Name: CLHP couplée à une empreinte chimique pour la reconnaissance multi-motifs afin d’identifier l’authenticité de Clematidis armandii caulis (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-11T14:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 29 s
Description: Apprenez à identifier l'authenticité de Clematidis armandii caulis par CLHP couplée à une empreinte chimique multi-motifs. Cette méthode permet de différencier les échantillons authentiques des adultérants pour la recherche sur la qualité des matériaux médicinaux.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ce travail a été soutenu par le projet de l’Administration de la médecine traditionnelle chinoise du Sichuan (n° 2020JC0088, n° 2021MS203).

1. Méthodes de détection chimique des empreintes digitales
<ol><li>Conditions chromatographiques<ol><li>Préparer la phase mobile acétonitrile (A)/eau (B). Définissez un programme de gradient comme suit dans le logiciel HPLC : 0-20 min, 3%A-10%A ; 20-25 min, 10%A-13%A; 25-65 min, 13%A-25%A; 65-75 min, 25%A-40%A; 75-76 min, 40%A-3%A; 76-85 min, 3%A-3%A.</li>
		<li>Maintenir le débit de la phase mobile à 1,0 mL/min.</li>
		<li>Effectuer la séparation chromatographique sur une colonne C18 (250 mm x 4,6 mm, 5 μm) maintenue à 30 °C.</li>
		<li>Réglez le volume d’injection sur 10 μL.</li>
		<li>Détecter les échantillons à une longueur d’onde de 205 nm. REMARQUE: Pour les réglages spécifiques des conditions chromatographiques, reportez-vous aux modes opératoires du logiciel de travail de chromatographie liquide haute performance (Table des matériaux).</li>
	</ol></li>
	<li>Préparation de la solution échantillon<ol><li>Broyer les matières premières jusqu’à ce qu’elles atteignent une taille de particules uniforme en les faisant passer à travers un treillis en nylon d’un diamètre intérieur de 850 μm ± 29 μm.</li>
		<li>Placer 2 g de matière première broyée (pesée avec précision) dans une fiole conique de 50 ml munie d’un bouchon et ajouter 50 ml de méthanol. Placer le bouchon sur la fiole et ultrasons (600 W, 40 kHz) pendant 30 min.</li>
		<li>Ensuite, refroidir le ballon à température ambiante (RT). Pesez à nouveau les échantillons et rattrapez le poids initial en remplaçant l’extractant perdu.</li>
		<li>Verser 4 mL de la solution de méthanol contenant les extraits médicinaux dans une fiole jaugée de 10 mL. Ajouter 6 mL deH2O, mélanger et laisser reposer pendant 10 min.</li>
		<li>Enfin, filtrez le surnageant à travers une membrane filtrante de 0,45 μm et placez-le en veille.</li>
	</ol></li>
	<li>Validation des méthodes de détection des empreintes digitales<ol><li>Préparer l’échantillon comme décrit ci-dessus (étape 1.2) et le soumettre à une analyse CLHP (étape 1.1) six fois par jour. Pour évaluer la précision, calculez l’écart type relatif (DSR) du temps de rétention relatif et des zones de pics relatives comme décrit à l’étape 1.3.5.</li>
		<li>Évaluer la stabilité de la solution échantillon en analysant la même solution échantillon stockée à TA pendant 0, 2, 4, 6, 8, 12 et 24 h, et calculer la DSR du temps de rétention relatif et des zones de pics relatives comme décrit à l’étape 1.3.5.</li>
		<li>Prélever six répétitions du même échantillon (CMT-4), préparer la solution échantillon selon la procédure ci-dessus (étape 1.2) et détecter son empreinte dans la CLHP suivant l’étape 1.1. Calculer la DSR du temps de rétention relatif et des zones de pic relatives, et évaluer sa répétabilité comme décrit à l’étape 1.3.5.</li>
		<li>Utilisez ensuite le pic numéro 10 de la figure 1B comme pic de référence et calculez le DSR du temps de rétention relatif et de la surface relative des pics de chaque pic commun, comme décrit à l’étape 1.3.5.</li>
		<li>Utilisez les formules mentionnées ci-dessous pour calculer le temps de rétention relatif et la surface relative des pics de chaque pic commun : T re = T caractéristique/Tréférence Are = Une caractéristique/Uneréférence Où T re = temps de rétention relatif, T caractéristique = temps de rétention du pic caractéristique, T référence = temps de rétention du pic de référence, A re = surface relative du pic, A caractéristique = surface du pic caractéristique et A référence = surface du pic de référence. NOTE: L’établissement des empreintes digitales de la médecine traditionnelle chinoise nécessite généralement de sélectionner un pic chromatographique facile à obtenir et à haute résolution. Ceci est utilisé comme pic de référence pour identifier les empreintes digitales et examiner leur stabilité et leur reproductibilité.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Mise en place de l’analyse des empreintes digitales et de la similitude de Chuanmutong
<ol><li>Utilisez 10 lots d’échantillons authentiques et cinq lots d’adultérants tels que Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang (CC), Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils. (DC), Clematis peterae Hand.-Mazz. (DE), Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils (XS), et Clematis finetiana Levl. et Vaniot. (SMT) comme échantillons pour l’analyse des empreintes digitales.</li>
	<li>Préparez les exemples de solutions comme décrit à l’étape 1.2. Effectuer l’analyse des empreintes digitales de toutes les solutions d’échantillons par CLHP dans les conditions décrites à l’étape 1.1.</li>
	<li>Importer les données pertinentes dans le système d’évaluation de la similarité des empreintes chromatographiques de la médecine traditionnelle chinoise (SESCF-TCM, version 2012). Le système désignera les pics avec une hauteur raisonnable et une bonne résolution dans les chromatogrammes de tous les échantillons comme pics communs. REMARQUE: Le logiciel SESCF-TCM peut être téléchargé après enregistrement sur le site Web de la Commission chinoise de pharmacopée (http://114.247.108.158:8888/login).<ol><li>Dans le logiciel, cliquez sur le bouton Définir le spectre de référence dans le menu.</li>
		<li>Ensuite, dans la fenêtre Paramètres des paramètres , définissez la largeur de la fenêtre temporelle sur 0,5 et sélectionnez Méthode de génération du spectre de contrôle comme méthode médiane.</li>
		<li>Cliquez sur Étalonnage multipoint dans le menu principal, puis sélectionnez Correspondance des pics comme Correspondance des pics à spectre complet.</li>
		<li>Enfin, cliquez sur Générer le contrôle pour générer l’empreinte chromatographique de référence de l’espèce authentique de Chuanmutong.</li>
	</ol></li>
	<li>Importer le temps de rétention et la zone de pic de 10 lots d’échantillons authentiques de Chuanmutong et de cinq lots d’adultérants dans SESCF-TCM pour analyse. Les opérations spécifiques sont les suivantes :<ol><li>Dans le logiciel, cliquez sur le bouton Définir le spectre de référence dans le menu principal.</li>
		<li>Dans la fenêtre Paramètres des paramètres , définissez l’empreinte chromatographique de référence de l’espèce authentique de Chuanmutong comme référence, sélectionnez la méthode de génération du spectre de contrôle comme méthode médiane et définissez la largeur de la fenêtre temporelle sur 0,5.</li>
		<li>Cliquez sur Étalonnage multipoint dans le menu principal, puis sélectionnez Correspondance des pics comme Correspondance des pics à spectre complet.</li>
		<li>Enfin, cliquez sur Calculer la similarité pour calculer la similarité en fonction des empreintes digitales chromatogramme de référence de Chuanmutong. Enfin, calculez la similitude des empreintes digitales à l’aide du système d’évaluation chromatographique des empreintes digitales de la médecine chinoise (version 2012). REMARQUE : Pour les opérations spécifiques, reportez-vous aux spécifications d’exploitation du système d’évaluation des empreintes digitales chromatographiques de la médecine chinoise (version 2012).</li>
	</ol></li>
</ol>3. Analyse de reconnaissance multi-formes de l’empreinte digitale Chuanmutong
<ol><li>Analyse par grappes (AC)<ol><li>Utilisez les zones de pics de 12 pics communs dans les empreintes digitales de 10 lots d’échantillons authentiques de Chuanmutong et de leurs cinq lots d’adultérants comme variables, et saisissez-les dans un logiciel d’analyse statistique pour une analyse systématique en grappes (AC).</li>
		<li>Choisissez la méthode entre les groupes et utilisez le coefficient de corrélation de Pearson comme base de classification pour dessiner un diagramme d’analyse en grappes de Chuanmutong et de ses adultérants. Les opérations spécifiques sont les suivantes :<ol><li>Dans le logiciel d’analyse statistique, cliquez sur Fichier pour importer des données.</li>
			<li>Cliquez sur Analyse dans le menu, puis sur Regroupement de systèmes dans Classification.</li>
			<li>Sélectionnez la zone de pic commune comme variable et définissez le nombre de clusters sur quatre.</li>
