Name: Analyse et imagerie des ostéocytes (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-29T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 19 s
Description: Découvrez la modélisation 3D des ostéocytes par microscopie confocale et la dynamique des fluides computationnelle pour analyser les contraintes de cisaillement dans le réseau lacuno-canaliculaire osseux.

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<meta charset="utf8"></head><body>Modélisation 3D des ostéocytes pour l’analyse CFD afin d’étudier la mécanosensation dans l’os

<ol><li>Li, M. C. M., Chow, S. K. H., Wong, R. M. Y., Qin, L., Cheung, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+osteocytes-specific+molecular+mechanism+in+regulation+of+mechanotransduction+-+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Translat%22%5BJournal%5D)">The role of osteocytes-specific molecular mechanism in regulation of mechanotransduction - A systematic review.</a> J Orthop Translat. 29, 1-9 (2021).</li>
<li>Fritton, S. P., Weinbaum, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+and+solute+transport+in+bone%3A+Flow-induced+mechanotransduction%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Fluid+Mech%22%5BJournal%5D)">Fluid and solute transport in bone: Flow-induced mechanotransduction.</a> Annu Rev Fluid Mech. 41, 347-374 (2009).</li>
<li>Klein-Nulend, J., Bacabac, R. G., Bakker, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+loading+and+how+it+affects+bone+cells%3A+the+role+of+the+osteocyte+cytoskeleton+in+maintaining+our+skeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Cell+Mater%22%5BJournal%5D)">Mechanical loading and how it affects bone cells: the role of the osteocyte cytoskeleton in maintaining our skeleton.</a> Eur Cell Mater. 24, 278-291 (2012).</li>
<li>Knothe Tate, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%26%2334%3BWhither+flows+the+fluid+in+bone%3F%26%2334%3B+An+osteocyte%27s+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomech%22%5BJournal%5D)">&#34;Whither flows the fluid in bone?&#34; An osteocyte's perspective.</a> J Biomech. 36 (10), 1409-1424 (2003).</li>
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<li>Lai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dependences+of+osteocyte+network+on+bone+compartment%2C+age%2C+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Res%22%5BJournal%5D)">The dependences of osteocyte network on bone compartment, age, and disease.</a> Bone Res. 3 (1), 15009(2015).</li>
<li>Schurman, C. A., Verbruggen, S. W., Alliston, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disrupted+osteocyte+connectivity+and+pericellular+fluid+flow+in+bone+with+aging+and+defective+TGF-%CE%B2+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Disrupted osteocyte connectivity and pericellular fluid flow in bone with aging and defective TGF-β signaling.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 118 (25), e2023999118(2021).</li>
<li>van Tol, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanoresponse+of+bone+is+closely+related+to+the+osteocyte+lacunocanalicular+network+architecture%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">The mechanoresponse of bone is closely related to the osteocyte lacunocanalicular network architecture.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 117 (51), 32251-32259 (2020).</li>
<li>Verbruggen, S. W., Vaughan, T. J., McNamara, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+flow+in+the+osteocyte+mechanical+environment%3A+a+fluid-structure+interaction+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Biomech+Model+Mechanobiol%22%5BJournal%5D)">Fluid flow in the osteocyte mechanical environment: a fluid-structure interaction approach.</a> Biomech Model Mechanobiol. 13 (1), 85-97 (2014).</li>
<li>Ganesh, T., Laughrey, L. E., Niroobakhsh, M., Lara-Castillo, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiscale+finite+element+modeling+of+mechanical+strains+and+fluid+flow+in+osteocyte+lacunocanalicular+system%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Multiscale finite element modeling of mechanical strains and fluid flow in osteocyte lacunocanalicular system.</a> Bone. 137, 115328(2020).</li>
