Manipulation génétique médiée par phage du spirochète de la maladie de Lyme Borrelia burgdorferi

Ce protocole est important car il décrit un autre outil important pour disséquer la biologie moléculaire de l’agent de la maladie de Lyme Borrelia burgdorferi. Le principal avantage de cette technique est qu’en utilisant la transduction de phage, elle fournit une méthode alternative pour introduire l’ADN dans le Borrelia burgdorferi sans nécessiter l’application d’une impulsion électrique, comme dans l’électroporation. Cette méthode pourrait être utilisée pour mieux comprendre les mécanismes moléculaires utilisés par Borrelia burgdorferi pour persister dans son cycle enzootique et finalement causer la maladie de Lyme chez l’homme.

Pour commencer, inoculez 150 microlitres du clone approprié de Borrelia burgdorferi dans 15 millilitres de BSK dans des tubes centrifugeuses coniques stériles étroitement coiffés pour le protocole de transduction. Ensuite, complétez le milieu avec la concentration appropriée d’antibiotiques ou une combinaison d’antibiotiques pour la sélection et le maintien de l’ADN hétérologue dans le clone de Borrelia burgdorferi et incuber l’échantillon à 33 degrés Celsius. Une fois la culture développée, centrifuger le volume approprié de culture à 6 000 G pendant 10 minutes.