L’établissement d’un modèle de guérison par voie d’extraction molaire mandibulaire murine
13 janvier 2023
Ce protocole montre étape par étape les détails de la façon d’extraire la première molaire mandibulaire chez la souris. Il fournit une méthode alternative pour les chercheurs qui se concentrent sur la guérison et la régénération des os de la mâchoire.
Ce protocole fournit un modèle d’extraction molaire mandibulaire murine qui est rarement introduit dans les études de régénération osseuse disponibles. L’élaboration d’un modèle d’extraction molaire mandibulaire murine est nécessaire en tant que mandibule plus comparable et cohérente entre les différents groupes d’intervention. Les implications de cette technique ne s’étendent pas vers le traitement d’une maladie.
Cependant, il peut aider à la guérison clinique et à la régénération osseuse de la mâchoire à long terme en aidant à examiner les mécanismes sous-jacents à ce processus. Cette technique a été développée pour aider les études, révélant les mécanismes de guérison et de régénération disponibles. Malheureusement, cette méthode ne peut pas être appliquée à d’autres systèmes.
Commencez à éliminer la résistance distale de la souris anesthésiée en tenant la molaire avec une pince à épiler médialement. Ensuite, forcez une aiguille de calibre 23 dans l’os alvéolaire buccal de la racine distale et faites un intervalle. Ensuite, passez à une aiguille de calibre 25 pour continuer l’expansion de l’intervalle.
Progressez délicatement vers la zone périapicale tout en tournant lentement l’aiguille vers l’avant et langoureusement pour presser la racine hors de la fosse alvéolaire. Pour éliminer la résistance mésiale, insérez une aiguille de calibre 23 dans la fourche radiculaire et soulevez la molaire occlusale. Après avoir tenu fermement la molaire, prenez une autre aiguille de calibre 23 et forcez-la dans la membrane parodontale mésiale linguale pour créer un intervalle.
Ensuite, utilisez une aiguille de calibre 25 et tournez lentement vers l’avant et buccally. Si certains obstacles sous-jacents empêchent la luxation de la molaire, utilisez une aiguille de calibre 26 pour pénétrer dans l’apex de la racine et répétez les opérations. Lors de l’extraction finale, extraire la dent en veillant à ce que la couronne s’élève au-dessus du plan occlusal et que deux racines intactes soient clairement visibles.
Après avoir extrait avec succès la première molaire mandibulaire, appliquez du coton sec pour arrêter le saignement, repositionnez la langue, administrez une analgésie et placez la souris sur un coussin chauffant à température constante jusqu’à ce qu’elle se rétablisse de l’anesthésie. L’alvéole dentaire s’est immédiatement remplie de post-extraction du caillot. Le processus de guérison de la cavité a été observé pendant une semaine.
Des os trabéculaires ressemblant à des éponges se sont formés, mais le caillot est resté. Dans le processus de guérison, la cavité a été remplie d’os d’éponge après deux semaines, indiquant l’achèvement de la régénération. Un régulateur maître dans les différenciations des ostéoblastes Sp7 a été largement exprimé dans les cellules de la moelle osseuse dans la marge qui est l’os formant le front.
Sous l’état d’homéostasie, les os trabéculaires étaient cohérents et confluents avec des blocs cellulaires de moelle osseuse saupoudrés comme des îles. Une semaine après la chirurgie, de nombreuses cellules exprimant Sp7 ont rempli la cavité d’extraction avec de l’os trabéculaire nouvellement formé saupoudré. Quatre semaines après la chirurgie, la condition s’est inversée et s’est transformée en grande partie en os trabéculaire.
L’activité des cellules exprimant Sp7 a diminué à un niveau proche de l’état d’homéostasie. Le peut également être effectué pour démontrer le processus de régénération du nouveau-né. Cette technique peut aider les chercheurs à démêler les mécanismes sous-jacents du processus de guérison et de régénération disponibles en fournissant un nouveau modèle murin.
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Aperçu
Ce protocole présente une méthode détaillée pour l'extraction de la première molaire mandibulaire chez la souris, offrant un nouveau modèle murin pour l'étude de la cicatrisation et de la régénération de l'os alvéolaire. L'étude examine le processus de cicatrisation après l'extraction ainsi que les mécanismes cellulaires impliqués dans la régénération osseuse.
