Name: Production et maintien de cellules souches pluripotentes induites par les primates dérivées de l’urine (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-07-28T12:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: Apprenez à générer des cellules souches pluripotentes induites à partir de cellules urinaires de primates. Cette méthode non invasive utilise des virus Sendai pour le reprogrammage et facilite la recherche en médecine régénérative.

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Ce travail a été soutenu par DFG EN 1093/5-1 (numéro de projet 458247426). M.O. a été soutenu par JSPS Overseas Research Fellowship. Toutes les figurines ont été créées avec BioRender.com. La cytométrie en flux a été réalisée avec l’aide de la cytométrie en flux de l’installation centrale du centre biomédical de Munich. Nous tenons à remercier Makoto Shida et Tomoyo Muto de l’ASHBi, Université de Kyoto, pour leur soutien à la vidéographie.

Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts à divulguer.

Les CSPi sont des types cellulaires précieux car ils permettent la génération de types cellulaires autrement inaccessibles in vitro. Comme les matériaux de départ pour la reprogrammation, par exemple, les fibroblastes ne sont pas facilement disponibles chez toutes les espèces de primates, cet article présente un protocole pour la génération de CSPi à partir de cellules dérivées de l’urine. Ces cellules peuvent être obtenues de manière non invasive, même à partir d’échantillons d’urine de primates non stériles, e...

