Génération d’un modèle de décidualisation artificielle de souris avec ovariectomie pour la recherche sur la décidualisation de l’endomètre

L’altération de la décentralisation conduit à des virus de troubles de l’endomètre tels que dans la fatalité, une fausse couche récurrente. Cette méthode fournit un modèle animal bon et fiable pour l’étude de la décentralisation de l’endomètre. Ce modèle de décentralisation artificielle avec ovariectomie peut éviter l’influence de l’angéline sur les hormones, ce qui peut souvent donner des résultats hautement reproductibles avec des différences mineures au sein du groupe.

Pour commencer à stériliser les instruments chirurgicaux avec un stérilisateur à haute température et haute pression un jour avant l’opération. Appliquez la pommade protectrice pour les yeux sur les globes oculaires pour prévenir la sécheresse pendant l’anesthésie. Démarrez l’opération lorsque les souris sont complètement anesthésiées.

Placez les souris en position couchée sur la surface d’opération et rasez les poils sur le dos après les avoir mouillés avec de l’eau savonneuse. Désinfectez la peau avec de l’éthanol à 70%. Trouvez le site d’incision de l’opération à 0,5 centimètre sur le bord supérieur de la racine de la cuisse des deux membres postérieurs parallèles à la colonne vertébrale.

Prenez le site d’incision comme centre et désinfectez la zone d’incision avec de l’iodophor, trois fois. Faites une incision longitudinale d’environ 0,5 à un centimètre à l’aide de ciseaux. Coupez le fascia et séparez passivement les muscles avec une pince à épiler.

Trouvez un morceau du coussinet de graisse blanche dans le champ d’incision près du pôle inférieur du rein à travers la fine couche musculaire. Serrez la masse grasse avec des clips hémostatiques et tirez l’ovaire enveloppé par le coussinet graisseux hors de l’incision. Serrez la jonction de l’ovaire et des trompes de Fallope avec une pince à épiler incurvée et retirez l’ovaire le long du pédicule ovarien avec des ciseaux.

Arrêtez le saignement à l’aide d’un stylo d’électrocoagulation ou d’une aiguille d’une seringue d’un millilitre chauffée sur la lampe à alcool. Rincez l’incision chirurgicale avec une solution saline normale pour empêcher l’adhésion des tissus. Utilisez une suture 4-0 pour semer le muscle et la peau respectivement et désinfectez à nouveau l’incision chirurgicale avec de l’iodophore.

Placez les souris en position couchée dans la cage et réanimez-les dans un incubateur à 25 degrés Celsius. Equipé d’une source lumineuse et d’un système de ventilation pendant environ deux heures. Faites attention aux souris après l’opération.

Remettez-les seuls dans leur lieu d’alimentation d’origine jusqu’à ce qu’ils se rétablissent complètement et donnez-leur suffisamment d’eau et de nourriture. Injectez par voie sous-cutanée 100 nanogrammes d’œstrogènes dans 50 microlitres d’huile de sésame dans chaque souris pendant trois jours suivis de deux jours de repos. Injectez un milligramme de progestérone et 10 nanogrammes d’œstrogènes dans 50 microlitres d’huile de sésame dans chaque souris pendant trois jours supplémentaires.

Faire fonctionner les souris pour induire le modèle de résiduisation artificielle six heures après la troisième injection combinée d’œstrogène progestérone. Trouvez la corne de l’utérus à l’extrémité inférieure des trompes de Fallope et injectez 20 microlitres d’huile de sésame lentement le long de la corne utérine. Repoussez le tissu, suturez l’incision et laissez la souris récupérer.

Fixez trois à cinq millilitres de tissu utérin avec 10% de formol incorporé dans de la paraffine et sectionnez-les. Colorer les sections avec de l’hématoxyline et de l’éosine pour observer les changements morphologiques. Incorporer trois à cinq millimètres supplémentaires de tissu utérin dans un composé à température de coupe optimale congeler dans de l’azote liquide et conserver dans un congélateur à moins 80 degrés Celsius.

Couper le tissu congelé en 10 micromètres et détecter l’activité de la phosphatase alcaline dans le tissu utérin par la méthode de couplage azoïque. La morphologie générale de l’utérus artificiel décentralisé de souris induite par l’huile est plus proche de celle de l’utérus en gestation. Le corps utérin devient épais et la cavité utérine devient plus petite que le côté non induit.

Le volume et le poids de la corne utérine induite sont significativement plus élevés que ceux du côté non induit. La coloration de l’hématoxyline et de l’éosine du tissu utérin a montré que les glandes disparaissent et que les cellules stromales de l’endomètre sur le déchiré induit se différencient en grandes cellules déciduales rondes cytoplasmiques et multinucléées avec des limites cellulaires peu claires. Les coupes latérales non induites montrent la morphologie du tissu endométrial dans un état physiologique normal.

Le résultat de la méthode de couplage azoïque a montré que la teneur en phosphatase alcaline du côté induit par l’huile était significativement plus élevée que celle du côté non induit. Les résultats de la QPCR ont montré que l’expression de l’ARNm de PRL-8-A-2, ALPL et IGFBP-1 dans la corne induite était significativement plus élevée que celle dans la corne non induite, suggérant que l’huile peut induire une décentralisation artificielle chez la souris. La supplémentation en homo est un long processus qui nécessite une attention particulière à la contamination entre homos, ce qui est la clé du succès.

Sur la base de ce modèle, une injection de corne utérine d’adénovirus peut être effectuée, ce qui permet d’étudier le mécanisme pertinent de molécules spécifiques régulant la résidualisation.