Composantes clés de l'étude
Domaine de recherche
- Régénération osseuse
- Modèles murins en recherche dentaire
- Mécanismes de cicatrisation de l'os alvéolaire
Contexte
- Besoins en modèles cohérents pour les études sur la régénération osseuse
- Compréhension des implications cliniques de la cicatrisation du maxillaire
- Acquis sur les mécanismes de cicatrisation et de régénération
Méthodes utilisées
- Extraction de la première molaire mandibulaire chez des souris anesthésiées
- Utilisation d'aiguilles de différents calibres pour la luxation dentaire
- Évaluation de la cicatrisation sur une période de quatre semaines
Résultats principaux
- Technique d'extraction réussie entraînant une cicatrisation observée sur deux semaines
- Formation d'un nouveau tissu osseux trabéculaire et expression de Sp7 dans les cellules de la moelle osseuse
- Baisse de l'expression de Sp7 indiquant un retour à l'homéostasie
Conclusions
- L'étude démontre une méthode d'extraction fiable qui aide à comprendre les processus de régénération osseuse
- Ce modèle apporte des connaissances précieuses sur les mécanismes de cicatrisation du maxillaire, pertinentes pour les recherches biologiques futures.
Questions fréquemment posées
Pertinence professionnelle pour l'industrie
Le modèle de cicatrisation après l'extraction de la molaire mandibulaire chez la souris fournit une plateforme in vivo standardisée pour étudier la régénération de l'os alvéolaire et l'ossification intramembraneuse. Ce modèle permet la détection mécanistique des risques et la validation de cibles thérapeutiques dans les voies de cicatrisation osseuse, soutenant ainsi la découverte précoce et la recherche translationnelle dans le domaine de la régénération des tissus squelettiques. Sa reproductibilité et sa pertinence biologique facilitent des décisions d'avancement ajustées au risque dans les portefeuilles de recherche et développement précliniques en odontologie et en craniofacial.
Applications stratégiques en recherche et développement en biopharmaceutique
Découverte précoce et validation des cibles
- Permet l'analyse des voies ostéogéniques et des régulateurs cellulaires tels que Sp7 dans un contexte in vivo contrôlé.
- Facilite la réduction des risques biologiques en fournissant un modèle reproductible pour la validation fonctionnelle des cibles dans les études de régénération osseuse.
- Renforce la confiance prédictive dans le choix des voies candidates pour la réparation des tissus squelettiques.
Développement de tests et criblage
- Offre un système biologique validé pour évaluer les interventions sur la cicatrisation osseuse et les marqueurs moléculaires.
- Permet la standardisation et la reproductibilité des tests grâce à des critères chirurgicaux et histologiques constants.
- Permet une évaluation quantitative de la formation osseuse et de l'activité cellulaire après l'extraction.
Recherche translationnelle et préclinique
- S'aligne sur les mécanismes pertinents à la maladie concernant la cicatrisation des défauts de l'os alvéolaire, permettant l'exploration de biomarqueurs translationnels.
- Permet une continuité allant de la découverte à la validation préclinique des stratégies de régénération osseuse.
- Réduit l'ambiguïté mécanistique dans le choix des modèles précliniques pour les applications dentaires et craniomaxillo-faciales.
Intégration du pipeline et du flux de travail
Ce modèle se situe à l'interface entre la découverte précoce et la validation préclinique, permettant la vérification d'hypothèses et des études mécanistiques dans les protocoles de régénération osseuse.
- Biologie de la découverte : Soutient l'investigation fondée sur des hypothèses concernant les régulateurs de l'ostéogenèse et de la cicatrisation osseuse.
- Écrans de sélection : Fournit des critères d'évaluation reproductibles pour analyser les interventions candidates et les marqueurs moléculaires.
- Analytique : Produit des mesures histologiques et d'immunofluorescence quantitatives destinées à des analyses comparatives.
- Recherche translationnelle : Relie les découvertes fondamentales à des modèles précliniques pertinents pour la réparation de l'os alvéolaire.
- Réutilisation institutionnelle : Met en place une plateforme in vivo réutilisable pour la recherche continue sur la régénération osseuse.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Accroît la confiance prédictive et réduit l'ambiguïté mécanistique dans la recherche sur la cicatrisation osseuse.
- Valeur opérationnelle : Standardise les procédures in vivo et les évaluations histologiques afin d'assurer la reproductibilité.
- Valeur stratégique : Éclaire les décisions de poursuite ou d'abandon concernant les cibles et voies de régénération osseuse.
- Impact sur le portefeuille : Permet une priorisation ajustée au risque des programmes de réparation des tissus squelettiques.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une expertise dans les techniques chirurgicales murines et l'histologie osseuse.
- Requiert un accès à la microscopie stéréo, à la coloration histologique et aux infrastructures d'immunofluorescence.
- Exige une standardisation interéquipes des protocoles chirurgicaux et analytiques.
- Limité aux modèles mandibulaires murins ; non adaptable à d'autres systèmes selon la validation actuelle.
- Les limitations pratiques incluent les compétences techniques requises et les contraintes propres au modèle.
