Name: Criblage des canaux ioniques dans les cellules cancéreuses (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-06-16T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 19 s
Description: Découvrez le criblage des canaux ioniques dans les cellules cancéreuses pour identifier de nouvelles cibles thérapeutiques. Cette méthode permet d'évaluer l'effet des modulateurs sur la viabilité tumorale.

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Les auteurs remercient la Fondation de la famille Thomas E. & Pamela M. Mischell à S.S. et le financement de la Fondation Harold C. Schott de la chaire dotée Harold C. Schott, UC College of Medicine, à S.S.

Ciblage pharmacologique des canaux ioniques pour traiter les tumeurs solides

<ol><li>Prevarskaya, N., Skryma, R., Shuba, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion+channels+in+cancer%3A+Are+cancer+hallmarks+oncochannelopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Ion channels in cancer: Are cancer hallmarks oncochannelopathies.</a> Physiological Reviews. 98 (2), 559-621 (2018).</li>
<li>Rao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ligand-gated+neurotransmitter+receptors+as+targets+for+treatment+and+management+of+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Ligand-gated neurotransmitter receptors as targets for treatment and management of cancers.</a> Frontiers in Physiology. 13, 839437(2022).</li>
<li>Mohr, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer-associated+intermediate+conductance+Ca2%2B-activated+K%2B+channel+KCa3.1%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Cancer-associated intermediate conductance Ca2+-activated K+ channel KCa3.1.</a> Cancers. 11 (1), 109(2019).</li>
<li>Fels, B., Bulk, E., Petho, Z., Schwab, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+TRP+channels+in+the+metastatic+cascade%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceuticals%22%5BJournal%5D)">The role of TRP channels in the metastatic cascade.</a> Pharmaceuticals. 11 (2), 48(2018).</li>
<li>Eil, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ionic+immune+suppression+within+the+tumour+microenvironment+limits+T+cell+effector+function%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ionic immune suppression within the tumour microenvironment limits T cell effector function.</a> Nature. 537 (7621), 539-543 (2016).</li>
<li>Haustrate, A., Hantute-Ghesquier, A., Prevarskaya, N., Lehen'kyi, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+antibodies+targeting+ion+channels+and+their+therapeutic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Monoclonal antibodies targeting ion channels and their therapeutic potential.</a> Frontiers in Pharmacology. 10, 606(2019).</li>
<li>Kischel, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion+channels%3A+New+actors+playing+in+chemotherapeutic+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Ion channels: New actors playing in chemotherapeutic resistance.</a> Cancers. 11 (3), 376(2019).</li>
<li>Tuszynski, J., Tilli, T. M., Levin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion+channel+and+neurotransmitter+modulators+as+electroceutical+approaches+to+the+control+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Pharmaceutical+Design%22%5BJournal%5D)">Ion channel and neurotransmitter modulators as electroceutical approaches to the control of cancer.</a> Current Pharmaceutical Design. 23 (32), 4827-4841 (2017).</li>
<li>Kale, V. P., Amin, S. G., Pandey, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+ion+channels+for+cancer+therapy+by+repurposing+the+approved+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Targeting ion channels for cancer therapy by repurposing the approved drugs.</a> Biochimica Biophysica Acta. 1848 (10), 2747-2755 (2015).</li>
<li>Wickenden, A., Priest, B., Erdemli, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion+channel+drug+discovery%3A+Challenges+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Ion channel drug discovery: Challenges and future directions.</a> Future Medicinal Chemistry. 4 (5), 661-679 (2012).</li>
<li>Rocha, P. R. F., Elghajiji, A., Tosh, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasensitive+system+for+electrophysiology+of+cancer+cell+populations%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Bioelectricity%22%5BJournal%5D)">Ultrasensitive system for electrophysiology of cancer cell populations: A review.</a> Bioelectricity. 1 (3), 131-138 (2019).</li>
