Name: Génération et culture d’organoïdes dérivés de patients atteints d’un cancer de l’ovaire séreux de haut grade (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-01-06T14:50:00.000+00:00
Duration: 7 min 19 s
Description: Découvrez la génération et la culture d'organoides dérivés de patients pour étudier le cancer de l'ovaire séreux de haut grade. Ces modèles 3D reproduisent fidèlement l'hétérogénéité tumorale et permettent d'évaluer de nouvelles thérapies ciblées.

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Nous sommes reconnaissants des conseils de Ron Bose, MD, PhD, et de l’aide de Barbara Blachut, MD, dans l’établissement de ce protocole. Nous tenons également à remercier l’École de médecine du Département d’obstétrique et de gynécologie et la Division d’oncologie gynécologique de l’Université de Washington, le Dean’s Scholar Program de l’Université de Washington et le Reproductive Scientist Development Program pour leur soutien à ce projet.

<ol><li>Bray, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+cancer+statistics+2018%3A+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries%5BTitle%5D)+AND+%22CA%3A+A+Cancer+Journal+for+Clinicians%22%5BJournal%5D)">Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 68 (6), 394-424 (2018).</li>
<li>Drost, J., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids+in+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Organoids in cancer research.</a> Nature Reviews Cancer. 18 (7), 407-418 (2018).</li>
<li>Pauli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Personalized+in+vitro+and+in+vivo+cancer+models+to+guide+precision+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">Personalized in vitro and in vivo cancer models to guide precision medicine.</a> Cancer Discovery. 7 (5), 462-477 (2017).</li>
<li>Fujii, E., Kato, A., Suzuki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenograft+%28PDX%29+models%3A+Characteristics+and+points+to+consider+for+the+process+of+establishment%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenograft (PDX) models: Characteristics and points to consider for the process of establishment.</a> Journal of Toxicologic Pathology. 33 (3), 153-160 (2020).</li>
<li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+ovarian+cancer+organoids+in+precision+medicine%3A+Key+challenges+and+current+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Application of ovarian cancer organoids in precision medicine: Key challenges and current opportunities.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 701429(2021).</li>
<li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+organoids%3A+A+promising+model+for+personalized+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology+Report%22%5BJournal%5D)">Patient-derived organoids: A promising model for personalized cancer treatment.</a> Gastroenterology Report. 6 (4), 243-245 (2018).</li>
<li>Karakasheva, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+and+characterization+of+patient-derived+head+and+neck%2C+oral%2C+and+esophageal+cancer+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Stem+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Generation and characterization of patient-derived head and neck, oral, and esophageal cancer organoids.</a> Current Protocols in Stem Cell Biology. 53 (1), 109(2020).</li>
<li>Madison, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Let-7+represses+carcinogenesis+and+a+stem+cell+phenotype+in+the+intestine+via+regulation+of+Hmga2%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genetics%22%5BJournal%5D)">Let-7 represses carcinogenesis and a stem cell phenotype in the intestine via regulation of Hmga2.</a> PLoS Genetics. 11 (8), 1005408(2015).</li>
<li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li>
<li>Murray, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HER2+and+APC+mutations+promote+altered+crypt-villus+morphology+and+marked+hyperplasia+in+the+intestinal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">HER2 and APC mutations promote altered crypt-villus morphology and marked hyperplasia in the intestinal epithelium.</a> Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 12 (3), 1105-1120 (2021).</li>
<li>Hill, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prediction+of+DNA+repair+inhibitor+response+in+short-term+patient-derived+ovarian+cancer+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">Prediction of DNA repair inhibitor response in short-term patient-derived ovarian cancer organoids.</a> Cancer Discovery. 8 (11), 1404-1421 (2018).</li>
<li>Passarelli, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leucyl-tRNA+synthetase+is+a+tumour+suppressor+in+breast+cancer+and+regulates+codon-dependent+translation+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Leucyl-tRNA synthetase is a tumour suppressor in breast cancer and regulates codon-dependent translation dynamics.</a> Nature Cell Biology. 24 (3), 307-315 (2022).</li>
<li>Pleguezuelos-Manzano, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+culture+of+human+intestinal+organoids+derived+from+adult+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Establishment and culture of human intestinal organoids derived from adult stem cells.</a> Current Protocols in Immunology. 130 (1), 106(2020).</li>
<li>Stumm, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+a+postfixation+tissue+storage+and+transport+medium+to+preserve+histopathology+and+molecular+pathology+analyses+%28total+and+phosphoactivated+proteins%2C+and+FISH%29%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Clinical+Pathology%22%5BJournal%5D)">Validation of a postfixation tissue storage and transport medium to preserve histopathology and molecular pathology analyses (total and phosphoactivated proteins, and FISH).</a> American Journal of Clinical Pathology. 137 (3), 429-436 (2012).</li>
<li>Feldman, A. T., Wolfe, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+processing+and+hematoxylin+and+eosin+staining%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Tissue processing and hematoxylin and eosin staining.</a> Methods in Molecular Biology. 1180, 31-43 (2014).</li>
<li>Ooft, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+organoids+can+predict+response+to+chemotherapy+in+metastatic+colorectal+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Patient-derived organoids can predict response to chemotherapy in metastatic colorectal cancer patients.</a> Science Translational Medicine. 11 (513), (2019).</li>
<li>Aisenbrey, E. A., Murphy, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+alternatives+to+Matrigel%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Materials%22%5BJournal%5D)">Synthetic alternatives to Matrigel.</a> Nature Reviews Materials. 5 (7), 539-551 (2020).</li>
<li>Nanki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+ovarian+cancer+organoids+capture+the+genomic+profiles+of+primary+tumours+applicable+for+drug+sensitivity+and+resistance+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Patient-derived ovarian cancer organoids capture the genomic profiles of primary tumours applicable for drug sensitivity and resistance testing.</a> Scientific Reports. 10, 12581(2020).</li>
<li>Mead, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+for+modulators+of+the+cellular+composition+of+gut+epithelia+via+organoid+models+of+intestinal+stem+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Screening for modulators of the cellular composition of gut epithelia via organoid models of intestinal stem cell differentiation.</a> Nature Biomedical Engineering. 6 (4), 476-494 (2022).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Le cancer de l’ovaire est extrêmement mortel en raison de son stade avancé au moment du diagnostic, ainsi que du développement courant de la résistance à la chimiothérapie. De nombreux progrès dans la recherche sur le cancer de l’ovaire ont été réalisés en utilisant des lignées cellulaires cancéreuses et des modèles PDX; Cependant, il existe un besoin évident d’un modèle in vitro plus représentatif et abordable. Les AOP se sont avérées représenter avec précision l’hétérogénéité tumorale, le microenvironnement tu...