Les comparaisons génomiques des primates humains et non humains (PNH) sont cruciales pour comprendre notre histoire évolutive et l’évolution des traits spécifiques à l’homme1. De plus, ces comparaisons permettent d’inférer la fonction en identifiant les séquences d’ADN conservées2, par exemple, pour prioriser les variantes associées à la maladie3. Les comparaisons de phénotypes moléculaires tels que les niveaux d’expression génique sont cruciales pour mieux interpréter les comparaisons génomiques et découvrir, par exemple, les différences phénotypiques cellulaires. En outre, ils ont - comme les comparaisons au niveau de l’ADN - le potentiel de déduire la pertinence fonctionnelle, et donc de mieux interpréter la variation médicalement pertinente chez l’homme4. L’incorporation de données phénotypiques moléculaires complètes dans ces études comparatives nécessite des ressources biologiques appropriées (c.-à-d. des cellules orthologues pour toutes les espèces). Cependant, des raisons éthiques et pratiques rendent difficile, voire impossible, l’accès à ces cellules comparables, en particulier pendant le développement. Les cellules souches pluripotentes induites (CSPi) permettent la génération de tels types de cellules inaccessibles in vitro5,6, sont expérimentalement accessibles et ont été utilisées pour des comparaisons avec les primates 6,7,8,9,10,11,12,13,14.
Pour générer des CSPi, il faut acquérir les cellules primaires à reprogrammer. Les cellules isolées de l’urine ont l’avantage de pouvoir être prélevées de manière non invasive chez les primates et de pouvoir être facilement reprogrammées, probablement en raison de leurs profils moléculaires semblables à ceux des cellules souches15. Les conditions de culture pour maintenir les CSPi des primates sont aussi importantes que la reprogrammation; Classiquement, la culture de cellules souches pluripotentes humaines nécessitait un milieu non défini à base de sérum et une co-culture de fibroblastes embryonnaires de souris - appelés cellules nourricières - qui fournissent des nutriments essentiels et un échafaudage pour les cellules souches embryonnaires (CSE)16. Depuis la mise au point de systèmes de culture chimiquement définis et sans alimentation17,18, il existe maintenant diverses options de milieux et de matrices de culture iPSC disponibles dans le commerce. Cependant, la plupart de ces conditions de culture ont été optimisées pour les CSE et les CSPi humaines et, par conséquent, pourraient moins bien fonctionner dans la culture des CSPi des PSN. Dans ce protocole vidéo, nous fournissons des instructions pour générer et maintenir des CSPi humaines et de PSP de PSN dérivées de cultures de cellules urinaires.
Depuis le premier rapport de génération de CSPi par l’expression forcée de facteurs définis dans les fibroblastes en 2006, cette méthode a été appliquée à de nombreux types cellulaires différents d’origines diverses 19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31 ,32. Parmi eux, seules les cellules dérivées de l’urine peuvent être obtenues de manière totalement non invasive. Sur la base du protocole précédemment décrit par Zhou et al.33, on peut isoler et développer des cellules à partir d’urine de primates même à partir d’échantillons non stériles, en complétant des antibiotiques à large spectre15. Notamment, les cellules dérivées de l’urine échantillonnées par ce protocole présentent un potentiel élevé de production de CSPi, dans un laps de temps plus court (les colonies deviennent visibles en 5-15 jours) que la reprogrammation conventionnelle des fibroblastes (20-30 jours, selon notre expérience), et avec un taux de réussite suffisamment élevé. Ces cellules dérivées de l’urine ont été classées comme la population mixte de cellules souches mésenchymateuses et de cellules épithéliales de la vessie, provoquant une efficacité de reprogrammation élevée15.
En plus de la variation des cellules primaires, les méthodes de reprogrammation pour générer des CSPi varient également en fonction du but de l’utilisation. Les procédures conventionnelles de reprogrammation des cellules somatiques humaines ont été réalisées par la surexpression de facteurs de reprogrammation avec des vecteurs rétrovirus ou lentivirus, ce qui a permis l’intégration de l’ADN exogène dans le génome 5,34,35. Pour garder les CSPi générées génomiquement intactes, les chercheurs ont mis au point une grande variété de systèmes de non-intégration - vecteur PiggyBac36,37 excisable, vecteur épisomique38,39, vecteurs de virus non intégrateurs tels que le virus Sendai 40 et l’adénovirus 41, transfection d’ARNm 42, transfection de protéines 43,44 et traitement de composés chimiques 45. En raison de l’efficacité et de la facilité de manipulation, les vecteurs de reprogrammation basés sur le virus Sendai sont utilisés dans ce protocole. L’infection des cellules primaires est réalisée dans une culture en suspension de cellules et de virus de 1 h à une multiplicité d’infection (MOI) de 5 avant le placage. Cette étape modifiée pourrait augmenter la probabilité de contact entre les surfaces cellulaires et les virus, par rapport à la méthode conventionnelle dans laquelle les virus sont ajoutés directement à la culture cellulaire adhérente, et ainsi produire plus de colonies de CSPi15.
La transmission des cellules souches pluripotentes humaines et des PSN peut se faire par passage d’agglomérats et par passage unicellulaire. L’acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA) est un agent chélatant rentable qui lie les ions calcium et magnésium et empêche ainsi l’activité adhérente de la cadhérine et de l’intégrine. L’EDTA est également utilisé comme réactif de dissociation sélectif et léger, car les cellules indifférenciées se détachent devant les cellules différenciées en raison de leurs différentes molécules d’adhésion. La dissociation complète induit la mort cellulaire massive des CSPi des primates via l’hyperactivation de la myosine médiée par la bobine enroulée associée à Rho / Rho contenant la protéine kinase (Rho / Rock). Par conséquent, la supplémentation du milieu de culture avec un inhibiteur de Rho/Rock est essentielle pour les expériences qui nécessitent des cellules individuelles en suspension46,47. Dans ce protocole, nous recommandons le passage par agrégats comme méthode de passage de routine et recommandons le passage d’une seule cellule uniquement lorsque cela est nécessaire, par exemple lorsque l’ensemencement de numéros de cellules définis est nécessaire, ou pendant le sous-clonage.