<li>Sengupta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B15-GABAA+receptors+negatively+regulate+MYC-amplified+medulloblastoma+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica%22%5BJournal%5D)">α5-GABAA receptors negatively regulate MYC-amplified medulloblastoma growth.</a> Acta Neuropathologica. 127 (4), 593-603 (2014).</li>
<li>Jonas, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+in+vivo+testing+of+compounds+targeting+Group+3+medulloblastomas+using+an+implantable+microdevice+as+a+new+paradigm+for+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">First in vivo testing of compounds targeting Group 3 medulloblastomas using an implantable microdevice as a new paradigm for drug development.</a> Journal of Biomedical Nanotechnology. 12 (6), 1297-1302 (2016).</li>
<li>Kallay, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulating+native+GABAA+receptors+in+medulloblastoma+with+positive+allosteric+benzodiazepine-derivatives+induces+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurooncology%22%5BJournal%5D)">Modulating native GABAA receptors in medulloblastoma with positive allosteric benzodiazepine-derivatives induces cell death.</a> Journal of Neurooncology. 142 (3), 411-422 (2019).</li>
<li>Pomeranz Krummel, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanoma+cell+intrinsic+GABAA+receptor+enhancement+potentiates+radiation+and+immune+checkpoint+response+by+promoting+direct+and+T+cell-mediated+anti-tumor+activity%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Radiation+Oncology%2C+Biology%2C+Physics%22%5BJournal%5D)">Melanoma cell intrinsic GABAA receptor enhancement potentiates radiation and immune checkpoint response by promoting direct and T cell-mediated anti-tumor activity.</a> International Journal of Radiation Oncology, Biology, Physics. 109 (4), P1040-P1053 (2021).</li>
<li>Bhattacharya, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutically+leveraging+GABAA+receptors+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Therapeutically leveraging GABAA receptors in cancer.</a> Experimental Biology and Medicine. 246 (19), 2128-2135 (2021).</li>
<li>Mazia, D., Schatten, G., Sale, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adhesion+of+cells+to+surfaces+coated+with+polylysine.+Applications+to+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Adhesion of cells to surfaces coated with polylysine. Applications to electron microscopy.</a> Journal of Cell Biology. 66 (1), 198-200 (1975).</li>
<li>Wiatrak, B., Kubis-Kubiak, A., Piwowar, A., Barg, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PC12+cell+line%3A+Cell+types%2C+coating+of+culture+vessels%2C+differentiation+and+other+culture+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">PC12 cell line: Cell types, coating of culture vessels, differentiation and other culture conditions.</a> Cells. 9 (4), 958(2020).</li>
<li>Baker, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fixation+in+cytochemistry+and+electron-microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histochemistry+and+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">Fixation in cytochemistry and electron-microscopy.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 6 (5), 303-308 (1958).</li>
<li>Chung, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histomorphological+and+molecular+assessments+of+the+fixation+times+comparing+formalin+and+ethanol-based+fixatives%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histochemistry+and+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">Histomorphological and molecular assessments of the fixation times comparing formalin and ethanol-based fixatives.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 66 (2), 121-135 (2018).</li>
<li>Crowley, L. C., Christensen, M. E., Waterhouse, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+mitochondrial+transmembrane+potential+by+TMRE+staining%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Measuring mitochondrial transmembrane potential by TMRE staining.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2016 (12), (2016).</li>