			<li>Cliquez sur Méthode, sélectionnez la méthode de clustering comme Connexion inter-groupes, sélectionnez l’intervalle de mesure comme Corrélation de Pearson, puis cliquez sur OK pour dessiner la carte de l’autorité de certification.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>Analyse en composantes principales (ACP)<ol><li>Importez la surface de pic commune relative des variétés authentiques et de leurs adultérants dans le logiciel d’analyse pour l’analyse PCA, et utilisez la carte de score PCA pour évaluer la carte matricielle de score des différences d’échantillon. Les opérations spécifiques sont les suivantes :<ol><li>Ouvrez le logiciel d’analyse de données, cliquez sur Fichier dans le menu et créez un nouveau projet régulier. Importez la zone des pics de 12 pics communs dans une feuille de calcul (par exemple, format Excel) à partir du système HPLC. Cliquez ensuite sur Terminer pour terminer l’importation des données.</li>
			<li>Cliquez sur Nouveau pour créer un nouveau modèle afin de définir le type de modèle avec PCA. Cliquez sur Autofit et Add pour ajuster les données, puis cliquez sur Scores pour obtenir la carte des scores PCA.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>Analyse orthogonale partielle des moindres carrés (OPLS-DA)<ol><li>Utilisez la méthode d’analyse de discrimination des moindres carrés partiels orthogonaux avec mode supervision pour analyser plus en détail les pics de surface de pics communs relatifs des variétés authentiques de Chuanmutong et des adultérants et dessiner une carte de score de classification OPLS-DA de tous les échantillons. Les opérations spécifiques sont les suivantes :<ol><li>Dans un logiciel d’analyse de données, cliquez sur Fichier dans le menu pour importer un fichier et créer un nouveau projet régulier. Importez la zone de pics de 12 pics communs dans une feuille de calcul à partir du système HPLC, puis cliquez sur Terminer pour terminer l’importation des données.</li>
			<li>Cliquez sur Nouveau pour créer un nouveau modèle afin de définir le type de modèle avec PCA. Cliquez sur Autofit et Add pour ajuster les données. Cliquez ensuite sur Scores pour obtenir la carte des scores PCA.</li>
			<li>Cliquez sur Nouveau et choisissez Nouveau comme modèle un pour définir le type de modèle avec OPLS-DA.</li>
			<li>Cliquez sur Échelle et définissez le type avec Par pour tous. Cliquez d’abord sur Ajustement automatique , puis sur Scores pour obtenir la carte des scores OPLS-DA.</li>
		</ol></li>
		<li>Afin de déterminer l’influence de chaque pic commun à Chuanmutong sur ses résultats de classification et la différence entre les matériaux authentiques de Chuanmutong et les adultérants apparentés, utilisez l’importance variable dans la projection (VIP) pour l’analyse.</li>
		<li>Dessinez la carte VIP des différentes composantes de Chuanmutong. Utilisez la carte du PAAC qui en résulte pour évaluer l’incidence de chaque variable sur la classification et pour éliminer les composantes qui contribuent de façon significative aux différences entre les groupes. Les opérations spécifiques sont les suivantes :<ol><li>Dans le logiciel d’analyse de données, cliquez sur Analyse dans le menu et cliquez sur Permutations, définissez le nombre de permutations sur 200 et obtenez les R 2 et Q2 de la carte de score OPLS-DA.</li>
			<li>Cliquez sur VIP et choisissez VIP Predictive pour obtenir la carte VIP.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
</ol>4. Dosage du β-sitostérol à Chuanmutong par CLHP
<ol><li>Conditions chromatographiques (voir étape 1.1)<ol><li>Préparer la phase mobile : méthanol-eau (97:3).</li>
		<li>Réglez le débit de la phase mobile à 1,0 mL/min.</li>
		<li>Effectuer la séparation chromatographique sur une colonne C18 (250 mm x 4,6 mm, 5 μm) maintenue à 30 °C.</li>
		<li>Réglez le volume d’injection sur 10 μL.</li>
		<li>Détecter le composant à une longueur d’onde de 204 nm.</li>
	</ol></li>
	<li>Préparation de la solution échantillon<ol><li>Préparer la solution mère étalon de β-sitostérol (0,1 mg/mL) en dissolvant dans du méthanol une quantité pesée avec précision de l’étalon de référence correspondant.</li>
		<li>Broyer l’échantillon d’analyse de la matière première jusqu’à ce qu’il atteigne une taille de particules uniforme en faisant passer l’échantillon à travers le treillis en nylon d’un diamètre intérieur de 180 μm ± 7,6 μm.</li>
		<li>Placer 2 g de matière première broyée (pesée avec précision) dans une fiole à fond rond et y ajouter 50 ml de chloroforme.</li>
		<li>Connecter la fiole à un réfrigérant à reflux et la chauffer au bain-marie bouillant (ébullition modérée) pendant 60 min. Filtrer la solution d’extraction avec un papier filtre de 15-20 μm.</li>
		<li>Évaporer le filtrat jusqu’à quasi-sécheresse au bain-marie bouillant (ébullition modérée) pendant environ 10 min.</li>
		<li>Dissoudre le résidu et porter le volume à 5 mL avec du méthanol. Enfin, passez le surnageant à travers une membrane filtrante de 0,45 μm et placez-le en veille.</li>
	</ol></li>
	<li>Validation de la méthode<ol><li>Prélever la solution mère de β-sitostérol préparée à l’étape 4.2.1, la diluer avec du méthanol à 100 % et préparer des solutions à 100 μg/mL, 80 μg/mL, 60 μg/mL, 50 μg/mL, 40 μg/mL, 30 μg/mL et 20 μg/mL.</li>
		<li>Injecter les échantillons dans les conditions chromatographiques décrites à l’étape 4.1 pour déterminer la surface du pic, effectuer une analyse de régression avec la surface du pic au volume d’injection et obtenir l’équation de régression et le coefficient de corrélation pour évaluer sa linéarité.</li>
		<li>Préparer les échantillons comme décrit ci-dessus (étape 4.2) et les soumettre à une analyse CLHP (étape 4.1) six fois le même jour. Calculez ensuite le RSD des zones de pic pour évaluer la précision.</li>
		<li>Évaluer la stabilité de la solution échantillon en analysant les mêmes solutions d’échantillon stockées à TA pendant 0, 2, 4, 6, 8, 12 et 24 h, comme décrit à l’étape 4.1. Calculez ensuite la DSR des zones de crête comme décrit à l’étape 1.3.5.</li>
		<li>Examiner la répétabilité en dissolvant le même échantillon (CMT-4) dans un sextuplicate, préparé comme décrit à l’étape 4.2, et en le soumettant à une analyse CLHP comme décrit à l’étape 4.1. Calculez ensuite la DSR de la teneur en β-sitostérol dans six échantillons.</li>
		<li>Évaluer la précision de la méthode en utilisant la méthode d’addition standard. Pour cela, ajoutez des solutions de référence de β-sitostérol aux échantillons à 80%, 100% et 120% de la teneur en β-sitostérol et répétez chaque condition trois fois comme décrit à l’étape 4.1. Évaluer la précision de la méthode en calculant la récupération moyenne et la DSR. NOTE: La formule de calcul du taux de récupération (RR) est la suivante: RR % = [(M t - M 0) / Ms] × 100 Où M t = la qualité du β-sitostérol après addition de l’étalon, M 0 = la qualité de la solution échantillon et Ms = la qualité du β-sitostérol ajouté. </li>
	</ol></li>
	<li>Détermination de la teneur en β-sitostérol des échantillons<ol><li>Prélever 10 lots de matières médicinales chinoises authentiques et cinq lots d’adultérants apparentés pour préparer des solutions d’échantillon conformément à l’étape 4.2.</li>
		<li>Injecter ensuite chaque solution échantillon et solution de référence de β-sitostérol pour déterminer la surface du pic dans les conditions décrites à l’étape 4.1, et calculer la teneur en β-sitostérol de chaque échantillon en utilisant la méthode étalon externe en un point.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Chen, C. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aChen%2C+CR+%22Chinese+Medicine+Specimen+Picture+Book%22">Chinese Medicine Specimen Picture Book</a>. , Shanghai World Book Company. Shanghai. 116(1935).</li>
<li>Xiong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lignans+from+the+stems+of+Clematis+armandii+%28%26%2334%3BChuan-Mu-Tong%26%2334%3B%29+and+their+anti-neuroinflammatory+activities%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Lignans from the stems of Clematis armandii (&#34;Chuan-Mu-Tong&#34;) and their anti-neuroinflammatory activities.</a> Journal of Ethnopharmacology. 153 (3), 737-743 (2014).</li>
<li>Pan, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((a+lignan+from+the+Chinese+medicinal+plant+Clematis+armandii%2C+inhibits+A431+cell+growth+via+blocking+p70S6%2FS6+kinase+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+Cancer+Therapies%22%5BJournal%5D)">a lignan from the Chinese medicinal plant Clematis armandii, inhibits A431 cell growth via blocking p70S6/S6 kinase pathway.</a> Integrative Cancer Therapies. 16 (3), 351-359 (2017).</li>
<li>Chinese Pharmacopoeia Commission. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Pharmacopoeia+of+The+People%27s+Republic+of+China%3A+%28Edition+2020%29%22">Pharmacopoeia of The People's Republic of China: (Edition 2020)</a>. , The Medicine Science and Technology Press of China. China., Beijing. 38(2020).</li>
<li>Wang, D. G., Guo, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Textual+research+on+the+materia+medica+and+authenticity+of+Clematidis+armandii%5BTitle%5D)+AND+%22Lishizhen+Medicine+and+Materia+Medicine+Research%22%5BJournal%5D)">Textual research on the materia medica and authenticity of Clematidis armandii.</a> Lishizhen Medicine and Materia Medicine Research. 18 (11), 2696(2007).</li>
<li>Fang, Q. M., Zhang, M., Zhong, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+natural+resources+and+exploitation+of+Caulis+Clematidis+Armandii+in+Sichuan%5BTitle%5D)+AND+%22West+China+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">The natural resources and exploitation of Caulis Clematidis Armandii in Sichuan.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 20 (5), 404-406 (2005).</li>