<li>Schneider, P., Meier, M., Wepf, R., Müller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serial+FIB%2FSEM+imaging+for+quantitative+3D+assessment+of+the+osteocyte+lacuno-canalicular+network%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Serial FIB/SEM imaging for quantitative 3D assessment of the osteocyte lacuno-canalicular network.</a> Bone. 49 (2), 304-311 (2011).</li>
<li>Kamioka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+observing+silver-stained+osteocytes+in+situ+in+3-microm+sections+using+ultra-high+voltage+electron+microscopy+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Microanal%22%5BJournal%5D)">A method for observing silver-stained osteocytes in situ in 3-microm sections using ultra-high voltage electron microscopy tomography.</a> Microsc Microanal. 15 (5), 377-383 (2009).</li>
<li>Ciani, C., Doty, S. B., Fritton, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+effective+histological+staining+process+to+visualize+bone+interstitial+fluid+space+using+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">An effective histological staining process to visualize bone interstitial fluid space using confocal microscopy.</a> Bone. 44 (5), 1015-1017 (2009).</li>
<li>Sharma, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+in+the+osteocyte+lacunar-canalicular+microenvironment+due+to+estrogen+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Alterations in the osteocyte lacunar-canalicular microenvironment due to estrogen deficiency.</a> Bone. 51 (3), 488-497 (2012).</li>
<li>Verbruggen, S. W., Vaughan, T. J., McNamara, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain+amplification+in+bone+mechanobiology%3A+a+computational+investigation+of+the+in+vivo+mechanics+of+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+R+Soc+Interface%22%5BJournal%5D)">Strain amplification in bone mechanobiology: a computational investigation of the in vivo mechanics of osteocytes.</a> J R Soc Interface. 9 (75), 2735-2744 (2012).</li>
<li>Goggin, P. M., Zygalakis, K. C., Oreffo, R. O., Schneider, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+3D+imaging+of+osteocytes+and+computational+modelling+in+mechanobiology%3A+insights+on+bone+development%2C+ageing%2C+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Cell+Mater%22%5BJournal%5D)">High-resolution 3D imaging of osteocytes and computational modelling in mechanobiology: insights on bone development, ageing, health and disease.</a> Eur Cell Mater. 31, 264-295 (2016).</li>
<li>Kamioka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscale+fluid+flow+analysis+in+a+human+osteocyte+canaliculus+using+a+realistic+high-resolution+image-based+three-dimensional+model%5BTitle%5D)+AND+%22Integr+Biol%22%5BJournal%5D)">Microscale fluid flow analysis in a human osteocyte canaliculus using a realistic high-resolution image-based three-dimensional model.</a> Integr Biol. 4 (10), 1198-1206 (2012).</li>
<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+measurement+of+solute+transport+in+the+bone+lacunar-canalicular+system%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">In situ measurement of solute transport in the bone lacunar-canalicular system.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (33), 11911-11916 (2005).</li>
<li>Manfredini, P., Cocchetti, G., Maier, G., Redaelli, A., Montevecchi, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poroelastic+finite+element+analysis+of+a+bone+specimen+under+cyclic+loading%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomech%22%5BJournal%5D)">Poroelastic finite element analysis of a bone specimen under cyclic loading.</a> J Biomech. 32 (2), 135-144 (1999).</li>