<li>Cory, A. H., Owen, T. C., Barltrop, J. A., Cory, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+an+aqueous+soluble+tetrazolium%2Fformazan+assay+for+cell+growth+assays+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Communications%22%5BJournal%5D)">Use of an aqueous soluble tetrazolium/formazan assay for cell growth assays in culture.</a> Cancer Communications. 3 (7), 207-212 (1991).</li>
<li>Maro, B., Marty, M. C., Bornens, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+and+in+vitro+effects+of+the+mitochondrial+uncoupler+FCCP+on+microtubules%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">In vivo and in vitro effects of the mitochondrial uncoupler FCCP on microtubules.</a> EMBO Journal. 1 (11), 1347-1352 (1982).</li>
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<li>Plumb, J. A., Milroy, R., Kaye, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+the+pH+dependence+of+3-%284%2C5-dimethylthiazol-2-yl%29-2%2C5-diphenyl-tetrazolium+bromide-formazan+absorption+on+chemosensitivity+determined+by+a+novel+tetrazolium-based+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Effects of the pH dependence of 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide-formazan absorption on chemosensitivity determined by a novel tetrazolium-based assay.</a> Cancer Research. 49 (16), 4435-4440 (1989).</li>
<li>Chakrabarti, R., Kundu, S., Kumar, S., Chakrabarti, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitamin+A+as+an+enzyme+that+catalyzes+the+reduction+of+MTT+to+formazan+by+vitamin+C%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Vitamin A as an enzyme that catalyzes the reduction of MTT to formazan by vitamin C.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 80 (1), 133-138 (2000).</li>
<li>Dong, G. W., Preisler, H. D., Priore, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+limitations+of+in+vitro+clonogenic+drug+sensitivity+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Chemotherapy+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Potential limitations of in vitro clonogenic drug sensitivity assays.</a> Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 13 (3), 206-210 (1984).</li>
<li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((STIM1-+and+Orai1-Mediated+Ca2%2Boscillation+orchestrates+invadopodium+formation+and+melanoma+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">STIM1- and Orai1-Mediated Ca2+oscillation orchestrates invadopodium formation and melanoma invasion.</a> Journal of Cell Biology. 207 (4), 535-548 (2014).</li>
</ol>

D.A.P.K. est cofondateur, président et chef de la direction d’Amlal Pharmaceuticals Inc. S.S. est cofondateur d’Amlal Pharmaceuticals Inc. et siège au conseil de surveillance de l’innocuité des médicaments de Bexion Pharmaceuticals, Inc.

Les changements dans la fonction du canal ionique modifient les cascades de signalisation intracellulaires, ce qui peut avoir un impact sur le fonctionnement global d’une cellule. Au cours de la dernière décennie, il est devenu de plus en plus clair que les canaux ioniques sont importants pour la croissance des cellules cancéreuses et les métastases. Il est important de noter que de nombreux canaux ioniques sont des cibles principales pour les traitements approuvés ciblant un large éventail de troubles2...

Les protéines de transport membranaire sont essentielles à la communication entre les cellules, ainsi qu’au maintien de l’homéostasie cellulaire. Parmi les protéines de transport membranaire, les canaux ioniques servent à stimuler la croissance et le développement des cellules et à maintenir l’état des cellules dans des environnements difficiles et changeants. Il a également été rapporté que les canaux ioniques conduisent et soutiennent le développement de tumeurs solides, à la fois systémiques et dans le système nerveux central (SNC)1,2. Par exemple, les canaux KCa3.1 sont responsables de la régulation du potentiel membranaire et du contrôle du volume cellulaire, ce qui est important dans la régulation du cycle cellulaire. Des canaux KCa3.1 défectueux ont été signalés pour contribuer à la prolifération anormale des cellules tumorales3. De plus, les canaux ioniques peuvent contribuer à la dissémination métastatique des cancers. Les canaux du potentiel récepteur transitoire (TRP), par exemple, sont impliqués dans l’afflux de Ca 2+ et de Mg2+; Cet afflux active plusieurs kinases et protéines de choc thermique qui fonctionnent pour réguler la matrice extracellulaire entourant une tumeur, ce qui est, à son tour, important pour initier les métastases cancéreuses4.
