois fois.

Ainsi, les procédures ci-dessus avaient abouti à un anneau coronaire isolé avec une excellente activité physiologique. La concentration cumulative d’ions potassium, ou U46619, a été ajoutée au bain de DMT620M, entraînant une augmentation du tonus vasculaire in vitro en fonction de la concentration. La concentration suivante d’ion potassium ou U46619 a été ajoutée lorsque l’effet de vasoconstriction a atteint un plateau.

Pour les anneaux coronaires isolés rétrécis par l’ion potassium et l’U46619, le médicament test apigénine a provoqué une vasodilatation d’une manière étonnamment dépendante de la concentration. Le cœur est disséqué le long du septum ventriculaire à partir de la racine de l’artère pulmonaire, exposant et séparant deux millimètres d’anneau musculaire coronaire. Après cette procédure, nous pouvons enregistrer la tension vasculaire dans les microvaisseaux rétiniens, la fonction rénale, l’artère rénale et dans l’artère cérébrale moyenne.

Une dynamique de région de 60 micromètres à 10 millimètres.