Analyse du liquide synovial pour identifier l’arthrose

L’analyse du liquide synovial peut révéler le degré d’inflammation et la présence de cristaux pathogènes lors de l’évaluation initiale du patient présentant des symptômes musculo-squelettiques et des épanchements articulaires. Le principal avantage de cette technique est sa simplicité et sa fiabilité. En quelques étapes, le clinicien peut obtenir des informations diagnostiques importantes sur la maladie du patient.

L’identification de cristaux spécifiques est vitale pour le diagnostic et le traitement. Les cristaux d’urate indiquent la goutte, tandis que le pyrophosphate de calcium et d’autres cristaux de calcium indiquent des arthropathies liées au calcium ou une forme plus grave d’arthrose. Pour commencer, prélevez l’échantillon de liquide synovial recueilli lors de l’arthrocentèse des articulations enflées des patients.

Annoter le volume de l’échantillon en millilitres et le transférer séparément dans un tube contenant de l’EDTA anticoagulant et un autre tube sans aucun additif. Dans les cas suspects d’infection, transférer de manière aseptique quelques millilitres de l’échantillon de liquide synovial dans un flacon de culture pour des tests microbiologiques. Pour examiner l’échantillon macroscopiquement, prenez un tube contenant l’échantillon et définissez la couleur de l’échantillon, qui peut aller du jaune pâle au jaune foncé.

Notez la présence de sang, le cas échéant. Définir le degré de clarté de l’échantillon en l’observant dans le rétroéclairage et en déterminant la facilité de lecture d’une page imprimée à travers le tube contenant l’échantillon. Évaluez ensuite la viscosité de l’échantillon en le faisant couler à partir d’une pipette jetable.

Alors que l’apparition d’une longue chaîne de liquide indique une viscosité élevée, la formation de gouttes indique une faible viscosité. Observez l’échantillon à travers le tube avec de la lumière en arrière-plan pour détecter la présence de matières particulaires, y compris des fragments de tissu ou de la fibrine. Pour déterminer le nombre total de globules blancs, prélever 0,5 microlitre de l’échantillon dans le tube contenant de l’EDTAA à l’aide d’une pipette Malassez-Potain.

Utilisez la même pipette pour aspirer 9,5 microlitres de solution de bleu de méthylène à 0,1%. Mélanger l’échantillon et la solution de bleu de méthylène dans la pipette par inversion douce. Jetez les premières gouttes avant de verser le mélange dans la chambre de comptage d’un hémocytomètre.

Maintenant, comptez les cellules dans deux carrés consécutifs sur neuf et multipliez le nombre obtenu par 100. Exprimez le nombre total de globules blancs en nombre de leucocytes par millimètre cube. Utilisez l’échantillon de liquide synovial du tube sans aucun additif pour déterminer le nombre différentiel de globules blancs des échantillons de liquide synovial.

Pour déterminer le nombre différentiel de cellules à l’aide de la coloration supravitale, prenez une lame prête à l’emploi pré-enduite de violet cristallin et de bleu de méthylène et placez une petite goutte d’échantillon au centre de la lame. Ensuite, couvrez la goutte d’échantillon avec un bordereau de couverture et placez une goutte d’huile d’immersion pour microscope sur la lame. Pour utiliser la coloration traditionnelle pour estimer le nombre de cellules différentielles, commencez par mettre une petite goutte de l’échantillon à la fin d’une lame propre.

Utilisez maintenant une deuxième diapositive ou un caphousse pour étaler la goutte le long de la glissière avec un mouvement vers l’avant. Laissez le frottis sécher à l’air. Examinez la lame contenant le frottis séché à l’air sous l’objectif d’immersion dans l’huile de 1 000X.

Estimer le nombre différentiel de cellules en comptant 100 cellules consécutives tout en distinguant les cellules polymorphonucléaires, les monocytes et les lymphocytes les uns des autres. Nettoyez une lame de verre avec du papier optique ou souple imbibé d’éthanol. Appliquez une petite goutte de l’échantillon non mélangé avec un additif sur la lame de verre et recouvrez-la d’une lame-couverture avant de placer la lame sous le microscope.

Concentrez la lame sous le microscope à l’aide d’un objectif de grossissement de faible puissance et examinez-la attentivement sous un champ lumineux avec un objectif 40X. Regardez à l’intérieur et à l’extérieur des cellules pour identifier les cristaux en fonction de leur taille et de leur forme, qui peuvent être rhomboïdales, en forme d’aiguille ou de tige. Insérez ensuite le filtre polarisant entre la source lumineuse et l’échantillon.

Pour créer un arrière-plan sombre, faites pivoter le polariseur jusqu’à ce que son axe optique soit perpendiculaire à l’analyseur. Une fois qu’un cristal biréfringent a été identifié, insérer le compensateur entre le polariseur et l’échantillon et le déplacer parallèlement ou perpendiculairement à l’axe optique du cristal. Observez la couleur révélée par le cristal.

Pour la coloration au rouge d’alizarine, mélanger une goutte de l’échantillon de liquide synovial avec un volume égal de solution de rouge d’alizarine préalablement préparée sur une lame propre. Couvrir la lame avec une lame-couverture et examiner à un grossissement de 400X au microscope pour identifier les cristaux. Les caractéristiques macroscopiques des échantillons de liquide synovial indiquaient le degré d’inflammation.

Un échantillon de couleur jaune pâle et plus clair est généralement associé à des conditions non inflammatoires telles que l’arthrose. D’autre part, un échantillon de couleur jaune foncé et d’aspect trouble indique la présence de cellules, de débris, d’acide hyaluronique et de fragments de fibrine associés à des épanchements inflammatoires. Les leucocytes observés dans des échantillons de liquide synovial de patients atteints d’arthrose étaient principalement des monocytes et d’autres cellules mononucléaires comme les synoviocytes.

Des cristaux de pyrophosphate de calcium ont été détectés dans des échantillons de liquide synovial, indiquant des niveaux relativement plus élevés de cytokines inflammatoires. De plus, une coloration positive au rouge d’alizarine a révélé la présence de cristaux basiques de phosphate de calcium dans les échantillons. Il est très important d’examiner attentivement la lame sous une lumière ordinaire lors de la recherche de cristaux.

Rappelez-vous que les cristaux de pyrophosphate sont souvent faiblement biréfringents et peuvent être manqués sous une lumière polarisée. La présence de cristaux de calcium dans le liquide synovial et leur association avec une forme plus sévère de la maladie ont conduit les chercheurs à explorer de nouveaux mécanismes dans la pathogenèse et la progression de l’arthrose.