Un ensemble de techniques de dépistage pour un aperçu rapide de la fonction des neutrophiles
9 février 2024
Ce protocole comprend un ensemble de tests fonctionnels des neutrophiles à utiliser comme méthode de criblage pour couvrir les fonctions de différentes voies de signalisation. Le protocole comprend une évaluation initiale et simple de la viabilité cellulaire, de la pureté, de la production d’espèces réactives de l’oxygène, de la migration en temps réel, de la phagocytose et d’une suggestion préliminaire de pièges extracellulaires à neutrophiles.
Le protocole NeutroFun Screen fournit un groupe de tests fonctionnels qui utilisent des produits chimiques peu coûteux et peuvent être effectués en une seule expérience à partir de neutrophiles frais. Cela permet une évaluation préliminaire de certaines fonctions majeures des neutrophiles afin de guider des études de suivi plus laborieuses et coûteuses. La recherche sur les neutrophiles utilise diverses conditions de modulation.
Tels que les cytokines, les peptides, les produits microbiens et les stimuli physiques. De plus, analyse la cytométrie en flux, la multiomique, les dispositifs microfluidiques et l’immunocytochimie. La vaste gamme de conditions et de tests utilisés en combinaison rend le flux de travail de la recherche sur les neutrophiles long, laborieux et coûteux.
En règle générale, dans ces réductions, le nombre de conditions testées ou le nombre de tests effectués, les méthodes actuelles de l’état de l’art nécessitent de nombreuses configurations, de nombreuses cellules et de longues procédures de préparation. Notre protocole NeutroFun Screen offre une approche plus rapide et plus rentable pour évaluer la fonctionnalité cellulaire par rapport à d’autres méthodes. Ceci est réalisé en combinant diverses analyses au sein du protocole, tout en maintenant la précision et l’exhaustivité des résultats.
Deux chercheurs ont effectué ce flux de travail simultanément pour obtenir un aperçu rapide de la fonction des neutrophiles. Le premier chercheur isole les PMN, ajuste la concentration et incube les systèmes d’activation, tandis que le deuxième chercheur prépare le matériel pour les cas suivants. Ensuite, le chercheur 1 effectue des tests de phagocytose et de colorimétrie NBT, tandis que le deuxième chercheur effectue des tests de migration et de lame NBT en temps réel.
Aperçu
Le protocole de test NeutroFun propose une série de tests fonctionnels pour les neutrophiles, utilisant des produits chimiques peu coûteux dans une seule expérience. Ce protocole permet une évaluation préliminaire des fonctions clés des neutrophiles, facilitant ainsi la conception d'études plus approfondies.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Biologie des neutrophiles
- Signalisation cellulaire
- Immunologie
Contexte
- Les neutrophiles jouent un rôle crucial dans la réponse immunitaire.
- Les recherches impliquent souvent diverses conditions de modulation.
- Les dosages traditionnels peuvent être laborieux et coûteux.
- Le protocole NeutroFun vise à simplifier ce processus.
Objectif de l'étude
- Fournir une méthode de dépistage rentable pour les fonctions des neutrophiles.
- Évaluer la viabilité cellulaire, la pureté et la production d'espèces réactives de l'oxygène.
- Analyser en temps réel la migration et la phagocytose.
Méthodes utilisées
- Essais fonctionnels pour les neutrophiles
- Évaluation de la viabilité cellulaire et de la pureté
- Mesure de la production d'espèces réactives de l'oxygène
- Évaluation de la migration et de la phagocytose
Résultats principaux
- L'évaluation initiale des fonctions des neutrophiles a été couronnée de succès.
- Des produits chimiques peu coûteux ont permis des tests efficaces.
- Les résultats orientent vers des études ultérieures plus détaillées.
- Le protocole s'adapte à diverses conditions expérimentales.
Conclusions
- Le protocole NeutroFun simplifie les tests fonctionnels des neutrophiles.
- Il permet des évaluations préliminaires avant des études approfondies.
- Cette approche peut améliorer l'efficacité de la recherche sur les neutrophiles.