<li>Bai, M. N., Dai, Y. X., Wang, Y., Ren, Y. Y., Tan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+on+the+identi%EF%AC%81cation+of+Caulis+Clematidis+Armandii%5BTitle%5D)+AND+%22Research+and+Practice+on+Chinese+Medicines%22%5BJournal%5D)">Study on the identiﬁcation of Caulis Clematidis Armandii.</a> Research and Practice on Chinese Medicines. 31 (3), 13-16 (2017).</li>
<li>Zhou, P. J., Li, X. F., Fu, D. H., Pu, X. Y., Zhu, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacognosy+identification+of+Ethnomedicine+Clematis+ranunculoides+Franchet%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Guangzhou+University+of+Traditional+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Pharmacognosy identification of Ethnomedicine Clematis ranunculoides Franchet.</a> Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine. 34 (3), 432-436 (2017).</li>
<li>Guo, J. L., Tang, Y., Pei, J., Wang, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+on+random+amplified+polymorphic+DNA+and+sequence+characterized+amplified+regions+of+Caulis+Clematidis+Armandii%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chengdu+Medical+College%22%5BJournal%5D)">Study on random amplified polymorphic DNA and sequence characterized amplified regions of Caulis Clematidis Armandii.</a> Journal of Chengdu Medical College. 6 (4), 283-286 (2011).</li>
<li>Liu, M. Z., Li, M. N., Yao, H., Liu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+identification+of+Clematidis+Armandii+Caulis+and+its+adulterants+and+closely+related+species+by+ITS2+sequence%5BTitle%5D)+AND+%22Global+Traditional+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Molecular identification of Clematidis Armandii Caulis and its adulterants and closely related species by ITS2 sequence.</a> Global Traditional Chinese Medicine. 4 (6), 446-450 (2011).</li>
<li>Liu, J. J., Chen, X., Wei, Z. Q., Li, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+constituents+and+identification+of+the+caules+of+Clematis+armandii+Franch.and+Clematis+montana+Buch.-Ham%5BTitle%5D)+AND+%22Natural+Product+Research+and+Development%22%5BJournal%5D)">Chemical constituents and identification of the caules of Clematis armandii Franch.and Clematis montana Buch.-Ham.</a> Natural Product Research and Development. 22 (6), 998-1000 (2010).</li>
<li>Yang, T. R., Xu, Z., Shi, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+four+compounds+from+Clematis+Montana%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Liaoning+University+of+Traditional+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Studies on four compounds from Clematis Montana.</a> Journal of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine. 10 (4), 142-143 (2008).</li>
<li>Yan, L. H., Xu, L. Z., Zhou, Z. M., Yang, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+constituents+from+stems+of+Clematis+armandii%28I%29%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Traditional+and+Herbal+Drugs%22%5BJournal%5D)">Chemical constituents from stems of Clematis armandii(I).</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 38 (3), 340-342 (2007).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traditional+uses%2C+phytochemistry%2C+pharmacology%2C+and+toxicology+of+Akebiae+Caulis+and+its+synonyms%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Traditional uses, phytochemistry, pharmacology, and toxicology of Akebiae Caulis and its synonyms: A review.</a> Journal of Ethnopharmacology. 277, 114245(2021).</li>
<li>Ye, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diuretic+effect+and+material+basis+of+Clematidis+Armandii+Caulis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22China+Journal+of+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">Diuretic effect and material basis of Clematidis Armandii Caulis in rats.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 44 (9), 1889-1894 (2019).</li>
<li>Kuang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consistency+study+of+Caulis+Clematidis+Armandii+and+its+traditionally+used+products+and+counterfeit+species+based+on+efficacy+and+pharmacognosy%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+and+Clinics+of+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">Consistency study of Caulis Clematidis Armandii and its traditionally used products and counterfeit species based on efficacy and pharmacognosy.</a> Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 36 (3), 115-121 (2020).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quality+assessment+of+Asarum+heterotropoides+var.+mandshuricum+based+on+HPLC+multi-component+determination+and+multiple+pattern+recognition+method+of+fingerprint%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Traditional+and+Herbal+Drugs%22%5BJournal%5D)">Quality assessment of Asarum heterotropoides var. mandshuricum based on HPLC multi-component determination and multiple pattern recognition method of fingerprint.</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 238-243 (2022).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+multi-components+of+Paeoniae+Alba+Radix+based+on+fingerprints+and+chemical+pattern+recognition%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Traditional+and+Herbal+Drugs%22%5BJournal%5D)">Determination of multi-components of Paeoniae Alba Radix based on fingerprints and chemical pattern recognition.</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 231-237 (2022).</li>
<li>Li, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+investigation+for+raw+and+processed+products+of+Euodiae+Fructus+based+on+high-performance+liquid+chromatography+fingerprints+and+chemical+pattern+recognition%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+%26+Biodiversity%22%5BJournal%5D)">Comparative investigation for raw and processed products of Euodiae Fructus based on high-performance liquid chromatography fingerprints and chemical pattern recognition.</a> Chemistry & Biodiversity. 18 (8), 2100281(2021).</li>
<li>Dong, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+on+suitable+distribution+areas+of+Kawa+Kimichi+produced+in+Sichuan+province-based+on+remote+sensing+and+GIS-A+case+study+of+Clematis+Armandii%5BTitle%5D)+AND+%22Modernization+of+Traditional+Chinese+Medicine+and+Materia+Medica-World+Science+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Study on suitable distribution areas of Kawa Kimichi produced in Sichuan province-based on remote sensing and GIS-A case study of Clematis Armandii.</a> Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology. 17 (11), 2398-2404 (2015).</li>
<li>Tang, S. W., Pei, J., Li, F. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+histological+identification+of+Chuanmutong%5BTitle%5D)+AND+%22West+China+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Morphological and histological identification of Chuanmutong.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 15 (1), 19-21 (2000).</li>
<li>Li, B., Chen, X., Fang, Q. M., Zhang, B. J., Wei, Z. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quality+Research+of+Chuanmutong%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Sichuan+of+Traditional+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Quality Research of Chuanmutong.</a> Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine. 27 (6), 58-60 (2009).</li>
<li>Wu, W. J., Wan, M. M., Cao, Y. H., Tan, R., Song, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+on+the+Quality+Standard+of+Chuanmutong%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Archives+of+Traditional+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Research on the Quality Standard of Chuanmutong.</a> Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine. 33 (2), 313-315 (2015).</li>
<li>Wei, Z. Q., Chen, X., Li, B., Dong, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+stigmasterol+in+Clematis+armandii+Franch+and+Clematis+montana+Buch-Ham.+by+HPLC%5BTitle%5D)+AND+%22Lishizhen+Medicine+and+Materia+Medica+Research%22%5BJournal%5D)">Determination of stigmasterol in Clematis armandii Franch and Clematis montana Buch-Ham. by HPLC.</a> Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 20 (3), 574-575 (2009).</li>
<li>Qing, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+oleanolic+acid+in+Caulis+clematidis+armandii+by+HPLC%5BTitle%5D)+AND+%22West+China+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Determination of oleanolic acid in Caulis clematidis armandii by HPLC.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 21 (3), 273-274 (2006).</li>
<li>Yang, S. D., Wang, R., Fu, D. Y., Guo, J. J., Tan, W. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+on+oleanolic+acid+in+caulis+clematidis+armandii+by+microwave+assisted+extraction-HPLC%2FMS%5BTitle%5D)+AND+%22Anhui+Academy+of+Agricultural+Sciences%22%5BJournal%5D)">Determination on oleanolic acid in caulis clematidis armandii by microwave assisted extraction-HPLC/MS.</a> Anhui Academy of Agricultural Sciences. 38 (13), 6929-6931 (2010).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