Étant donné que les canaux ioniques peuvent contribuer au développement de cancers, ils peuvent également être des cibles pour le traitement du cancer lié aux médicaments. Par exemple, la résistance aux modalités de traitement, y compris la chimiothérapie et la nouvelle immunothérapie, est liée à la dysrégulation de la fonction des canaux ioniques 5,6,7. En outre, les canaux ioniques deviennent des cibles médicamenteuses importantes pour entraver la croissance et le développement des cancers, avec des médicaments à petites molécules réutilisés (approuvés par la FDA) à l’étude, ainsi que des biopolymères, y compris des anticorps monoclonaux 1,2,8,9. Bien qu’il y ait eu beaucoup de progrès sur ce front, la découverte de médicaments contre le cancer des canaux ioniques reste sous-développée. Cela est dû en partie aux défis uniques de l’étude des canaux ioniques dans les cellules cancéreuses. Par exemple, il existe des limites techniques dans la mise en place de tests électrophysiologiques pour les composés à action lente et des différences temporelles dans l’activation des canaux et l’action du médicament. En outre, la solubilité des composés peut également entraver les progrès, car la plupart des systèmes électrophysiologiques automatisés couramment utilisés aujourd’hui utilisent des substrats hydrophobes, ce qui peut contribuer aux artefacts résultant de l’adsorption des composés. En outre, les grands traitements moléculaires bioorganiques tels que les produits naturels, les peptides et les anticorps monoclonaux sont techniquement difficiles à dépister à l’aide de tests électrophysiologiques conventionnels10. Enfin, les propriétés bioélectriques des cellules cancéreuses restent mal comprises11.
Pendant ce temps, la coloration par immunofluorescence des canaux ioniques est souvent difficile. Cela est dû, en partie, à la complexité de leurs structures et de leur contexte dans la membrane, qui ont un impact sur la capacité de générer et d’utiliser des anticorps pour les études de microscopie. Il est particulièrement important que la spécificité, l’affinité et la reproductibilité des anticorps utilisés pour colorer les canaux ioniques soient validées. Les anticorps commerciaux pour les canaux ioniques doivent être envisagés en fonction de leur stratégie de validation et de leur dossier de publication. Les expériences doivent inclure des témoins négatifs pour démontrer l’absence de liaison non spécifique par knockdown ou knockout de la protéine cible. Alternativement, les lignées cellulaires dans lesquelles la protéine cible est absente ou en faible abondance basée sur les déterminations d’ARNm ou de protéines peuvent servir de témoins négatifs. Par exemple, cette étude montre la localisation de la sous-unité du récepteur (GABA) Gabra5 dans une lignée cellulaire de médulloblastome (D283). Les cellules D283 avec un siRNA knockdown et les cellules Daoy, une autre lignée cellulaire de médulloblastome cérébelleux, ont été colorées pour Gabra5 et n’ont montré aucune coloration appréciable (données non présentées).
Ici, des méthodes sont présentées pour analyser et tester la fonction des canaux ioniques, ainsi que l’effet des modulateurs des canaux ioniques sur les cellules cancéreuses. Des protocoles sont fournis pour (1) colorer les cellules d’un canal ionique, (2) tester l’état polarisé des mitochondries, (3) établir la fonction du canal ionique à l’aide de l’électrophysiologie et (4) valider des médicaments in vitro. Ces protocoles mettent l’accent sur les études du récepteur 2,12,13,14,15,16 de l’acide gamma-aminobutyrique de type A (GABA A), un canal anionique chlorure et un récepteur neurotransmetteur inhibiteur majeur. Cependant, les méthodes présentées ici s’appliquent à l’étude de nombreuses autres cellules cancéreuses et canaux ioniques.