<li>Steck, R., Niederer, P., Knothe Tate, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+finite+element+analysis+for+the+prediction+of+load-induced+fluid+flow+and+mechanochemical+transduction+in+bone%5BTitle%5D)+AND+%22J+Theor+Biol%22%5BJournal%5D)">A finite element analysis for the prediction of load-induced fluid flow and mechanochemical transduction in bone.</a> J Theor Biol. 220 (2), 249-259 (2003).</li>
<li>You, L., Cowin, S. C., Schaffler, M. B., Weinbaum, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+strain+amplification+in+the+actin+cytoskeleton+of+osteocytes+due+to+fluid+drag+on+pericellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomech%22%5BJournal%5D)">A model for strain amplification in the actin cytoskeleton of osteocytes due to fluid drag on pericellular matrix.</a> J Biomech. 34 (11), 1375-1386 (2001).</li>
<li>Weinbaum, S., Cowin, S. C., Zeng, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+the+excitation+of+osteocytes+by+mechanical+loading-induced+bone+fluid+shear+stresses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomech%22%5BJournal%5D)">A model for the excitation of osteocytes by mechanical loading-induced bone fluid shear stresses.</a> J Biomech. 27 (3), 339-360 (1994).</li>
<li>Niroobakhsh, M., Laughrey, L. E., Dallas, S. L., Johnson, M. L., Ganesh, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computational+modeling+based+on+confocal+imaging+predicts+changes+in+osteocyte+and+dendrite+shear+stress+due+to+canalicular+loss+with+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Biomech+Model+Mechanobiol%22%5BJournal%5D)">Computational modeling based on confocal imaging predicts changes in osteocyte and dendrite shear stress due to canalicular loss with aging.</a> Biomech Model Mechanobiol. 23 (1), 129-143 (2024).</li>
<li>Dallas, S. L., Moore, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+confocal+imaging+approaches+to+understand+the+structure+and+function+of+osteocytes+and+the+lacunocanalicular+network%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Using confocal imaging approaches to understand the structure and function of osteocytes and the lacunocanalicular network.</a> Bone. 138, 115463(2020).</li>
<li>Boyde, A., Wolfe, L. A., Maly, M., Jones, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vital+confocal+microscopy+in+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Scanning%22%5BJournal%5D)">Vital confocal microscopy in bone.</a> Scanning. 17 (2), 72-85 (1995).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Papier de verre grain 1 200</td><td>Buehler</td><td>30-5170-012-100</td><td></td></tr><tr><td>Logiciel 3-Matic Materialise</td><td></td><td>https://www.materialise.com/en/industrial/software/3-matic</td><td>Logiciel d’optimisation des données 3D Papier</td></tr><tr><td>de verre grain 600</td><td>Buehler</td><td>30-5118-600-100</td><td></td></tr><tr><td>Papier de verre grain 800</td><td>Buehler</td><td>30-5170-800-100</td><td></td></tr><tr><td>Logiciel</td> <td>ANSYSANSYS</td><td>https://www.ansys.com/</td> <td>logiciel de simulation</td></tr><tr><td>Fluorescéine Isothiocyanate (FITC)</td><td>Logiciel</td><td></td> Sigma-Aldrich F7250 <td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>https://imagej.net/ij/</td><td></td> Huile d’immersion pour microscopes Leica Microsystems 195371-10-9 Microscope confocal Leica TCS Sp5 II&nbsp ;<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Leica Microsystems</td><td>TCS Sp5 II&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Scie diamantée intérieure Leitz 1600</td><td>Leica&nbsp ;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Logiciel MIMICS Innovation Suite</td><td>Materialise</td><td>https://www.materialise.com/en/healthcare/mimics-innovation-suite</td><td>logiciel de traitement d’images 3D</td></tr><tr><td>Support de monture Permount</td><td>Fisher scientific</td><td>SP15-500</td><td></td></tr><tr><td>Sampl-Kwick Fast Cure Acrylic Kit</td><td>Buehler</td><td>20-3560</td><td></td></tr><tr><td>Single Platform Laboratory Shaker</td><td>Reliable scientific INC</td><td>Modèle 55S</td><td></td></tr></tbody></table>