<table><tbody><tr><td>Accumax&trade ; solution de détachement cellulaire (solution de détachement)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SCR006</td><td></td></tr><tr><td>Amphotéricine B-Solution</td><td>Merck</td><td>A2941-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Anti-humain TRA-1-60 Anticorps de souris&nbsp ;</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>60064</td><td>Dilution : 1/200</td></tr><tr><td>Anticorps conjugué au PE TRA-1-60 humain&nbsp ;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-122-965</td><td>Dilution : 1/50</td></tr><tr><td>Bambanker&trade ; (Milieu de congélation cellulaire)</td><td>Nippon Genetics</td><td>BB01</td><td></td></tr><tr><td>Albumine sérique bovine (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3059-100G</td><td></td></tr><tr><td>Plaque multipuits de culture cellulaire, 12 puits CELLSTAR</td><td>Greiner BIO-ONE</td><td>665180</td><td></td></tr><tr><td>Comtesse & commerce ; II compteur de cellules automatisé</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AMQAX1000</td><td></td></tr><tr><td>CryoKing&reg ; 1,5 mL Tubes avec code-barres 2D (Cryotubes)</td><td>Sued-Laborbedarf</td><td>52 95-0213</td><td>Différents types de cryotubes peuvent être utilisés pour la congélation. Les tubes à code-barres 2D ont l’avantage de pouvoir stocker les informations sur l’échantillon dans une base de données avec des informations uniques sur le tube.</td></tr><tr><td>CytoTune&Trade ; EmGFP Sendai Fluorencence Reporter (GFP Sendai virus)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A16519</td><td></td></tr><tr><td>CytoTune&trade ;-iPS 2.0 Sendai Reprogramming Kit (Sendai virus reprogramming kit)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A16518</td><td></td></tr><tr><td>DAPI 4',6-Diamidine-2'-phenylindole dichlorhydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10236276001</td><td></td></tr><tr><td>DMEM High Glucose</td><td>TH. Geyer</td><td>L0102</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12 w L-glutamine</td><td>Fisher Scientific</td><td>15373541</td><td></td></tr><tr><td>Donkey anti-Mouse IgG (H+L) Anticorps secondaire hautement adsorbé croisé, Alexa Fluor&trade ; 488</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-21202</td><td>Dilution : 1/500</td></tr><tr><td>Donkey anti-Rabbit IgG (H+L) Anticorps secondaire hautement adsorbé croisé, Alexa Fluor&trade ; 594</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-21207</td><td>Dilution : 1/500</td></tr><tr><td>DPBS sans calcium sans magnésium</td><td>TH. Geyer</td><td>L0615-500</td><td></td></tr><tr><td>EpCAM Anticorps polyclonal recombinant de lapin (22 HCLC)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td>710524 Dilution : 1/500</td></tr><tr><td>Acide éthylènediamine tétraacétique (EDTA)</td><td>Carl Roth</td><td>CN06.3</td><td></td></tr><tr><td>Falcon Tube 15 mL fond conique</td><td>Greiner BIO-ONE</td><td>188271-N</td><td></td></tr><tr><td>Falcon Tube 50 mL fond conique</td><td>Greiner BIO-ONE</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal de bovin, qualifié, inactivé par la chaleur, Brésil (FBS)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10500064</td><td></td></tr><tr><td>FlowJo V10.8.2</td><td>FlowJo&nbsp ;</td><td></td><td></td>663441</tr><tr><td>Gélatine de peau de porc</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1890-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Geltrex&trade ; Sans LDEV, qualifié hESC, à facteur de croissance réduit Matrice de membrane basale</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A1413301</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX&trade ; Supplément</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050038</td><td></td></tr><tr><td>Heracell&trade ; 240i Incubateur CO2</td><td>Fisher Scientific</td><td>16416639</td><td></td></tr><tr><td>Heraeus HeraSafe armoire de sécurité</td><td>Kendro</td><td>51017905</td><td></td></tr><tr><td>Human EGF, qualité