Name: Utilisation de réactifs de référence pour confirmer la robustesse des tests de libération de cytokines pour la prédiction de l’innocuité des anticorps monoclonaux (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-09-15T14:55:00.000+00:00
Duration: 6 min 37 s
Description: Découvrez comment utiliser des réactifs de référence pour valider la robustesse des tests de libération de cytokines et prédire l'innocuité des anticorps monoclonaux thérapeutiques. Cette méthode standardisée améliore la reproductibilité inter-laboratoires.

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<ol><li>Suntharalingam, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+storm+in+a+phase+1+trial+of+the+anti-CD28+monoclonal+antibody+TGN1412%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cytokine storm in a phase 1 trial of the anti-CD28 monoclonal antibody TGN1412.</a> The New England Journal of Medicine. 355 (10), 1018-1028 (2006).</li>
<li>Hünig, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+storm+has+cleared%3A+lessons+from+the+CD28+superagonist+TGN1412+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">The storm has cleared: lessons from the CD28 superagonist TGN1412 trial.</a> Nature Reviews Immunology. 12 (5), 317-318 (2012).</li>
<li>Wing, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+first-dose+cytokine-release+syndrome+by+CAMPATH+1-H%3A+involvement+of+CD16+%28FcgammaRIII%29+and+CD11a%2FCD18+%28LFA-1%29+on+NK+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Mechanism of first-dose cytokine-release syndrome by CAMPATH 1-H: involvement of CD16 (FcgammaRIII) and CD11a/CD18 (LFA-1) on NK cells.</a> Journal of Clinical Investigation. 98 (12), 2819-2826 (1996).</li>
<li>Gaston, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OKT3+first-dose+reaction%3A+Association+with+T+cell+subsets+and+cytokine+release%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">OKT3 first-dose reaction: Association with T cell subsets and cytokine release.</a> Kidney International. 39 (1), 141-148 (1991).</li>
<li>Riechmann, L., Clark, M., Waldmann, H., Winter, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reshaping+human+antibodies+for+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Reshaping human antibodies for therapy.</a> Nature. 332 (6162), 323-327 (1988).</li>
<li>Kung, P., Goldstein, G., Reinherz, E. L., Schlossman, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+antibodies+defining+distinctive+human+T+cell+surface+antigens%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Monoclonal antibodies defining distinctive human T cell surface antigens.</a> Science. 206 (4416), 347-349 (1979).</li>
<li>Ball, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+C+region+influences+TGN1412-like+functional+activity+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Antibody C region influences TGN1412-like functional activity in vitro.</a> Journal of Immunology. 189 (12), 5831-5840 (2012).</li>
<li>Vessillier, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+first+reference+antibody+panel+for+qualification+and+validation+of+cytokine+release+assay+platforms+-+Report+of+an+international+collaborative+study%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine%3A+X%22%5BJournal%5D)">Development of the first reference antibody panel for qualification and validation of cytokine release assay platforms - Report of an international collaborative study.</a> Cytokine: X. 2 (4), 100042(2020).</li>
<li>Findlay, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+in+vitro+methods+to+predict+the+in+vivo+toxicity+in+man+of+therapeutic+monoclonal+antibodies+including+TGN1412%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Improved in vitro methods to predict the in vivo toxicity in man of therapeutic monoclonal antibodies including TGN1412.</a> Journal of Immunological Methods. 352 (1-2), 1-12 (2010).</li>