analyse et imagerie des ostéocytes

Analysis and Imaging of Osteocytes

Ce protocole décrit comment développer des modèles d’ostéocytes confocaux pour étudier la quantité de contrainte de cisaillement de l’écoulement des fluides à laquelle un ostéocyte et ses processus dendritiques sont soumis en raison d’une charge mécanique. Une souris C57BL6 âgée et une jeune souris ont été sélectionnées pour construire des modèles d’ostéocytes confocaux jeunes et âgés. Six autres modèles d’ostéocytes simulés ont été générés à partir du même modèle d’ostéocytes jeunes en utilisant la technique de modification de la géométrie pour étudier l’altération de la morphologie des LCN due au vieillissement ou à une maladie osseuse. Les paramètres modifiés par la géométrie comprenaient l’épaisseur lacune-canaliculaire, la densité canaliculaire et le diamètre. Des modèles d’ostéocytes modifiés ont été développés en modifiant un paramètre à la fois tout en maintenant les autres paramètres identiques. Par conséquent, l’effet de chacun des paramètres morphologiques sur les FFSS est examiné isolément. Les résultats ont révélé que la quantité de FFSS subie par un ostéocyte était différente dans ces modèles d’ostéocytes, montrant la dépendance des FFSS sur la morphologie des LCN. Les valeurs FFSS ont été prédites sur diverses parties du modèle ostéocytaire, telles que le corps cellulaire ostéocytaire ou les membranes dendritiques. Dans tous les modèles, les dendrites présentaient des valeurs FFSS plus élevées que la membrane du corps cellulaire ostéocytaire.
La figure 5 montre les contours FFSS pour les modèles d’ostéocytes jeunes et âgés générés directement à partir d’empilements d’images FITC confocales et de six autres modèles d’ostéocytes développés à partir du modèle 1 en utilisant la technique de modification de la géométrie. La FFSS moyenne sur les membranes ostéocytaires et dendritiques dans le modèle d’ostéocytes jeunes (modèle 1) était de 0,42 Pa, ce qui est plus significatif que la FFSS moyenne de 0,13 Pa dans le modèle d’ostéocytes âgés (modèle 2). Les données obtenues montrent une augmentation de la FFSS moyenne dans les ostéocytes avec un espace lacunaire-canaliculaire plus grand (modèle 7 et modèle 8) et une diminution de la FFSS dans les ostéocytes à plus faible densité canaliculaire (modèle 3 et modèle 4), tandis que la FFSS n’a pas changé de manière significative avec la modification du diamètre des dendrites dans les modèles 5 et 6. Les modèles 2 et 4 avaient les valeurs FFSS les plus faibles, soit 0,19 Pa et 0,13 Pa, respectivement. L’amplitude de la FFSS dans le modèle 8 est supérieure à celle des autres modèles d’ostéocytes. Non seulement la plupart des dendrites sont de couleur rouge dans le modèle 8, mais le corps cellulaire ostéocytaire connaît également une FFSS plus élevée que dans les autres modèles.
Les FFSS subies par les ostéocytes ont également été présentées sur la base du volume et de la surface de l’espace lacunaire-canaliculaire, qui ont été obtenus par post-traitement dans ANSYS CFX pour déterminer la corrélation entre les FFSS et la structure altérée du LCN. Il a également été possible de mesurer la surface de chaque modèle exposé à des FFSS supérieurs à 0,8 Pa, ce qui serait le niveau de FFSS qui provoque la formation osseuse21,22. La modélisation ostéocytaire a montré une corrélation entre le FFSS moyen et le volume ou la surface de l’espace lacunaire-canaliculaire pour tous les modèles d’ostéocytes, comme le montre le tableau 1. L’ostéocyte âgé (modèle 2) et l’ostéocyte d’âge moyen simulé (modèle 4) avec la densité canaliculaire la plus faible avaient la surface laculaire-canaliculaire la plus faible de 1372,7 μm2 et 1122,6 μm2. Les modèles 2 et 4 avaient également le plus faible volume d’espace lacunaire-canaliculaire de 229,4 μm3 et 203,5 μm3, respectivement, ce qui peut être corrélé à leurs faibles quantités de FFSS. Le modèle 6, avec le plus grand diamètre de dendrite, avait la plus grande surface lacune-canaliculaire. Le modèle 8 avait le plus grand volume d’espace lacunaire-canaliculaire et les valeurs FFSS les plus élevées.
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/64699/64699fig01.jpg"> 
Figure 1 : Images confocales d’un seul plan Z d’une coupe transversale d’un fémur coloré au FITC prises avec des objectifs à huile 5x, 20x et 100x. Le réseau lacunaire-canaliculaire est visible sur l’image prise avec l’objectif 100x. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64699/64699fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/64699/64699fig02.jpg"> 