premium</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-097-749</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ&nbsp ;</td><td>Fiji</td><td>Version 2.9.0</td><td></td></tr><tr><td>MEM Solution d’acides aminés non essentiels (100X)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11140035</td><td></td></tr><tr><td>Tube de microcentrifugation PP, 1,5 mL</td><td>Nerbe Plus</td><td>04-212-1000</td><td></td></tr><tr><td>Microscope Nikon eclipse TE2000-S</td><td>Nikon</td><td>TE2000-S</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps anti-alpha-fœtoprotéine de souris</td><td>R& D Systems</td><td>MAB1368</td><td>Dilution : 1/100</td></tr><tr><td>Souris anti-alpha-Smooth Muscle Actin</td><td>anticorps R& D Systems</td><td>MAB1420</td><td>Dilution : 1/100</td></tr><tr><td>Anticorps anti-tubuline bêta-III</td><td>de souris R& D Systems</td><td>MAB1195</td><td>Dilution : 1/100</td></tr><tr><td>mTeSR&nbsp ; 1</td><td>STEMCELL Technologiess</td><td>85850</td><td></td></tr><tr><td>Nanog (D73G4) XP Rabbit mAb&nbsp ;</td><td>Technologie de signalisation cellulaire</td><td>4903S</td><td>Dilution : 1/400</td></tr><tr><td>Normocure&trade ; (réactif antimicrobien)</td><td>Invivogen</td><td>anti-noc</td><td></td></tr><tr><td>Oct-4 Anticorps de lapin&nbsp ;</td><td>Technologie de signalisation cellulaire</td><td>2750S</td><td>Dilution : 1/400</td></tr><tr><td>Paraformaldéhyde (PFA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>441244-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline-Streptomycine (10.000 U/ml) (PS)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td>Le mélange de pénicilline-streptomycine contient 100 U/mL de pénicilline et 100 &micro ; g/mL de streptomycine.</td></tr>Centrifugeuse de paillasse <tr><td>réfrigérée Recombinante Humaine FGF-basic</td><td>PeproTech</td><td>100-18B</td><td></td></tr><tr><td>Centrale réfrigérée</td><td>PeproTech</td><td>100-00AB</td><td></td></tr><tr><td></td><td>SIGMA&nbsp ;</td><td>4-16KS</td><td></td></tr><tr><td>Cellule épithéliale rénale Milieu basal</td><td>ATCC</td><td>PCS-400-030</td><td></td></tr><tr><td>Kit de croissance des cellules épithéliales rénales</td><td>ATCC</td><td>PCS-400-040</td><td></td></tr><tr><td>Sox2 (L1D6A2) Souris mAb #4900</td><td>Technologie de signalisation cellulaire</td><td>4900S</td><td>Dilution : 1/400</td></tr><tr><td>SSEA4 (MC813) Souris mAb</td><td>NEB</td><td>4755S</td><td>Dilution : 1/500</td></tr><tr><td>StemFit&reg ; Basic02</td><td>Nippon Genetics</td><td>3821.00</td><td>La production de ce milieu a été arrêtée, utilisez plutôt StemFit Basic04CT pour les lignées cellulaires humaines ou StemFit Basic03 pour les primates non humains.</td></tr><tr><td>Triton X-100&nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787-50ML</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE&trade ; Sélectionnez Enzyme (1x), sans rouge de phénol (Enzyme de dissociation)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12563011</td><td></td></tr><tr><td>Waterbath Precision GP 05</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>TSGP05</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632, Sel de dichlorhydrate (Rock Inhibitor)</td><td>Biozol</td><td>BYT-ORB153635</td><td></td></tr><tr><td>Tampon</td><td></td><td></td> de dilution <td>d’anticorps Pour la composition, voir le supplément tableau S1</td></tr><tr><td>Tampon</td><td></td><td></td> de blocage <td>Pour la composition, voir le tableau supplémentaire S1</td></tr><tr><td>Milieu</td><td></td><td></td> REMC <td>Pour la composition, voir le tableau supplémentaire S1</td></tr><tr><td>Milieu</td><td></td><td></td><td>d’urine primaire Pour la composition, voir le tableau supplémentaire S1</td></tr><tr>Milieu <td></td><td></td><td>de culture PSC</td><td>Pour la composition, voir le tableau supplémentaire S1</td></tr><tr><td>Milieu de génération PSC</td><td></td><td></td><td>Pour la composition, voir le tableau supplémentaire S1</td></tr><tr><td>Tampon</td><td></td><td></td> de lavage <td>d’urine Pour la composition, voir le tableau supplémentaire S1</td></tr></tbody></table>

