Détection quantitative des réticulations ADN-protéines et de leurs modifications post-traductionnelles

Le présent protocole met en évidence une méthode modifiée pour détecter et quantifier les réticulations ADN-protéines (DPC) et leurs modifications post-traductionnelles (PTM), y compris l’ubiquitylation, la SUMOylation et l’ADP-ribosylation induites par les inhibiteurs de la topoisomérase et par le formaldéhyde, permettant ainsi l’étude de la formation et de la réparation des DPC et de leurs PTM.

Eh bien, mes recherches se concentrent sur la réparation des dommages à l’ADN. En particulier, la réparation des dommages à l’ADN induits par les inhibiteurs de la topoisomérase, par les inhibiteurs de PARP et par les aldéhydes. J’essaie d’illustrer les mécanismes moléculaires par lesquels les cellules réparent les réticulations entre l’ADN et les protéines induites par ces médicaments.

Les progrès récents dans la réparation des réticulations des protéines de l’ADN comprennent l’identification de nouvelles voies de réparation pour les réticulations des protéines de l’ADN et les mécanismes de modification post-greffe qui régulent ces voies de réparation. Le test in vivo du complexe enzymatique et le test de récupération des adduits de l’ADN sont les méthodes les plus utilisées pour mesurer les réticulations des protéines de l’ADN et certaines réticulations des protéines de l’ADN, telles que les réticulations des protéines de l’ADN topoisomérase une, peuvent être détectées par immunofluorescence à l’aide d’un anticorps spécifique. L’un des plus grands défis est l’étude du rôle des modifications post-traductionnelles dans la réparation des réticulations des protéines de l’ADN.

Il a été très difficile d’enrichir et de détecter les réticulations conjuguées des protéines de l’ADN avec modificateur post-traductionnel en raison de leur très faible abondance. Ce protocole fournit des détails sur la détection d’une quantification des réticulations des protéines de l’ADN déubiquitylées, SUMOylées et ADP-ribosylées, permettant aux chercheurs d’étudier la cinétique et la formation de ces modifications dans la réparation des réticulations des protéines de l’ADN provenant de différentes sources. D’autres protocoles de détection des réticulations des protéines de l’ADN ne contiennent pas d’étapes décrivant la détection de leurs modifications post-traductionnelles.

Bien que ce protocole fournisse des détails tels que les concentrations de médicaments et les durées pour induire les modifications et les méthodes pour séparer et détecter les modifications, ainsi que les méthodes pour stabiliser les modifications. Ainsi, plusieurs modifications post-greffe ont été identifiées dans la réparation des réticulations des protéines de l’ADN. La façon dont ils coordonnent la réparation reste largement inconnue.

Par conséquent, l’interaction entre ces modifications mérite une enquête plus approfondie.