La collecte d’échantillons pour la recherche est la première étape clé de la construction de la reconnaissance multi-motifs dans l’identification de l’authenticité des matériaux médicinaux chinois. Grâce à des études de marché, nous avons constaté que Sichuan Ya’an, Liangshan et Leshan sont les principales zones de production des ressources sauvages de Chuanmutong. Les variétés apparentées d’un même genre ont également la même répartition géographique 6,20 ; CC, ...

Chuanmutong, Caulis sec de Clematis armandii Franch. ou Clematis montana Buch.-Ham., est une médecine traditionnelle chinoise couramment utilisée dans les cliniques 1,2,3. Il est utilisé pour traiter les problèmes urinaires, l’œdème, les plaies sur la langue et la bouche, la diminution de la sécrétion de lait, la raideur articulaire et les douleurs musculaires causées par la chaleur humide4. Le Chuanmutong a toujours été obtenu à partir de variétés sauvages, principalement distribuées dans le sud-ouest de la Chine, en particulier dans le Sichuan, où la meilleure qualité peut être trouvée 5,6. Il est difficile de faire la distinction entre les variétés authentiques et leurs adultérants étroitement apparentés en raison de leurs caractéristiques similaires 7,8,9,10. La norme de qualité de Chuanmutong dans l’édition 2020 de la pharmacopée chinoise ne stipule que les propriétés, l’identification microscopique et l’identification sur couche mince sans détermination du contenu, qui ne peuvent pas identifier efficacement les adultérants et présentent donc des risques potentiels. De plus, il existe peu de rapports comparant et identifiant Chuanmutong et les plantes apparentées. Par conséquent, une méthode de contrôle de la qualité pour assurer l’authenticité de Chuanmutong mérite une étude plus approfondie.
Les constituants chimiques de Chuanmutong sont principalement composés de triterpénoïdes pentacycliques de type oléanane et de leurs glycosides, flavonoïdes et acides organiques11,12,13,14. Parmi eux, l’acide oléanolique, le β-sitostérol, le stigmastérol et l’ergostérol ont des effets diurétiques d’intensités différentes, qui peuvent être des substances pharmacodynamiques potentielles pour favoriser la diurèse et soulager la strangurie15,16. Les empreintes chimiques sont obtenues en séparant et en détectant de nombreux composants chimiques contenus dans les échantillons par chromatographie liquide à haute performance (CLHP), chromatographie en phase gazeuse (CG), etc. L’adoption de méthodes d’analyse statistique appropriées pour analyser les caractéristiques de Chuanmutong peut déterminer le contrôle de qualité global et l’identification scientifique de la médecine traditionnelle chinoise17,18,19.
Dans cette étude, 10 lots de variétés authentiques Chuanmutong et cinq lots d’adultérants ont été collectés. Leur qualité a été comparée et analysée par la méthode d’empreintes digitales HPLC combinée à la reconnaissance multi-formes, y compris l’analyse en grappes (AC), l’analyse en composantes principales (ACP), l’analyse orthogonale partielle des moindres carrés (OPLS-CA) et la détermination du contenu de la composante pharmacodynamique. Ce protocole établit une méthode d’identification des variétés authentiques à haute spécificité, une nouvelle stratégie pour l’identification scientifique des variétés authentiques et des adultérants des matières médicinales chinoises.

