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DOI: 10.3791/65106-v
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This study presents a protocol for measuring the lipolytic rates in adipocytes, utilizing both cultured cells and ex vivo adipose tissue from murine models. The findings significantly demonstrate the differences in lipolytic rates under basal and stimulated conditions.
La lipolyse des triglycérides dans les adipocytes est un processus métabolique important entraînant la libération d’acides gras libres et de glycérol. Ici, nous fournissons un protocole détaillé pour mesurer la lipolyse basale et stimulée dans les adipocytes et le tissu adipeux ex vivo de souris.
Ce protocole détaille la détermination du taux de lipolyse adipocytaire dans les adipocytes en culture ou le tissu adipeux ex vivo, permettant de comparer les taux lipolytiques entre modèles murins ou traitements. Ce protocole utilise l’échantillonnage en série, ce qui permet de valider en interne que la lipolyse est mesurée dans la phase linéaire et réduit l’erreur de mesure. Avec optimisation, ce protocole peut être utilisé pour mesurer la lipolyse dans le tissu adipeux brun, le tissu adipeux d’autres organismes ou les lignées cellulaires adipogènes.
Les tissus ex vivo doivent être coupés en petits morceaux de taille et de forme constantes pour permettre la séquestration des acides gras libres libérés par le BSA dans le milieu. Pour commencer, préparez le milieu BSA à 5% en dissolvant cinq grammes d’albumine sérique bovine, ou BSA, dans 100 millilitres de milieu d’aigle modifié de Dulbecco, ou DMEM, sans rouge de phénol. Remuer doucement la solution pour dissoudre le BSA.
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