<li>oVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Science+Education+Database.+Basic+Methods+in+Cellular+and+Molecular+Biology.+Using+a+Hemacytometer+to+Count+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Science Education Database. Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. Using a Hemacytometer to Count Cells.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2023).</li>
<li>Lehmann, J. S., Zhao, A., Sun, B., Jiang, W., Ji, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+Cytokine+Profiling+of+Stimulated+Mouse+Splenocytes+Using+a+Cytometric+Bead-based+Immunoassay+Platform%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Multiplex Cytokine Profiling of Stimulated Mouse Splenocytes Using a Cytometric Bead-based Immunoassay Platform.</a> Journal of Visualized Experiments. (129), e56440(2017).</li>
<li>Murthy, H., Iqbal, M., Chavez, J. C., Kharfan-Dabaja, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+Release+Syndrome%3A+Current+Perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Immunotargets+Therapy%22%5BJournal%5D)">Cytokine Release Syndrome: Current Perspectives.</a> Immunotargets Therapy. 8, 43-52 (2019).</li>
<li>Vidal, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+cytokine+release+assays+for+predicting+cytokine+release+syndrome%3A+the+current+state-of-the-science.+Report+of+a+European+Medicines+Agency+Workshop%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine%22%5BJournal%5D)">In vitro cytokine release assays for predicting cytokine release syndrome: the current state-of-the-science. Report of a European Medicines Agency Workshop.</a> Cytokine. 51 (2), 213-215 (2010).</li>
<li>Grimaldi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+release%3A+A+workshop+proceedings+on+the+state-of-the-science%2C+current+challenges+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine%22%5BJournal%5D)">Cytokine release: A workshop proceedings on the state-of-the-science, current challenges and future directions.</a> Cytokine. 85, 101-108 (2016).</li>
<li>Vessillier, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+release+assays+for+the+prediction+of+therapeutic+mAb+safety+in+first-in+man+trials+-+Whole+blood+cytokine+release+assays+are+poorly+predictive+for+TGN1412+cytokine+storm%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Cytokine release assays for the prediction of therapeutic mAb safety in first-in man trials - Whole blood cytokine release assays are poorly predictive for TGN1412 cytokine storm.</a> Journal of Immunological Methods. 424, 43-52 (2015).</li>
<li>Chu, J. W. K., Sharom, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycophorin+A+interacts+with+interleukin-2+and+inhibits+interleukin-2-dependent+T-lymphocyte+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Immunology%22%5BJournal%5D)">Glycophorin A interacts with interleukin-2 and inhibits interleukin-2-dependent T-lymphocyte proliferation.</a> Cellular Immunology. 145 (2), 223-239 (1992).</li>
<li>Stebbings, R., Eastwood, D., Poole, S., Thorpe, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((After+TGN1412%3A+recent+developments+in+cytokine+release+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunotoxicology%22%5BJournal%5D)">After TGN1412: recent developments in cytokine release assays.</a> Journal of Immunotoxicology. 10 (1), 75-82 (2013).</li>
<li>Hanke, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lessons+from+TGN1412%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Lessons from TGN1412.</a> Lancet. 368 (9547), author reply 1570 1569-1570 (2006).</li>