<table><tbody><tr><td>Acide acétique</td><td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chine</td><td>2017381038</td><td></td></tr><tr><td>Acétonitrile</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp ; Trading Co., Ltd., Shanghai, Chine</td><td>WXBD5243V</td><td></td></tr><tr><td>&beta ;-Sitosterol</td><td>Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, Chine</td><td>20210201</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp ; C18 colonne</td><td>Yuexu Material Technology Co., Ltd., Shanghai, Chine</td><td>Welch Ultimate LP</td><td></td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Guoqiang Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, Chine&nbsp ;</td><td>19020103</td><td>CMT-1</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Hongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Chine</td><td>200701</td><td>CMT-2</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Chine.</td><td>200701</td><td>CMT-3</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Chine.</td><td>200901</td><td>CMT-4</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Chine&nbsp ;</td><td>210701</td><td>CMT-5</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Haobo Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Chine&nbsp ;</td><td>210401</td><td>CMT-6</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Chine&nbsp ;</td><td>200901</td><td>CMT-7</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Wusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., Sichuan, Chine&nbsp ;</td><td>201201</td><td>CMT-8</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Limin Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, Chine&nbsp ;</td><td>201001</td><td>CMT-9</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Yuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Chine</td><td>210501</td><td>CMT-10</td></tr><tr><td>Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang</td><td>Madzi Bridge, canton de Sanlang, comté de Tianquan, Sichuan, Chine.</td><td>-</td><td>CC</td></tr><tr><td>Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils.</td><td>Village de Heilin, canton de Qiliping, comté de Hongya, Sichuan, Chine.</td><td>-</td><td>DC</td></tr><tr><td>Clematis peterae Main.-Mazz.</td><td>Village de Huangmu, canton de Huangmu, comté de Hanyuan, Sichuan, Chine.</td><td>-</td><td>DE</td></tr><tr><td>Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils</td><td>Mixedang Mountain, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China&nbsp ;</td><td>-</td><td>XS</td></tr><tr><td>Clematis finetiana Levl. et Vaniot.</td><td>Village de Wannian, canton de Huangwan, comté d’Emei, Sichuan, Chine.</td><td>-</td><td>Balance électronique SMT</td></tr><tr><td></td><td>Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Shanghai,&nbsp ; Chine&nbsp ;</td><td>FA1204</td><td></td></tr><tr><td>Ergosterol</td><td>Meisai Biological Technology Co., Ltd, Chongqing, Chine</td><td>20210201</td><td></td></tr><tr><td>Éthanol</td><td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, Chine</td><td>2021112602</td> Acétate d’éthyle <td></td></tr><tr><td></td><td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chine</td><td>2017042043</td><td></td></tr><tr><td>Acide formique</td><td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, Chine</td><td>2016062901</td><td></td></tr><tr><td>Chromatographie liquide à haute performance</td><td>Agilent, États-Unis.</td><td>1260</td><td></td></tr><tr><td>IBM SPSS Statistics version 26.0</td><td>International Business Machines Corporation, États-Unis-Méthanol</td><td></td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Sigma-Aldrich&nbsp ; Trading Co., Ltd., Shanghai, Chine</td><td>WXBD6409V</td><td></td></tr><tr><td>Méthanol</td><td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, Chine</td><td>202010302</td><td></td></tr><tr><td>alcool n-butylique</td><td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chine</td><td>2020071047</td><td></td></tr><tr><td>Éther de pétrole</td><td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chine</td><td>2020090125</td><td></td></tr><tr><td>Acide phosphorique</td><td>Comeo Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chine</td><td>20200110</td><td></td></tr><tr><td>SESCF-TCM version 2012</td><td>National Pharmacopoeia Commission,</td> <td>Chine-http://114.247.108.158:8888/login</td><td></td></tr> <tr><td>Stigmasterol</td><td>Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, Chine</td><td>20210201</td><td></td></tr><tr><td>Trichlorométhane</td><td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., Shanghai, Chine</td><td>20200214</td><td></td></tr><tr><td>Umetrics Version SIMCA 14.1.0.2047</td><td>Umetrics,</td> <td>Suède-https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-download</td><td></td></tr> <tr><td>Machine à eau ultrapure</td><td>Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd., Sichuan, Chine</td><td>UPH-II-10T</td><td></td></tr><tr><td>Nettoyeur à ultrasons</td><td>Kunshan Hechuang Ultrasound Instrument Co., Ltd., Jiangsu, Chine</td><td>KH3200E</td><td></td></tr></tbody></table>