En 2021, environ 21 410 femmes aux États-Unis ont reçu un diagnostic de cancer épithélial de l’ovaire et 12 940 femmes sont décédées de cette maladie1. Bien que des progrès suffisants aient été réalisés en chirurgie et en chimiothérapie, plus de 70% des patients atteints d’une maladie avancée développent une résistance chimiothérapeutique et meurent dans les 5 ans suivant le diagnostic 2,3. Ainsi, de nouvelles stratégies pour traiter cette maladie mortelle et des modèles représentatifs et fiables pour la recherche préclinique sont nécessaires de toute urgence.
Les lignées cellulaires cancéreuses et les xénogreffes dérivées de patientes (PDX) créées à partir de tumeurs ovariennes primaires sont les principaux instruments utilisés dans la recherche sur le cancer de l’ovaire. Un avantage majeur des lignées cellulaires cancéreuses est leur expansion rapide. Cependant, leur culture continue entraîne des altérations phénotypiques et génotypiques qui font que les lignées cellulaires cancéreuses s’écartent de l’échantillon original de tumeur cancéreuse primaire. En raison des différences existantes entre la lignée cellulaire cancéreuse et la tumeur primaire, les tests de médicaments qui ont des effets positifs dans les lignées cellulaires ne parviennent pas à avoir ces mêmes effets dans les essais cliniques2. Pour surmonter ces limitations, des modèles PDX sont utilisés. Ces modèles sont créés en implantant du tissu frais de cancer de l’ovaire chez des souris immunodéficientes. Comme il s’agit de modèles in vivo , ils ressemblent plus précisément aux caractéristiques biologiques humaines et, à leur tour, sont plus prédictifs des résultats des médicaments. Cependant, ces modèles présentent également des limites importantes, notamment le coût, le temps et les ressources nécessaires pour les générer4.
Les AOP offrent un modèle alternatif pour la recherche préclinique qui surmonte les limites des lignées cellulaires cancéreuses et des modèles PDX. Les AOP récapitulent la tumeur et le microenvironnement tumoral d’un patient et, ainsi, fournissent un modèle traitable in vitro idéal pour la recherche préclinique 2,3,5. Ces modèles 3D ont des capacités d’auto-organisation qui modélisent la tumeur primaire, une caractéristique que leurs homologues de lignées cellulaires bidimensionnelles (2D) ne possèdent pas. En outre, il a été démontré que ces modèles représentent génétiquement et fonctionnellement leurs tumeurs parentes et, par conséquent, sont des modèles fiables pour l’étude de nouveaux processus thérapeutiques et biologiques. En bref, ils offrent des capacités d’expansion et de stockage à long terme similaires aux lignées cellulaires, mais englobent également le microenvironnement et les interactions cellule-cellule inhérents aux modèles murins 4,6.
Le présent protocole décrit la création d’AOP à partir de tumeurs dérivées de patients, d’ascite et d’échantillons de liquide pleural avec un taux de réussite supérieur à 97%. Les cultures AOP peuvent ensuite être étendues à plusieurs générations et utilisées pour tester la sensibilité au traitement médicamenteux et les biomarqueurs prédictifs. Cette méthode représente une technique qui pourrait être utilisée pour personnaliser les traitements en fonction des réponses thérapeutiques des AOP.