Figure 2 : Modèles confocaux basés sur l’image d’un jeune (modèle 1) et d’un ostéocyte âgé (modèle 2) générés à partir du fémur coloré au FITC d’une souris C57BL6 âgée de 4 mois et d’une souris C57BL6 âgée de 22 mois. L’image agrandie montre l’épaisseur lacunaire-canaliculaire (LC) pour l’ostéocyte jeune et la même pour l’ostéocyte âgé. L’image du modèle 1 a été modifiée avec la permission de Niroobakhsh et al.23. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64699/64699fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 3" src="/files/ftp_upload/64699/64699fig03.jpg"> 
Figure 3 : Six modèles d’ostéocytes développés à partir du modèle 1 à l’aide de la technique de modification de la géométrie. La densité canaliculaire a été réduite pour générer le modèle 3 (d’âge moyen simulé) et le modèle 4 (vieilli simulé), tandis que le diamètre de la dendrite et l’épaisseur de la LC étaient les mêmes que ceux du modèle 1. Les modèles 5 et 6 ont été développés avec la même densité canaliculaire et la même épaisseur de LC que le modèle 1, alors que leur diamètre de dendrite était deux et quatre fois plus élevé que le modèle 1. Les modèles 7 et 8 avaient respectivement une épaisseur lacune-canaliculaire deux fois et quatre fois plus élevée, tandis que la densité canaliculaire et le diamètre de la dendrite sont restés les mêmes que dans le modèle 1. L’image du modèle 1 a été modifiée avec la permission de Niroobakhsh et al.23. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64699/64699fig03large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 4" src="/files/ftp_upload/64699/64699fig04.jpg"> 
Figure 4 : Vue 3D d’un modèle confocal de jeunes ostéocytes. Vue 3D de l’aire en coupe transversale du modèle confocal d’ostéocytes jeunes basé sur l’image, illustrant la modélisation de l’espace lacunaire-canaliculaire, qui est utilisé pour l’analyse des fluides autour de l’ostéocyte et des dendrites. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64699/64699fig04large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 5" src="/files/ftp_upload/64699/64699fig05.jpg"> 
Figure 5 : La distribution des FFSS pour tous les modèles d’ostéocytes montre la dépendance de l’amplitude des FFSS sur la morphologie des ostéocytes. Les régions rouges présentent les valeurs FFSS les plus élevées, en particulier sur les membranes dendritiques plutôt que sur le corps cellulaire ostéocytaire. Cette image a été modifiée avec la permission de Niroobakhsh et al.23. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64699/64699fig05large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Modèle</td>
			<td>Surface lacunaire-canaliculaire (μm2)</td>
			<td>Volume de l’espace lacunaire-canaliculaire (μm3)</td>
			<td>Ave FFSS (Pennsylvanie)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="4">Modèles d’ostéocytes confocaux basés sur l’image</td>
			<td>Modèle 1</td>
			<td rowspan="2">2652.9</td>
			<td rowspan="2">261</td>
			<td rowspan="2">0.42</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jeune (4 mois)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modèle 2</td>
			<td rowspan="2">1372.7</td>
			<td rowspan="2">229.4</td>
			<td rowspan="2">0.19</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Âgé (22 mois)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="12">Modèles d’ostéocytes simulés générés à l’aide d’une technique de modification de la géométrie</td>
			<td>Modèle 3</td>
			<td rowspan="2">1530.4</td>
			<td rowspan="2">242.6</td>
			<td rowspan="2">0.27</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(Simulation d’âge moyen)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modèle 4</td>
			<td rowspan="2">1122.6</td>
			<td rowspan="2">203.5</td>
			<td rowspan="2">0.13</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(Vieilli simulé)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modèle 5</td>
			<td rowspan="2">3724.9</td>
			<td rowspan="2">302.9</td>
			<td rowspan="2">0.49</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(2 x diamètre de la dendrite)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modèle 6</td>
			<td rowspan="2">4791</td>
			<td rowspan="2">337</td>
			<td rowspan="2">0.57</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(4 x diamètre de dendrite)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modèle 7</td>
			<td rowspan="2">3116.3</td>
			<td rowspan="2">440.6</td>
			<td rowspan="2">1.17</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(2 x LC d’épaisseur)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modèle 8</td>
			<td rowspan="2">3542.2</td>
			<td rowspan="2">658.2</td>
			<td rowspan="2">1.89</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(4 x LC d’épaisseur)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tableau 1 : Comparaison des modèles d’ostéocytes. Comparaison de la FFSS moyenne, du volume de l’espace lacinaire-canaliculaire et de la surface dans huit modèles d’ostéocytes distincts, dont deux modèles confocaux basés sur l’image et six modèles simulés générés à partir du modèle 1 à l’aide de la technique de modification de la géométrie.