clhp couplée à une empreinte chimique pour la reconnaissance multi-motifs afin d’identifier l’authenticité de clematidis armandii caulis

HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis

Une méthode d’identification des matériaux médicinaux chinois et de leurs adultérants apparentés a été construite en prenant Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, une médecine traditionnelle chinoise universellement utilisée) comme exemple. Dix lots de variétés authentiques de Chuanmutong et cinq lots d’adultérants apparentés ont été analysés et comparés sur la base des empreintes digitales par chromatographie liquide à haute performance (CLHP) combinées à la chimiométrie, y compris l’analyse en grappes (AC), l’analyse en composantes principales (ACP) et l’analyse orthogonale partielle des moindres carrés (OPLS-DA). En outre, la teneur en β-sitostérol a été déterminée. L’empreinte chimique de contrôle de Chuanmutong a été établie et 12 pics communs ont été identifiés. La similitude entre l’empreinte digitale de 10 lots de variétés authentiques de Chuanmutong et l’empreinte digitale de contrôle était de 0,910-0,989, tandis que la similitude de cinq lots d’adultérants n’était que de 0,133-0,720. Sur la base des pics communs dans le chromatogramme, 15 lots d’échantillons ont été classés en trois niveaux de teneur par PCA, et ont été agrégés en quatre catégories par CA, obtenant une distinction claire entre le Chuanmutong authentique et les adultérants de Chuanmutong. En outre, sept composants différentiels capables d’identifier efficacement les Chuanmutong authentiques et les adultérants de Chuanmutong ont été trouvés grâce à OPLS-DA. La teneur en β-sitostérol de 10 lots de variétés authentiques de Chuanmutong était de 97,53-161,56 μg/g, tandis que la teneur en β-sitostérol des cinq lots d’adultérants variait considérablement, parmi lesquels la teneur en β-sitostérol de Clematis peterae Hand.-Mazz. et Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils. était significativement inférieur à celui des variétés authentiques de Chuanmutong. La méthode de reconnaissance multimodèle par composants de l’indice HPLC et la méthode de reconnaissance multi-formes par empreintes chimiques établies dans cette étude fournissent une nouvelle stratégie pour identifier efficacement les matériaux médicinaux chinois authentiques et les adultérants associés.

Empreinte chromatographique de Chuanmutong et analyse de similarité (SA) Les valeurs RSD du temps de rétention relatif de précision, de répétabilité et de stabilité étaient inférieures à 0,46 %, 1,65 % et 0,53 %, respectivement; les valeurs RSD de la zone de pointe relative étaient inférieures à 4,23%, 3,56% et 3,96%, respectivement. Comme le montrent les figures 1A, B, il y avait 12 pics communs distincts (du pic 1 au pic 12) dans les empreintes HPLC dans les 10<...

