Induction de la parodontite par une combinaison de ligature et d’injection de lipopolysaccharide dans un modèle de rat

Il s’agit d’un modèle de parodontite expérimentale chez le rat, basé sur les techniques d’injections de lipopolysaccharides combinées à la mise en place de ligatures, offrant une méthode efficace pour étudier la progression de la maladie et évaluer les traitements de la parodontite. La combinaison des deux techniques avec des méthodes individuelles aboutit à une induction rapide de la maladie, amplifiant la réponse inflammatoire destructrice et augmentant la perte de tissu conjonctif et la résorption osseuse alvéolaire. Cette méthode offre une occasion précieuse d’évaluer l’impact des traitements de la parodontite.

La démonstration de la procédure sera le Dr Oscar Villa, PhD. Commencez par stériliser tous les instruments chirurgicaux avant la chirurgie. Préparez un mélange de kétamine et de xylazine en mélangeant 1,6 millilitre de kétamine avec un millilitre de xylazine, dilué dans du PBS ou une solution saline, et stockez le stock à quatre degrés Celsius.

Diluer l’atipamézole à une concentration finale de 0,25 milligramme par millilitre et la buprénorphine à une concentration finale de 0,03 milligramme par millilitre dans du PBS ou une solution saline, et stocker les stocks à quatre degrés Celsius. Préparez un millilitre de PG-LPS dans une solution saline stérile et conservez le stock à moins 20 degrés Celsius. Utilisez des rats Wistar femelles et mâles pour l’expérience.

Gardez les animaux logés en groupes dans un environnement approprié, avec de la nourriture et de l’eau standard offertes ad libitum. Une fois le rat anesthésié, placez l’animal sur le dos sur une plate-forme chirurgicale chauffée. Couvrez le corps de l’animal pendant la procédure pour éviter les pertes de chaleur.

Administrer 100% d’oxygène à l’aide d’un petit cône nasal et surveiller le pouls et la saturation en oxygène par oxymétrie de pouls. Maintenant, ouvrez la bouche du rat en utilisant un bâillon buccal en aluminium autour des incisives. Rétractez la langue avec elle et stabilisez le maxillaire et la mandibule dans une position de travail ouverte et confortable, permettant l’accès aux molaires mandibulaires.

Recueillir GCF en utilisant un total de quatre points de papier absorbant numéro 30, en l’insérant dans la crevasse gingivale autour du mésiopalatal du M1 jusqu’à une légère résistance. Maintenez le point de papier dans la même position pendant 30 secondes avant de le retirer immédiatement. Après la collecte, transférer immédiatement la pointe de papier dans un flacon en plastique et conserver à moins 80 degrés Celsius jusqu’à ce que le test soit effectué.

Placez la queue distale de la suture sur la face palatine de la dentition et insérez le segment proximal entre le contact de M1 et de la deuxième molaire maxillaire. Utilisez l’ascenseur microchirurgical périosté pour insérer la suture dans le sulcus. Enroulez la ligature autour de la surface buccale du M1 très soigneusement, car les tissus à ce niveau présentent une zone étroite de gencive attachée.

Assurez-vous que la suture est serrée aux deux extrémités pour être enfoncée dans le sillon gingival. Ensuite, attachez les extrémités de la suture avec un nœud de chirurgien et coupez les queues aussi courtes que possible. Insérez le nœud dans le sulcus.

Après le positionnement de la ligature, injecter 40 microlitres de PG-LPS dans une solution saline stérile dans le tissu sous-gingival du côté mésiopalatal du M1 bilatéralement. Pour examiner et ajuster la ligature, placez l’animal anesthésié sur son dos et utilisez un petit cône nasal pendant la procédure avec 1% d’isoflurane et 100% d’oxygène pour le maintien de l’anesthésie de l’animal. Ouvrez la bouche enveloppante à l’aide du bâillon buccal en aluminium autour des incisives, en rétractant la langue avec elle et en stabilisant le maxillaire et la mandibule dans une position de travail ouverte et confortable, permettant l’accès aux ligatures.

Serrez les ligatures contre la gencive à l’aide d’un ascenseur microchirurgical périosté et assurez-vous que la suture des ligatures est insérée, créant une inflammation autour de la gencive. Après l’ajustement de la ligature, injecter bilatéralement 40 microlitres de PG-LPS dans le tissu sous-gingival du côté mésiopalatal du M1, comme démontré précédemment. Après avoir sacrifié l’animal le 14ème jour, collectez GCF comme indiqué précédemment.

Transférer immédiatement la pointe de papier dans un flacon en plastique et conserver à moins 80 degrés Celsius jusqu’à la performance du test. Les images bidimensionnelles de l’os alvéolaire des molaires maxillaires montrent plus de volume osseux dans le contrôle basal et une perte osseuse alvéolaire plus élevée après l’établissement de la parodontite. L’analyse des images sagittales met en évidence une perte osseuse alvéolaire plus importante dans la zone osseuse interradiculaire des M1 et M2 après l’établissement de la parodontite, par rapport au groupe témoin basal.

Après le sacrifice, le palais présentait des différences de récession gingivale dans le M1 entre différents groupes. Le groupe parodontite montre une migration gingivale apicale plus remarquable et une inflammation de la gencive autour des molaires maxillaires par rapport au groupe témoin basal. En outre, le groupe de parodontite a montré une libération significativement plus élevée de cytokine pro-inflammatoire 1L-1 bêta de GCF que le groupe témoin.

Les étapes cruciales de la procédure sont le placement correct de la suture et du nœud dans le sillon, un ajustement approprié de la ligature et une injection précise de lipopolysaccharide pendant le protocole de 14 jours.