Questions fréquemment posées
Pertinence professionnelle pour l'industrie
Le dépistage rapide et multiplexé des fonctions des neutrophiles est essentiel pour la découverte précoce de médicaments en immunologie, permettant des tests d'hypothèses efficaces et une réduction des risques mécanistiques. Le protocole NeutroFun Screen offre un aperçu complet et rentable de la viabilité des neutrophiles, de la production de ROS, de la migration, de la phagocytose et de la formation de NET, soutenant le tri et la priorisation des portefeuilles. Cette approche maximise l'utilité des échantillons et accélère la prise de décision aux points critiques de découverte.
Applications stratégiques en recherche et développement en biopharmaceutique
Début de la découverte et validation de la cible
- Permet une interrogation rapide des voies fonctionnelles des neutrophiles dans diverses conditions modulatrices.
- Facilite la réduction des risques biologiques en fournissant des lectures fonctionnelles multiparamétriques à partir d'un seul échantillon.
- Renforce la confiance prédictive dans le choix des cibles et la validation mécanistique des modulateurs de l'immunité innée.
Développement de tests et criblage
- Prépare des systèmes de neutrophiles validés pour le criblage de composés et les tests fonctionnels en aval.
- Standardise les mesures de viabilité, de ROS, de migration et de phagocytose afin de développer des essais reproductibles.
- Permet un criblage évolutif et rentable de plusieurs conditions ou composés en parallèle.
Recherche translationnelle et préclinique
- Aligne les réponses fonctionnelles des neutrophiles avec des phénotypes immunitaires pertinents pour la maladie, afin d'explorer des biomarqueurs translationnels.
- Assure une continuité depuis la phase de découverte précoce jusqu'à la validation préclinique, en préservant les cellules pour des analyses omiques ou avancées.
- Facilite des décisions d'orientation adaptées au risque en intégrant des données fonctionnelles et mécanistiques.
Intégration des pipelines et des flux de travail
Le NeutroFun Screen s'inscrit à l'interface entre la phase de découverte précoce et l'identification de composés d'intérêt, permettant un profilage fonctionnel rapide avant des études précliniques exigeant des ressources importantes.
- Découverte en biologie : Permet la vérification d'hypothèses et la clarification des voies biologiques en multiplexant les fonctions clés des neutrophiles.
- Essais de criblage : Fournit des résultats reproductibles et quantitatifs pour la viabilité, les espèces réactives de l'oxygène (ROS), la migration et la phagocytose.
- Analyse : Permet la comparaison statistique des réponses fonctionnelles selon différentes conditions et stimuli.
- Recherche translationnelle : Conserve l'échantillon pour des analyses ultérieures en omique ou pour l'alignement de biomarqueurs, si nécessaire.
- Réutilisation en milieu professionnel : Propose un protocole souple et adaptable à diverses chaînes de développement et recherche en immunologie.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Accroît la confiance prédictive et réduit l'ambiguïté mécanistique dans la validation des cibles de l'immunité innée.
- Valeur opérationnelle : Rationalise les flux de travail, réduit les coûts et améliore la reproductibilité entre les équipes.
- Valeur stratégique : Permet de meilleures décisions d'avancement ou d'abandon et une meilleure efficacité du capital en concentrant les études de suivi sur les pistes prometteuses.
- Impact sur le portefeuille : Favorise la priorisation et l'avancement, ajustés au risque, des actifs en immunologie.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une expertise en isolement des neutrophiles, en tests fonctionnels et en microscopie.
- Requiert un accès à un équipement de base pour la culture cellulaire, la spectrophotométrie et l'analyse en temps réel de la migration cellulaire.
- Exige une standardisation interéquipes des conditions des tests et de l'interprétation des données.
- Peut être adapté aux ressources disponibles et aux contraintes d'échantillonnage selon les laboratoires.
- Limité par la courte durée de vie et la variabilité des échantillons primaires de neutrophiles.
F.A.Q. sur la bio-industrie pharmaceutique
Chapters in this video
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Introduction
2:00
Neutrophil Isolation and Activation
4:52
Nitrotetrazolium Blue Chloride (NBT) Assay for Evaluating ROS Production
7:49
Neutrophil Phagocytosis Assay
9:45
Real‐Time Polymorphonuclear Neutrophils (PMN) Chemotaxis Assay
11:09
Neutrophil Extracellular Trap (NET) Suggestive Assay