Analyse et imagerie des ostéocytes

Osteocytes are the bone cells that are thought to respond to mechanical strains and fluid flow shear stress (FFSS) by activating various biological ...

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Bioingénierie

Traitement des ostéoblastes primaires de souris avec de l'acide rétinoïque produit une population homogène de cellules ramifiés portant des caractères morphologiques et moléculaires des ostéocytes. La méthode permet de surmonter la difficulté d'obtenir et de maintenir ostéocytes primaires en culture, et peut être avantageux d'étudier les cellules dérivées de modèles transgéniques.

Application de l&#39;acide rétinoïque pour obtenir des cultures de ostéocytes de primaires ostéoblastes de souris

Les ostéoclastes sont des cellules du capital de résorption osseuse dans le corps. Une capacité à isoler les ostéoclastes en grand nombre a conduit à des avancées significatives dans la compréhension de la biologie des ostéoclastes. Dans ce protocole, nous décrivons une méthode pour l'isolement, la culture et la quantification de l'activité des ostéoclastes in vitro.

Ostéoclastes Dérivation de moelle osseuse de souris

Nous décrivons un protocole d’imagerie hybride, combinant la tomographie médiée par fluorescence (FMT) et la micro-tomodensitométrie (μCT). Après la fusion et la reconstruction, nous effectuons une segmentation interactive des organes pour extraire des mesures quantitatives de la distribution de fluorescence.

Imagerie hybride μCT-FMT et l&#39;analyse d&#39;image

Implantation de greffons osseux autologues et allogéniques constituent accepté approches pour traiter importante perte osseuse cranio-facial. Pourtant, l'effet de la composition de greffe sur l'interaction entre la néovascularisation, la différenciation cellulaire et la formation osseuse est claire. Nous présentons un protocole d'imagerie multimodale visant à élucider l'interdépendance angiogenèse ostéogenèse à la proximité de la greffe.

Tomodensitométrie et l&#39;imagerie optique du couplage de l&#39;ostéogenèse-angiogenèse à évaluer l&#39;intégration des crâniens autogreffes et allogreffes

L’uranium est connu pour affecter le métabolisme osseux. Nous présentons ici un protocole visant à étudier les effets de l’exposition de l’uranium naturel sur la viabilité, la différenciation et la fonction des ostéoclastes, les cellules en charge de la résorption osseuse.

Méthodes pour analyser les effets de l’Uranium naturel sur In Vitro Osteoclastogenesis

Nous présentons un protocole pour comparer l’état de minéraux dans les vésicules, sortis deux lignées de cellules d’os humains : hFOB 1.19 et Saos-2. Leurs profils de minéralisation ont été analysés par l’alizarine rouge-S (AR-S), de coloration, ultraviolette visualisation de lumière (UV), imagerie de microscopie électronique (met) de transmission et microanalyse à rayons x dispersive en énergie (EDX).

Analyse des minéraux produits par hFOB 1.19 et Saos-2 cellules à l’aide de microscopie électronique à Transmission avec Energy Dispersive x-ray Microanalysis

Nous avons utilisé un protocole d’échantillonnage géologique (carottage) pour se procurer des spécimens d’os corticals de taille uniforme pour les expériences SRμCT de l’aspect antérieur du femora humain. Cette méthode est minimalement destructrice, efficace, se traduit par des spécimens cylindriques qui minimisent l’imagerie des artefacts à partir de formes d’échantillons irrégulières et améliore la visualisation et l’analyse microarchitecturales.

Un guide de sectionnement, de coring et de traitement d’image pour l’approvisionnement et l’analyse d’échantillons d’os cortical à haut débit pour le micro-CT synchrotron

Ce protocole décrit la dissection du calvaire néonatal de souris dmp1-topaze et l’isolement des ostéocytes exprimant la protéine fluorescente verte par digestion et fractionnement cellulaire, en plus de la préparation des ostéocytes pour le tri cellulaire activé par fluorescence (FACS).

Obtention d’ostéocytes primaires par fractionnement calvariaire murin d’ostéocytes exprimant la GFP

Le présent article décrit la mise en œuvre d’une approche d’imagerie intravitale pour observer la signalisation calcique induite mécaniquement des ostéocytes intégrés in vivo en temps réel en réponse à la charge mécanique au niveau tissulaire du troisième métatarsien de souris.

Une approche d’imagerie intravitale fluorescente pour étudier la dynamique de la signalisation calcique induite par la charge dans les ostéocytes de souris

Ce protocole présente une méthode économique et efficace pour l’évaluation quantitative de la microarchitecture osseuse dans un modèle murin d’ostéoporose en combinant la coloration à l’hématoxyline-éosine (HE) et les techniques de micro-tomodensitométrie (Micro-CT).

Évaluation de la microarchitecture de l’os trabéculaire dans un modèle murin d’ostéoporose

Nous proposons un protocole pour évaluer la régénération osseuse à différents niveaux hiérarchiques. Cette approche multimodale permet une analyse structurelle sur différentes échelles de longueur, répondant efficacement aux défis de la préparation de l’échantillon. Il offre également un flux de travail fiable pour évaluer l’efficacité des biomatériaux dans la promotion de la régénération osseuse.

Approche multimodale pour évaluer la régénération osseuse et la performance de l’échafaudage

Découvrez la modélisation 3D des ostéocytes par microscopie confocale et la dynamique des fluides computationnelle pour analyser les contraintes de cisaillement dans le réseau lacuno-canaliculaire osseux.

Analyse et imagerie des ostéocytes

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