production et maintien de cellules souches pluripotentes induites par les primates dérivées de l’urine

Generation and Maintenance of Primate Induced Pluripotent Stem Cells Derived from Urine

Les approches interspécifiques qui étudient les cellules souches pluripotentes des primates et leurs dérivés sont cruciales pour mieux comprendre les mécanismes moléculaires et cellulaires de la maladie, du développement et de l’évolution. Pour rendre les cellules souches pluripotentes induites par les primates (CSPi) plus accessibles, cet article présente une méthode non invasive pour générer des CSPi de primates humains et non humains à partir de cellules dérivées de l’urine, et leur maintien à l’aide d’une méthode de culture sans nourrisseur.
L’urine peut être échantillonnée dans un environnement non stérile (p. ex. la cage de l’animal) et traitée avec un cocktail d’antibiotiques à large spectre pendant la culture cellulaire primaire afin de réduire efficacement la contamination. Après multiplication des cellules dérivées de l’urine, les CSPi sont générées par une méthode de transduction modifiée d’un système vectoriel du virus Sendai disponible dans le commerce. Les premières colonies d’iPSC peuvent déjà être visibles après 5 jours, et peuvent être cueillies après 10 jours au plus tôt. Le passage systématique d’amas avec tampon de dissociation sans enzyme soutient la pluripotence des CSPi générées pendant plus de 50 passages.

Lors de l’isolement de cellules de l’urine humaine et de l’urine de PSN, différents types de cellules peuvent être identifiés directement après l’isolement. Les cellules squameuses, ainsi que diverses cellules rondes plus petites, sont excrétées avec l’urine; l’urine féminine contient beaucoup plus de cellules malpighiennes que l’urine masculine (Figure 1B - Jour 0; Figure supplémentaire S1). Après 5 jours de culture dans un milieu urinaire primaire, les premières cellules a...

Le présent protocole décrit une méthode pour isoler, étendre et reprogrammer des cellules dérivées de l’urine de primates humains et non humains en cellules souches pluripotentes induites (CSPi), ainsi que des instructions pour le maintien sans alimentation des CSPi nouvellement générées.

Production et maintien de cellules souches pluripotentes induites par les primates dérivées de l’urine

Cross-species approaches studying primate pluripotent stem cells and their derivatives are crucial to better understand the molecular and cellular ...