<table><tbody><tr><td>1 % HEPES</td><td>Life Technologies</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>1 % Pénicilline-Streptomycine</td><td>Fisher Scientific</td><td>30002CI</td><td></td></tr><tr><td>1,5 mL Tubes Eppendorf&nbsp ;</td><td>Genesee Scientific</td><td>14125</td><td></td></tr><tr><td>Plat de culture tissulaire de 10 cm&nbsp ;</td><td>TPP</td><td>93100</td><td></td></tr><tr>Pipette <td></td><td></td><td></td><td>sérologique 100</td></tr><tr><td>mL & micro ; m Filtre à cellules</td><td>MidSci</td><td>100ICS</td><td></td></tr><tr><td>15 mL tubes à centrifuger</td><td>Corning</td><td>430052</td><td></td></tr><tr><td>2 mL Cryovial</td><td>Simport Scientific</td><td>T301-2</td><td></td></tr><tr><td>2 % Paraformaldéhyde Fixateur</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>37 &deg ; C bain-marie&nbsp ;</td><td>NEST</td><td>602052</td><td></td></tr><tr><td>3dGRO R-Spondin-1 Supplément de média conditionné</td><td>Millipore Sigma</td><td>SCM104</td><td></td></tr><tr><td>6 plaques à puits</td><td>TPP</td><td>92006</td><td></td></tr><tr><td>70 % d’éthanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R31541GA</td><td></td></tr><tr><td>A83-01</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SML0788</td><td></td></tr><tr><td>Advanced DMEM/F12</td><td>ThermoFisher</td><td>12634028</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Lamda Biotech</td><td>C121</td><td></td></tr><tr><td>B-27</td><td>Life Technologies</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugeuse&nbsp ;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cultrex Type 2</td><td>R& D Systems</td><td>3533-010-02</td><td>Extrait de membrane basale</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>New England Bio Labs</td><td>M0303S</td><td></td></tr><tr><td>DNase I Tampon de réaction</td><td>New England Bio Labs</td><td>M0303S</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>PeproTech</td><td>AF-100-15</td><td></td></tr><tr><td>FBS&nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2442</td><td></td></tr><tr><td>FGF-10</td><td>PeproTech</td><td>100-26</td><td></td></tr><tr><td>FGF2</td><td>PeproTech</td><td>100-18B</td><td></td></tr><tr><td>gentleMACS C Tubes</td><td>Miltenyi BioTech</td><td>130-096-334</td><td></td></tr><tr><td>gentleMACS Octo Dissociator avec Radiateurs</td><td>Miltenyi BioTech</td><td>130-096-427</td><td>Nous utilisons le protocole des fabricants.</td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Life Technologies</td><td>35050061</td><td>dipeptide, L-alanyl-L-glutamine,</td></tr><tr><td>hématoxyline et éosine Kit de coloration</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC1470670</td><td></td></tr><tr><td>Cire de paraffine Histoplast</td><td>Fisher Scientific</td><td>22900700</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifugeuse&nbsp ;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mr. Frosty Conteneur de congélation</td><td>Fisher Scientific</td><td>07202363S</td><td></td></tr><tr><td>N-acétylcystéine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9165</td><td></td></tr><tr><td>Nicotinamide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N0636</td><td></td></tr><tr><td>p1000 Pipette avec pointes&nbsp ;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette p200 avec pointes&nbsp ;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pasteur Pipettes 9"</td><td>Fisher Scientific</td><td>1367820D</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Fisher Scientific</td><td>MT21031CM</td><td></td></tr><tr><td>Pipette Contrôleur</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Prostaglandine E2</td><td>R& D Systems</td><td>2296</td><td></td></tr><tr><td>Puromycin&nbsp ;</td><td>ThermoFisher</td><td>A1113802</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant Murine Noggin</td><td>PeproTech</td><td>250-38</td><td></td></tr><tr><td>Culture cellulaire de récupération Milieu de congélation</td><td>Invitrogen</td><td>12648010</td><td></td></tr><tr><td>Tampon de lyse des globules rouges</td><td>BioLegend</td><td>420301</td><td></td></tr><tr><td>Inhibiteur de ROCK (Y-27632)</td><td>R& D Systems</td><td>1254/1</td><td></td></tr><tr><td>SB202190</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7076</td><td></td></tr><tr><td>T75 Flasque</td><td>MidSci</td><td>TP90076</td><td></td></tr><tr><td>Capot de culture tissulaire&nbsp ;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cassette</td><td></td><td></td><td></td>d’enrobage tissulaire</tr><tr><td>TrypLE Express</td><td>Invitrogen</td><td>12604013</td><td>enzyme recombinante de type II sans origine animale</td></tr><tr><td>Collagenase</td><td>Life Technologies</td><td>17101015</td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