<li>Stebbings, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%2334%3BCytokine+storm%26%2334%3B+in+the+phase+I+trial+of+monoclonal+antibody+TGN1412%3A+better+understanding+the+causes+to+improve+preclinical+testing+of+immunotherapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">#34;Cytokine storm&#34; in the phase I trial of monoclonal antibody TGN1412: better understanding the causes to improve preclinical testing of immunotherapeutics.</a> Journal of Immunology. 179 (5), 3325-3331 (2007).</li>
<li>Bartholomaeus, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+contact-dependent+priming+and+Fc+interaction+with+CD32%2B+immune+cells+contribute+to+the+TGN1412-triggered+cytokine+response%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Cell contact-dependent priming and Fc interaction with CD32+ immune cells contribute to the TGN1412-triggered cytokine response.</a> Journal of Immunology. 192 (5), 2091-2098 (2014).</li>
<li>Hussain, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upregulation+of+Fc%CE%B3RIIb+on+monocytes+is+necessary+to+promote+the+superagonist+activity+of+TGN1412%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Upregulation of FcγRIIb on monocytes is necessary to promote the superagonist activity of TGN1412.</a> Blood. 125 (1), 102-110 (2015).</li>
<li>Reed, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+autologous+endothelial+cell%3Aperipheral+blood+mononuclear+cell+assay+that+detects+cytokine+storm+responses+to+biologics%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">An autologous endothelial cell:peripheral blood mononuclear cell assay that detects cytokine storm responses to biologics.</a> The FASEB Journal. 29 (6), 2595-2602 (2015).</li>
<li>Eastwood, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Severity+of+the+TGN1412+trial+disaster+cytokine+storm+correlated+with+IL-2+release%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Clinical+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Severity of the TGN1412 trial disaster cytokine storm correlated with IL-2 release.</a> British Journal of Clinical Pharmacology. 76 (2), 299-315 (2013).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1,5 ml&nbsp ; Tubes de microcentrifugation, naturels (stériles)</td><td>Starlab</td><td>S1615-5510</td><td></td></tr><tr><td>Sérum de veau fœtal, qualifié, inactivé à la chaleur</td><td>ThermoFisher</td><td>10500064</td><td></td></tr><tr><td>Tubes héparinés</td><td>ThermoFisher</td><td>12967676</td><td></td></tr><tr><td>Heracell 150i Incubateur CO2</td><td>ThermoFisher</td><td>16406639</td><td></td></tr><tr><td>MESO QuickPlex SQ 120 Panneau pro-inflammatoire humain 1 kit V-PLEX&nbsp ;</td><td>Meso Scale Discovery</td><td>K15049</td><td></td></tr><tr><td>MESO QuickPlex SQ 120MM</td><td>Meso Scale Discovery</td><td>AI1AA-0</td><td></td></tr><tr><td>Neubauer Chambre de comptage d’hémocytomètre amélioré</td><td>Hawksley</td><td>AS1000</td><td></td></tr><tr><td>Panel de contrôles d’anticorps recombinants lyophilisés pour les tests de libération de cytokines</td><td>NISBC</td><td>19/156</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>ThermoFisher</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Plaque de microtitration en polypropylène à 96 puits&nbsp ;</td><td>Corning</td><td>3879</td><td></td></tr><tr><td>Plaque de microtitration en polystyrène à 96 puits</td><td>Corning</td><td>3799</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>ThermoFisher</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugeuse Sorvall ST 40</td><td>ThermoFisher</td><td>75004525</td><td></td></tr><tr><td>Eau stérile</td><td>ThermoFisher</td><td>15230162</td><td></td></tr></tbody></table>