Les IPSC sur les primates sont utiles mais souvent difficiles à obtenir en raison de problèmes éthiques et techniques. Ce protocole offre la voie la plus accessible pour la génération et la maintenance des IPSC des primates. L’utilisation de cellules urinaires comme source primaire de CSPI présente un grand avantage car elles peuvent être obtenues de manière totalement non invasive sans aucune technique particulière.Jessica Radmer, doctorante du Wolfgang M.S.Laboratory, fera la démonstration de la procédure. Pour commencer, centrifuger le tube contenant l’urine à 400G pendant 10 minutes. Ensuite, aspirez soigneusement le surnageant, en laissant environ un millilitre dans le tube et en y remettant en suspension la pastille.Lavez les cellules en ajoutant 10 millilitres de tampon de lavage urinaire contenant de l’amphotéricine et mélangez soigneusement la suspension à l’aide d’une pipette sérologique. Après centrifugation, aspirer soigneusement le surnageant, en laissant environ moins de 0,2 millilitre dans le tube. Remettez en suspension la pastille cellulaire dans un millilitre de milieu urinaire primaire contenant de l’amphotéricine par 50 millilitres d’urine initialement traitée.Retirer la gélatine et ajouter un millilitre de suspension dans un puits de plaque de 12 puits recouverte de gélatine. Incuber la plaque à 37 degrés Celsius avec 5% de dioxyde de carbone. Pour préparer une plaque de 12 puits revêtue d’une matrice membranaire basale, ajoutez 500 microlitres de matrice membranaire basale par puits.Déplacez la plaque pour distribuer le liquide et incuberez-la à 37 degrés Celsius pendant une heure. Après l’incubation, remplacez la matrice membranaire basale par 900 microlitres de milieu REMC et conservez-la à 37 degrés Celsius jusqu’à utilisation. Calculez le volume de virus Sendai nécessaire pour une multiplicité d’infection de cinq en utilisant l’équation.Décongelez rapidement les composants du kit de reprogrammation Sendai au bain-marie tempéré à 37 degrés Celsius. Ajouter le milieu REMC pour un total de 100 microlitres dans un tube avant d’ajouter le volume calculé de virus Sendai et de mélanger. Après dissociation des cellules urinaires comme décrit dans le manuscrit, comptez les cellules à l’aide du compteur de cellules et transférez le nombre souhaité de cellules dans un tube de 1,5 millilitre.Obtenir la pastille par centrifugation et la remettre en suspension dans 100 microlitres du mélange de virus Sendai préparé. Incuber le tube pendant une heure à 37 degrés Celsius pour l’infection en suspension. Après l’incubation, ajouter le REMC à un total d’un millilitre avant d’ensemencer la suspension cellulaire dans la plaque de 12 puits recouverte de matrice membranaire basale.Après la transduction, changer le milieu tous les deux jours jusqu’au développement de colonies de cellules souches pluripotentes induites, ou CISP, avec passage au milieu de génération de CSP le cinquième jour. Lorsque les colonies IPSC deviennent suffisamment grandes pour le passage des touffes, aspirez le milieu des cellules cultivées et lavez soigneusement les cellules avec 500 microlitres de DPBS. Après avoir retiré le DPBS, ajoutez 500 microlitres d’EDTA 0,5 millimolaire dans le puits et incuber pendant deux à cinq minutes.Observez attentivement les cellules au microscope jusqu’à ce que les colonies commencent à se détacher. Lorsque les bords des colonies commencent à se décoller et que les espaces entre les cellules deviennent visibles, retirez l’EDTA et ajoutez soigneusement 500 microlitres de DPBS. Aspirer le DPBS et rincer le puits avec 500 microlitres de milieu de culture PSC à l’aide d’une pipette P-1000.Pipeter de haut en bas pour disperser les colonies en touffes de taille appropriée. En fonction de la confluence, de la densité souhaitée des cellules ensemencées et de la préférence clonale IPSC, transférer 1/10 à 1/50 de la suspension d’amas cellulaires vers les nouveaux puits. Déplacez doucement la plaque d’avant en arrière plusieurs fois pour répartir les touffes uniformément dans le puits.Incuber la plaque pendant au moins 30 minutes à 37 degrés Celsius pour laisser les touffes se fixer. Changez le milieu tous les deux ou trois jours jusqu’à ce que les colonies deviennent assez grandes pour passer. Après l’isolement, on peut voir des cellules malpighiennes et diverses cellules rondes plus petites qui ont été excrétées avec l’urine.Les premières cellules adhérentes proliférant peuvent être vues, et ces cellules se développent en grandes colonies qui peuvent être traversées. Deux types de cellules distincts peuvent être observés, l’un ayant un phénotype épithélial et l’autre montrant un phénotype plus mésenchymateux avec une forme allongée. Après le premier passage, les cellules urinaires se développent comme une monocouche.Au cours de la génération de l’IPSC, certaines cellules adhérentes peuvent être vues et ces cellules commencent à montrer des changements morphologiques, indiquant une reprogrammation des cellules. De plus, les cellules qui forment les colonies présentent la morphologie typique des cellules souches embryonnaires. Tous les IPSC générés partagent la morphologie typique des colonies de cellules souches embryonnaires, caractérisées par des cellules serrées avec des bords clairement définis.L’immunocytochimie a été utilisée pour tester l’expression de marqueurs associés à la pluripotence dans les IPSC des gorilles. De plus, l’analyse par cytométrie de flux a montré que les IPSC des orangs-outans analysés sont positifs pour TRA-1-60. De plus, les IPSC des gorilles sont capables de se différencier en lignées endodermiques, mésodermiques et ectodermiques.Un nombre accru de cellules différenciées et une perte d’intégrité et d’uniformité des frontières indiquent une mauvaise qualité du CISP. En revanche, des frontières définies, un emballage cellulaire serré et des nucléoles proéminents signifient des IPSC de haute qualité. En raison de la variabilité coronale, il faut optimiser les conditions spécifiques du clone, telles que le taux de fractionnement, le temps de passage et la taille des amas pour maintenir la croissance des IPSC des primates en bonne santé.En tant que contrôles de qualité des IPSC établis, on peut vérifier la pré-puissance par induction directe ou indirecte de différenciation telle que la différenciation in vitro EV, en plus de vérifier l’expression génique marqueur.

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