génération et culture d’organoïdes dérivés de patients atteints d’un cancer de l’ovaire séreux de haut grade

Generation and Culturing of High-Grade Serous Ovarian Cancer Patient-Derived Organoids

Les organoïdes sont des modèles tumoraux dynamiques 3D qui peuvent être cultivés avec succès à partir de tissus tumoraux ovariens dérivés de patients, d’ascites ou de liquide pleural et aident à la découverte de nouveaux traitements et biomarqueurs prédictifs du cancer de l’ovaire. Ces modèles récapitulent l’hétérogénéité clonale, le microenvironnement tumoral et les interactions cellule-cellule et cellule-matrice. De plus, il a été démontré qu’ils correspondent à la tumeur primaire morphologiquement, cytologiquement, immunohistochimiquement et génétiquement. Ainsi, les organoïdes facilitent la recherche sur les cellules tumorales et le microenvironnement tumoral et sont supérieurs aux lignées cellulaires. Le présent protocole décrit des méthodes distinctes pour générer des organoïdes du cancer de l’ovaire dérivés de patientes à partir de tumeurs de patientes, d’ascite et d’échantillons de liquide pleural avec un taux de réussite supérieur à 97%. Les échantillons de patients sont séparés en suspensions cellulaires par digestion mécanique et enzymatique. Les cellules sont ensuite plaquées à l’aide d’un extrait de membrane basale (EMB) et sont soutenues par des milieux de croissance optimisés contenant des suppléments spécifiques à la culture du cancer de l’ovaire séreux de haut grade (HGSOC). Après avoir formé les organoïdes initiaux, les AOP peuvent soutenir la culture à long terme, y compris le passage pour l’expansion pour des expériences ultérieures.