Nous présentons ici un protocole pour établir la chromatographie liquide à haute performance (HPLC), couplée à la reconnaissance multi-motifs d’empreintes chimiques par empreintes digitales, qui fournit une nouvelle stratégie pour identifier efficacement les variétés authentiques de Clematidis Armandii Caulis et de ses adultérants.

CLHP couplée à une empreinte chimique pour la reconnaissance multi-motifs afin d’identifier l’authenticité de Clematidis armandii caulis

A method for identifying Chinese medicinal materials and their related adulterants was constructed by taking Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, a ...

https://cloudfront.jove.com/CDNSource/teasers/64690.jpg

Ce protocole peut fournir une nouvelle stratégie pour identifier efficacement les matériaux authentiques de Clematidis armandii caulis et de ses adultérants. Cette méthode peut être utilisée dans la recherche sur la qualité des matériaux médicinaux et fournit une référence pour l’étude des normes de qualité d’autres matériaux médicinaux chinois. Pour commencer la préparation de l’échantillon, broyer la matière première jusqu’à ce qu’elle atteigne une taille de particules uniforme en les faisant passer à travers un maillage en nylon avec un diamètre intérieur approprié.Transférer avec précision peser deux grammes de matière première broyée dans une fiole conique de 50 millilitres bouchée avant d’ajouter 50 millilitres de méthanol dans la fiole. Placer le bouchon sur la fiole dans un ultrason chauffé à 600 watts et 40 kilohertz pendant 30 minutes. À la fin de l’incubation, filtrer la solution d’extrait médicinal à travers le papier filtre.Après filtrage, transférer quatre millilitres de la solution de méthanol contenant les extraits médicinaux dans une fiole jaugée de 10 millilitres. Ensuite, ajoutez-y six millilitres d’eau et mélangez la solution. Laissez la solution reposer pendant 10 minutes.Pour l’analyse CLHP des échantillons. Commencez par préparer les phases mobiles et définissez le programme de gradient HPLC tel que décrit dans le manuscrit. Filtrer l’échantillon à travers une membrane filtrante microporeuse de 0,45 micron et le soumettre à une analyse CLHP.Pour chaque échantillon, effectuez une analyse six fois par jour. Pour évaluer la stabilité de la solution échantillon, analysez la même solution d’échantillon conservée à température ambiante pendant 0, 2, 4, 6, 8, 12 et 24 heures après la préparation. Prélever six répétitions du même échantillon et détecter son empreinte digitale en CLHP.Importez les données pertinentes dans le logiciel nommé Système d’évaluation de la similarité des empreintes chromatographiques de la médecine traditionnelle chinoise ou SESCF TCM version 2012. Importez le temps de rétention et la zone de pic pour les 10 lots d’échantillons authentiques de Chuanmutong ainsi que cinq lots d’adultérants dans SESCF TCM pour analyse. Dans le menu principal, cliquez sur le spectre de référence défini et accédez à la fenêtre des paramètres pour définir l’empreinte chromatographique de référence de l’espèce authentique de Chuanmutong comme référence.Ensuite, définissez la méthode de génération du spectre de contrôle comme méthode médiane avec une largeur de fenêtre temporelle de 0,5. Ensuite, cliquez sur étalonnage multipoint dans le menu principal, sélectionnez les pics, puis sélectionnez l’option de correspondance des pics comme pics marqués. Enfin, cliquez sur Calculer la similarité pour effectuer une analyse de similarité des échantillons basée sur les empreintes digitales chromatographiques de référence de Chuanmutong.Pour effectuer une analyse systémique par grappes, ouvrez le logiciel d’analyse statistique pertinent et cliquez sur le fichier pour importer les données de 10 lots d’échantillons authentiques et de cinq lots d’adultérants dans le logiciel. Dans le menu, sous l’onglet Classification, cliquez sur Analyse et clustering de systèmes. Sélectionnez les zones de pic communes de 10 lots d’échantillons authentiques et de cinq lots d’adultérants comme variables.Définissez le nombre de clusters sur quatre. Ensuite, cliquez sur Méthode pour sélectionner la méthode de clustering comme connexion intergroupe. Choisissez l’intervalle de mesure comme corrélation de Pearson et utilisez l’onglet OK pour dessiner la carte d’analyse de cluster.Pour l’analyse des composants principaux ou l’ACP, ouvrez le logiciel d’analyse des données. Cliquez sur fichier dans le menu et créez un nouveau projet régulier. Importez la zone des pics de 12 pics communs dans une feuille de calcul Excel ou similaire à partir du système HPLC.Appuyez sur le bouton Terminer pour terminer l’importation des données. Pour définir le type de modèle avec PCA, cliquez sur Nouveau pour créer un nouveau modèle, puis ajustez les données à l’aide de l’ajustement automatique et ajoutez des onglets. Accédez aux scores pour obtenir la carte des scores PCA.Pour utiliser l’analyse de discrimination orthogonale partielle des moindres carrés ou OPLSDA. Générez la carte des scores PCA comme illustré précédemment. Définissez le type de modèle avec l’OPLSDA en cliquant sur Nouveau et Nouveau en tant que modèle un Avant de passer à l’échelle en sélectionnant le par pour tous, appuyez ensuite sur AutoFit in scores pour générer la carte de score OPLSDA.Pour estimer l’importance et la projection de la variable, allez dans le menu du logiciel d’analyse de données et allez dans Analyser, puis définissez le nombre sur 200 sous par mutation. Obtenez les valeurs du carré R et du carré Q du score OPLSDA et cliquez sur VIP et VIP prédictif pour obtenir la carte VIP. Les empreintes digitales HPLC des 10 échantillons authentiques de Chuanmutong ont montré 12 pics communs distincts dont le relativement grand et bien résolu.Le pic numéro 10 a été utilisé comme pic de référence pour estimer les temps de rétention relatifs des pics de repos. Les échantillons authentiques ont démontré des degrés de similitude très proches de celui impliquant une grande similitude dans une bonne consistance. Cependant, les degrés de similitude entre les cinq lots d’adultérants et le contrôle Chuanmutong étaient assez faibles.On a observé que les empreintes digitales CLHP des cinq adultérants différaient des échantillons authentiques, principalement dans la région ayant des temps de rétention allant de 28 à 55 minutes. L’ACP a montré une similitude évidente entre les variétés authentiques et leur différence par rapport aux adultérants, à l’exception du CC adultérant.Des résultats similaires ont également été obtenus à partir de l’analyse en grappes lorsque la distance de classification était de 20. La matrice de score générée à partir de l’OPLSDA n’indiquait aucune intersection entre les points d’échantillonnage des échantillons authentiques et les adultérants.Encore une fois, le CC adultérant ressemblait plus aux variétés authentiques qu’aux autres adultérants. Selon la carte VIP, les pics ayant des valeurs supérieures à un ont été identifiés comme les principaux composants marqueurs causant la différence entre les échantillons authentiques et les adultérants. La teneur en bêta-sitostérol, un composant actif trouvé dans Chuanmutong a été détectée dans les cinq lots d’adultérants, mais la teneur variait considérablement.Ce protocole établit diverses méthodes d’analyse pour refléter toutes les informations sur les matériaux médicinaux sous plusieurs angles et tout autour de la façon d’estimer l’authenticité des matériaux médicinaux Chuanmutong.

