Injection intracardiaque de cellules cancéreuses de la prostate humaine pour créer un modèle murin de xénogreffe de métastases osseuses

Cette méthode peut aider à produire un modèle idéal qui imite étroitement la progression naturelle des métastases osseuses des cellules cancéreuses de la prostate in vivo. Cette technique présente l’avantage d’une métastase osseuse et représente le processus naturel de métastases osseuses des cellules cancéreuses de la prostate in vivo. Cette technique profite à l’exploration des mécanismes moléculaires et à l’étude des effets thérapeutiques in vivo des métastases osseuses du cancer de la prostate.

Le jour de l’injection, prenez 80 à 90% de cellules PC3 marquées à la luciférase confluente cultivées dans une boîte de culture cellulaire de 10 centimètres et commencez à préparer les cellules pour l’injection en les lavant deux fois avec du PBS stérile à froid. Trypsiniser les cellules lavées avec 1,5 millilitre de trypsine 0,25% pendant trois minutes, après quoi éteindre la trypsine en ajoutant six millilitres de milieu F12 contenant 10% de sérum et recueillir les cellules dans un tube centrifuge de 15 millilitres. Transférez 20 microlitres de la suspension cellulaire collectée dans une plaque de comptage de cellules et calculez la concentration de la cellule à l’aide d’un compteur de cellules automatique.

Ensuite, centrifuger les cellules à température ambiante pendant cinq minutes à 800 G.Jeter le surnageant à l’aide d’une pipette et remettre en suspension la pastille de cellule dans un milieu F12 pour obtenir la densité cellulaire finale souhaitée. Maintenant, transportez les cellules à la salle d’opération et effectuez l’injection cellulaire dans les deux heures. Gardez les cellules sur la glace jusqu’à l’injection.

Pour commencer la chirurgie, placez la souris anesthésiée en décubitus dorsal et immobilisez les deux membres supérieurs en les étirant perpendiculairement loin de la ligne médiane. À l’aide de ruban adhésif chirurgical, immobiliser la souris de l’abdomen vers le bas sans appuyer fort et déplacer les organes internes. Désinfectez la peau du thorax à l’aide d’un tampon à 70 % d’éthanol.

Ensuite, palper le milieu de la paroi thoracique antérieure pour localiser le processus xiphoïde de la souris dans la dépression à l’extrémité inférieure du sternum moyen. Étiquetez le point le plus inférieur du processus xiphoïde. Ensuite, en palpant à partir du milieu de la paroi thoracique antérieure, localisez l’encoche jugulaire de la souris dans la dépression centrale au bord supérieur du manubrium et marquez le point le plus inférieur de l’encoche jugulaire.

Maintenant, localisez et marquez le point médian entre les deux marques précédentes, légèrement vers la droite et juste au-dessus du cœur dans le troisième espace intercostal. C’est le point d’injection. Bien mélanger la suspension cellulaire avant de charger 200 microlitres de la suspension dans une seringue d’un millilitre montée avec une aiguille de calibre 26.

Laissez un peu d’air dans la seringue entre le piston et la suspension pour permettre l’entrée de sang pulsé pendant l’injection. Pour effectuer l’injection, insérez verticalement l’aiguille à travers le site d’injection. Si l’extrémité de l’aiguille est correctement insérée dans le ventricule gauche, du sang pulsé rouge vif sera visible dans le moyeu de l’aiguille.

Réessayez l’injection si les pulsations sanguines ne sont pas visibles ou si le sang coagule. Une fois l’aiguille insérée correctement, injectez 100 microlitres de la suspension cellulaire très lentement pendant 40 à 60 secondes avec une main stable. Une fois l’injection terminée, rétractez l’aiguille tout en appliquant une pression sur le site d’injection avec un coton-tige sec pendant 15 secondes pour assurer l’hémostase.

Remettez la souris dans la cage propre et surveillez l’animal jusqu’à ce qu’il se rétablisse complètement de l’anesthésie. L’imagerie par bioluminescence réalisée 24 heures après l’injection de cellules PC3 marquées à la luciférase dans la souris a montré des signaux provenant de tout le corps de l’animal indiquant la présence de cellules cancéreuses dans la circulation systémique. Des lésions métastatiques sont apparues dans les membres postérieurs de la souris deux semaines après l’injection.

Les lésions métastatiques se sont agrandies au fil du temps et ont commencé à apparaître dans d’autres sites. Les lésions métastatiques induites par les cellules cancéreuses de la prostate dans les os ont ensuite été détectées à l’aide d’une imagerie radiographique qui a montré une destruction osseuse du tibia proximal de l’animal. La même chose a également été confirmée par micro-tomodensitométrie.

Les lésions métastatiques ont ensuite été confirmées dans les tissus incorporés dans la paraffine par coloration à l’hématine et à l’éosine. Un site d’injection précis est très important pour assurer le taux de réussite de ce modèle. Cela peut être réalisé par la pratique.