Pour générer des AOP, les échantillons ont été digérés mécaniquement et enzymatiquement en suspensions unicellulaires. Les cellules ont ensuite été remises en suspension dans des BME et complétées par des milieux spécialement conçus (Figure 3). Les organoïdes sont généralement établis sur une période de 10 jours, après quoi ils démontrent des organoïdes discrets en culture (Figure 4).
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Les organoïdes dérivés de patients (AOP) sont une culture tridimensionnelle (3D) qui peut imiter l’environnement tumoral in vitro. Dans le cancer séreux de l’ovaire de haut grade, les AOP représentent un modèle pour étudier de nouveaux biomarqueurs et thérapeutiques.

Génération et culture d’organoïdes dérivés de patients atteints d’un cancer de l’ovaire séreux de haut grade

Organoids are 3D dynamic tumor models that can be grown successfully from patient-derived ovarian tumor tissue, ascites, or pleural fluid and aid in the ...

Les modèles organoïdes de conduite de patients représentent génétiquement et fonctionnellement leurs tumeurs parentes et sont donc des modèles fiables pour l’étude de nouvelles thérapies et de processus biologiques complexes dans le cancer de l’ovaire. En récapitulant l’hétérogénéité clonale, le microenvironnement tumoral et les interactions in vitro de cellule à cellule, ces modèles surmontent les limites des lignées cellulaires cancéreuses et des xénogreffes dérivées de patients. Les organoïdes dérivés de patients offrent des capacités d’expansion et de stockage à long terme et imitent la physiologie tumorale.En conséquence, ils sont des modèles idéaux pour l’étude de nouveaux traitements et biomarqueurs prédictifs. Commencez la récolte des organoïdes en plaçant les échantillons tumoraux dans une boîte de culture tissulaire de 10 centimètres et en hachant le tissu pour créer un mélange homogène à l’aide d’un scalpel jetable. Placer le mélange tissulaire homogène dans un tube de dissociation à l’aide d’une pince.Pour chaque millilitre à deux millilitres de tissu homogénéisé, ajoutez sept à huit millilitres de solution de collagénase de type deux d’un milligramme par millilitre dan

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Le présent protocole décrit des méthodes d’évaluation des protéines de réparation des dommages à l’ADN dans les organoïdes du cancer de l’ovaire dérivés de patientes. Vous trouverez ici des méthodes complètes de placage et de coloration, ainsi que des procédures de quantification détaillées et objectives.

Visualisation des protéines de réparation des dommages à l’ADN dans les organoïdes du cancer de l’ovaire dérivés de patients par des tests d’immunofluorescence

Un protocole détaillé est fourni ici pour établir des organoïdes mammaires humains à partir de résections de tumeurs mammaires dérivées de patientes ou de tissu mammaire normal. Le protocole fournit des instructions complètes étape par étape pour la culture, la congélation et la décongélation d’organoïdes mammaires humains dérivés de patientes.

Établissement et culture d’organoïdes mammaires dérivés de patientes

Nous présentons un protocole qui peut être utilisé pour effectuer des tests thérapeutiques de médicaments avec des organoïdes du cancer de l’ovaire dérivés de patientes.

Modèles organoïdes dérivés de patientes atteintes d’un cancer de l’ovaire pour les tests précliniques de médicaments

Les organoïdes tumoraux ont révolutionné la recherche sur le cancer et l’approche de la médecine personnalisée. Ils représentent un modèle de tumeur cliniquement pertinent qui permet aux chercheurs de garder une longueur d’avance sur la tumeur en clinique. Ce protocole établit des organoïdes tumoraux à partir d’échantillons frais de tissus tumoraux pancréatiques et de xénogreffes dérivées de patients d’origine adénocarcinome pancréatique.