hplc-coupled-with-chemical-fingerprinting-for-multi-pattern

Research

Recherche

JoVE Journal

Chemistry

Chimie

Non ciblée métabolomique fournit une hypothèse générer instantané d'un profil métabolique. Ce protocole démontrera l'extraction et l'analyse des métabolites provenant de cellules, le sérum ou les tissus. Une gamme de métabolites sont interrogés par extraction en phase liquide-liquide, microflow UltraPerformance chromatographie liquide / haute résolution spectrométrie de masse (UPLC-HRMS) couplé à un logiciel d'analyse différentielle.

Metabolomics non ciblées de sources biologiques en utilisant UltraPerformance chromatographie liquide haute résolution spectrométrie de masse (UPLC-HRMS)

Ici, nous présentons un protocole pour le fonctionnement et le réglage de colonnes de chromatographie en flux segmenté parallèle afin de permettre la détection multiplexée.

Tuning une colonne sectorielle écoulement parallèle et Activation de la détection multiplexée

Une méthode pour l'identification des espèces de matériel botanique par analyse directe en temps réel à haute résolution spectrométrie de masse et de l'analyse statistique multivariée est présentée.

Rapid à haut débit Identification des espèces de matériel botanique Utilisation de l&#39;analyse directe en temps réel Résolution Spectrométrie de Masse Haute

Nous présentons ici un protocole de quantification ciblée séquentielle et d’analyse indifférenciés de composés fluorés dans l’eau par spectrométrie de masse. Cette méthode fournit des niveaux quantitatifs de composés connus de composés fluorés et identifie des produits chimiques indéterminés dans les exemples associés avec des estimations semi-quantitatives de leur abondance.

Identification par- et les espèces chimiques polyfluorés avec un flux de travail combinée spectrométrie de masse à haute résolution ciblée et Non-ciblés-dépistage

Présenté ici est un protocole pour l’identification sur le terrain de Matricaria chamomilla à l’aide d’un système qPCR portable. Ce protocole facile à exécuter est idéal pour confirmer l’identité d’une espèce botanique à des endroits où l’accès à l’équipement et à l’expertise de laboratoire est limité, comme les fermes et les entrepôts.

Identification sur le terrain de Matricaria chamomilla à l’aide d’un système qPCR portable

Ce protocole présente une approche pour prendre des empreintes digitales et explorer les données multidimensionnelles collectées par chromatographie en phase gazeuse bidimensionnelle complète couplée à la spectrométrie de masse. Des algorithmes de reconnaissance de formes dédiés (correspondance de modèles) sont appliqués pour explorer les informations chimiques cryptées dans la fraction volatile extra vierge de l’huile d’olive (c’est-à-dire le volatilome).

Empreintes digitales chromatographiques par correspondance de modèle pour les données collectées par chromatographie en phase gazeuse bidimensionnelle complète

Les produits naturels représentent des points de départ prometteurs pour le développement de nouveaux médicaments et agents thérapeutiques. Cependant, en raison de la grande diversité chimique, trouver de nouveaux composés thérapeutiques à partir des plantes est une tâche difficile et longue. Nous décrivons une approche simplifiée pour identifier les molécules antimicrobiennes et antibiofilms à partir d’extraits de plantes et de fractions.

Approche systématique pour identifier les nouvelles molécules antimicrobiennes et antibiofilms à partir d’extraits et de fractions de plantes pour prévenir les caries dentaires

Une stratégie rapide-multidisciplinaire pour la détection précoce des proliférations de cyanobactéries et des cyanotoxines associées est décrite ici. Il permet la détection de cyanobactéries et de cyanotoxines apparentées dans des échantillons d’eau et dans des matrices organiques, telles que des échantillons de bivalves, en 24 h.

Détection précoce des proliférations de cyanobactéries et des cyanotoxines associées à l’aide d’une stratégie de détection rapide

Un procédé de préparation de milieux de séparation hybrides poreux composé d’un monolithe polymère macroporeux recouvert intérieurement d’un polymère de coordination microporeuse à grande surface est présenté.

Préparation de la grande porosité de coordination Polymer Coatings sur macroporeuses Polymer monolithes pour enrichissement accrue des Phosphopeptides

Une procédure simple sur le plan opérationnel pour la synthèse de dérivés d’aniline ortho-trifluorométhoxylés via une séquence en deux étapes d’O-trifluorométhylation du N-aryl-N-hydroxyacétamide suivie d’une migration intramoléculaire OCF3 induite thermiquement est rapportée.

Protocole pour la synthèse du<em&gt; Ortho</em&gt; dérivés de l&#39;aniline -trifluoromethoxylated

Apprenez à identifier l'authenticité de Clematidis armandii caulis par CLHP couplée à une empreinte chimique multi-motifs. Cette méthode permet de différencier les échantillons authentiques des adultérants pour la recherche sur la qualité des matériaux médicinaux.

CLHP couplée à une empreinte chimique pour la reconnaissance multi-motifs afin d’identifier l’authenticité de Clematidis armandii caulis (Vidéo) | JoVE Journal

CLHP couplée à une empreinte chimique pour la reconnaissance multi-motifs afin d’identifier l’authenticité de Clematidis armandii caulis

Explorer plus de vidéos