utilisation de réactifs de référence pour confirmer la robustesse des tests de libération de cytokines pour la prédiction de l’innocuité des anticorps monoclonaux

Using Reference Reagents to Confirm Robustness of Cytokine Release Assays for the Prediction of Monoclonal Antibody Safety

Les résultats de l’essai SP devraient démontrer une libération d’IL-2, d’IFN-γ, d’IL-6 et de TNF-α12 dans la gamme pg/mL de tous les anticorps témoins positifs à 48 h et devraient être statistiquement significativement plus importantes que celles des témoins isotypes appariés. Nos résultats représentatifs démontrent que les anticorps de contrôle positif, αCD28, αCD3 et αCD28SA, induisent des niveaux significativement élevés d’IFN-γ, d’IL-6 et de TNF-α par rapport aux contrôles d’isotypes appariés, lorsqu’ils sont analysés dans le test PBMC SP (Figure 1). Ce test est également caractérisé par un changement élevé de la libération d’IL-2 lors de la stimulation avec αCD28SA par rapport à son isotype apparié (859,0). Alors que αCD3 et αCD52, tout en induisant l’expression de l’IL-2, entraînent des changements de pliage plus faibles que αCD28SA (6,2 et 3,3 pour αCD3 et αCD52, respectivement, figure 2).
Dans le test WB AQ (Figure 3), le niveau de cytokines détectables est nettement inférieur à celui du test PBMC SP, mais est caractérisé par une plus grande sensibilité à la stimulation par l’anticorps αCD52 (Figure 2 et Figure 3) avec des changements moyens de pliage de l’IL-2, de l’IFN-γ et de l’IL-6 supérieurs à 100.
Anticorps d’essai pour lequel on pourrait s’attendre à ce qu’une première dose future chez l’homme n’entraîne pas d’augmentation significative imprévue de la libération de cytokines par rapport aux témoins d’isotypes pertinents. Cependant, plutôt que d’arrêter le développement d’un nouvel anticorps monoplasmique thérapeutique, un résultat positif dans une ARC devrait être considéré comme faisant partie de la gestion des risques et des avantages13. Lors de l’élaboration d’une nouvelle plateforme ARC, le test doit être répété en utilisant un ensemble différent de donateurs pour assurer la reproductibilité de la plateforme. Il faut également tenir compte de la variabilité de la réponse entre les donateurs14, c’est pourquoi une expérience bien alimentée est recommandée15. Afin de comprendre l’étendue des réponses et d’obtenir une représentation complète de la variabilité qui pourrait être observée dans les réponses des donneurs, le test devrait idéalement être effectué avec plusieurs donneurs individuels en plus de tester le thérapeutique dans des expériences répétées.
<img alt="Graphique de sécrétion de cytokines PBMC-SP ; balance logarithmique ; IFN-γ, variantes IL ; Marqueurs de CD ; étude d’immunologie." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65087/65087fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> 
Figure 1 : Libération de cytokines à partir de l’expérience PBMC-SP. Résultats représentatifs de la libération d’IFN-γ, d’IL-2, d’IL-6 et de TNF-α obtenus à partir de tests de libération de cytokines PBMC-SP (3 expériences indépendantes contenant chacune 5 à 8 donneurs par expérience ; n = 8, n = 10, n = 5 [de haut en bas]) après 48 h lors de l’utilisation d’anticorps réactifs de référence. Abréviations : PBMC = cellules mononucléées du sang périphérique ; SP = phase solide ; IFN-γ = interféron-gamma ; IL-2 = interleukine 2 ; IL-6 = interleukine 6 ; TNF-α = facteur de nécrose tumorale alpha. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65087/65087fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Graphique à barres; taux de cytokines (IFN-γ, IL-2, IL-6, TNF-α) ; PBMC-SP, WB-AQ ; analyse des anticorps." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65087/65087fig02.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> 
Figure 2 : Augmentation du changement de pli des cytokines à partir des expériences PBMC-SP et WB-AQ. Changement de pli de l’IFN-γ, de l’IL-2, de l’IL-6 et du TNF-α libération de réactifs de référence d’anticorps inducteurs de CRS par rapport à leurs isotypes témoins appariés, obtenus à partir d’essais de libération de cytokines PBMC-SP et WB-AQ après 48 h. Abréviations : PBMC = cellules mononucléées du sang périphérique ; SP = phase solide ; WB = sang total ; AQ = aqueux (phase) ; IFN-γ = interféron-gamma ; IL-2 = interleukine 2 ; IL-6 = interleukine 6 ; TNF-α = facteur de nécrose tumorale alpha ; CRS = syndrome de libération de cytokines. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65087/65087fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Tableau de réponse aux cytokines, expériences WB-AQ, marqueurs αCD28 vs Ig, analyse des niveaux de cytokines." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65087/65087fig03.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> 
Figure 3 : Libération de cytokines à partir de l’expérience WB-AQ. Résultats représentatifs de la libération d’IFN-γ, d’IL-2, d’IL-6 et de TNF-α obtenus à partir d’essais de libération de cytokines WB-AQ (3 expériences indépendantes contenant chacune 5 à 8 donneurs par expérience ; n = 8, n = 10, n = 5 [de haut en bas]) après 48 h lors de l’utilisation d’anticorps réactifs de référence. Abréviations : WB = sang total ; AQ = aqueux (phase) ; IFN-γ = interféron-gamma ; IL-2 = interleukine 2 ; IL-6 = interleukine 6 ; TNF-α = facteur de nécrose tumorale alpha. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65087/65087fig03large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>

Utilisation de réactifs de référence pour confirmer la robustesse des tests de libération de cytokines pour la prédiction de l’innocuité des anticorps monoclonaux

New immunostimulatory antibody drugs designed to either directly stimulate specific immune cells or indirectly enhance the immune response by blocking or ...

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Utilisation de réactifs de référence pour confirmer la robustesse des tests de libération de cytokines pour la prédiction de l’innocuité des anticorps monoclonaux

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