Mise en place d’organoïdes tumoraux et de fibroblastes dérivés du cancer du pancréas à partir de tissus frais

Ce protocole offre un cadre systématique pour l’établissement d’organoïdes du cancer de l’ovaire à différents stades de la maladie et relève les défis de la variabilité spécifique à la patiente pour augmenter le rendement et permettre une expansion robuste à long terme pour des applications ultérieures. Il comprend des étapes détaillées pour le traitement des tissus, l’ensemencement, l’ajustement des exigences en matière de milieux et la coloration par immunofluorescence.

Stratégie de mise en banque d’organoïdes du cancer de l’ovaire : Aborder l’hétérogénéité interpatiente entre les sous-types histologiques et les stades de la maladie

Ce protocole décrit l’établissement d’organoïdes tissulaires tridimensionnels (3D) à partir de cellules primaires d’épithélium de surface ovarienne humaine (hOSE). Le protocole comprend l’isolement de l’hOSE à partir d’ovaires fraîchement collectés, l’expansion cellulaire de l’hOSE, les procédures de cryoconservation-décongélation et la dérivation d’organoïdes. L’immunofluorescence, l’analyse quantitative et la démonstration de l’utilité en tant que plate-forme de dépistage sont incluses.

Les organoïdes de l’épithélium de surface de l’ovaire humain comme plate-forme pour étudier la régénération des tissus

Ce protocole détaille le développement de modèles murins de carcinome séreux de l’ovaire séreux de haut grade (HGSOC) in vitro et in vivo. De la dérivation d’organoïdes murins de trompes de Fallope, leur modification génétique pour récapituler la génétique HGSOC humaine, et leur introduction dans la bourse ovarienne de souris syngéniques pour le développement in vivo de tumeurs.

Développement de lignées organoïdes dérivées de souris à partir de cellules épithéliales de trompes de Fallope pour la modélisation du carcinome de l’ovaire séreux de haut grade

Nous décrivons des méthodes pour isoler les cellules somatiques ovariennes de souris à partir d’une fraction enrichie en strome de l’ovaire et pour générer des organoïdes somatiques ovariens de souris en utilisant une approche sans échafaudage.

Sonder le microenvironnement ovarien : méthodes d’isolement, culture 2D et culture organoïde des cellules somatiques ovariennes de souris

Pour permettre une détection très sensible de la diffusion du cancer colorectal humain cellules (CRC) qui colonisent les tissus, nous montrons ici un protocole pour la transduction efficace des Particules Lentivirales protéine fluorescente verte (GFP) dans les cellules organoïde CRC PDX-dérivés avant leur injection à des souris bénéficiaires, avec l’observation au microscope stéréo-fluorescence.

Haute sensibilité détection des micrométastases générés par GFP Lentivirus-transduites organoïdes cultivé à partir d’une tumeur du côlon dérivé de Patient

Les modèles de xénogreffe (PDX) dérivés du patient récapitulent plus solidement les caractéristiques moléculaires et biologiques du mélanome et sont plus prédictifs de la réponse thérapeutique par rapport aux essais traditionnels fondés sur la culture des tissus plastiques. Nous décrivons ici notre protocole d'exploitation standard pour l'établissement de nouveaux modèles PDX et la caractérisation/expérimentation des modèles PDX existants.

Un modèle de xénogreffe dérivé du mélanome

Découvrez la génération et la culture d'organoides dérivés de patients pour étudier le cancer de l'ovaire séreux de haut grade. Ces modèles 3D reproduisent fidèlement l'hétérogénéité tumorale et permettent d'évaluer de nouvelles thérapies ciblées.

Génération et culture d’organoïdes dérivés de patients atteints d’un cancer de l’ovaire séreux de haut grade

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