<table><tbody><tr><td>ABS SpectraMax Plate Reader</td><td>Dispositifs</td><td>moléculaires ABS</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Invitrogen</td><td>00-4555-56</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Flor 488</td><td>Invitrogen</td><td>A32723</td><td>Chèvre Anti-Lapin</td></tr><tr><td>Antibiotique-Antimycotique</td><td>Gibco</td><td>15240-062</td><td>100x</td></tr><tr><td>B27 Supplément</td><td>Gibco</td><td>12587-010</td><td>Manque de vitamine A</td></tr><tr><td>Biosécurité Armoire</td><td>LABCONCO</td><td>302381101</td><td>Classe II, Type A2</td></tr><tr><td>Albumine sérique bovine</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1606-100</td><td></td></tr><tr><td>CO2 Incubateur</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-998-211</td><td>Heracell VIOS 160i</td></tr><tr><td>Chlorure de calcium</td><td>Fisher Scientific</td><td>C7902</td> Boîtes de culture cellulaire <td>dihydratée</td></tr><tr><td>, 150 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-600-004</td><td></td></tr><tr><td>Fioles de culture cellulaire traitées, 75 cm2</td>Fisher <td>Scientific</td><td>430641U</td><td></td></tr><tr><td>Plaques de culture cellulaire traitées, 6 puits</td><td>Fisher Scientific</td><td>353046</td><td>Plaques</td></tr> de <tr><td>culture cellulaire traitées, 96 puits</td><td>Fisher Scientific</td><td>353072</td><td>Centrifugeuse traitée pour culture cellulaire</td></tr><tr><td></td><td>Eppendorf</td><td>EP-5804R</td><td>Réfrigéré</td></tr><tr><td>Corning CoolCell</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-210-0006</td><td></td></tr><tr><td>Couvre-lames, 22 x 22 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-553-450</td><td>Corning brand</td></tr><tr><td>D283 Med</td><td>ATCC</td><td>HTB-185</td><td></td></tr><tr><td>DABCO Supports de montage</td><td>EMS</td><td>17989-97</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Sigma Life Sciences</td><td>D9434</td><td></td></tr><tr><td>Diméthyle Sulfoxyde</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D2650</td><td>Qualité de culture cellulaire</td></tr><tr><td>DMEM/F12, milieu de base</td><td>Fisher Scientific</td><td>11330-032</td><td>Avec rouge de phénol</td></tr><tr><td>DMEM/F12, sans rouge de phénol</td><td>Fisher Scientific</td><td>21041-025</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E4378</td><td></td></tr><tr><td>Facteur de croissance épidermique</td><td>STEMCELL</td><td>78006.1</td><td></td></tr><tr><td>FCCP</td><td>Abcam</td><td></td><td></td>AB120081</tr><tr><td>sérum fœtal de bovin, qualifié</td><td>Gibco</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>Facteur de croissance des fibroblastes, Millipore basique</td><td></td><td>GF003</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps GARBA5</td><td>Aviva</td><td>ARP30687_P050</td><td>Lapin Polyclonal</td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Gibco</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>Glycérol Médium de montage</td><td>EMS</td><td>17989-60</td><td>avec DAPI+DABCO</td></tr><tr><td>Hémocytomètre</td><td>Millipore Sigma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heparine</td><td>STEMCELL</td><td>7980</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>HyClone</td><td>SH3023701</td><td>Solution</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP310-500</td><td>Solid</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>Plate-forme</td><td></td> ouverte <td>avec plugins Fiji</td></tr><tr><td>Immuno Mount DAPI</td><td>EMS</td><td>17989-97</td><td></td></tr><tr>Composés expérimentaux <td>KRM-II-08</td><td></td><td></td><td>non disponibles auprès d’une source commerciale</td></tr><tr><td>Leica Application Suite X</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Leucémie Facteur inhibiteur</td><td>Novus</td><td>N276314100U</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine</td><td>Gibco</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de magnésium</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M9272</td><td>Hexahydrate</td></tr><tr><td>Microscope, Microscope confocal</td><td>Leica</td><td>SP8</td><td></td></tr><tr><td>, Lumière</td><td>VWR</td><td>76382-982</td><td>DMiL MTS inversé</td></tr><tr><td>- Promega One Step</td><td>Promega</td><td>G3581</td><td></td></tr><tr><td>Pipette multicanaux, 0,5-10 & micro ; L</td><td>Eppendorf</td><td>Z683914</td><td></td></tr><tr><td>Pipette multicanaux, 10-100 & micro ; L</td><td>Eppendorf</td><td>Z683930</td><td></td></tr><tr><td>Pipette multicanaux, 30-300 & micro ; L</td><td>Eppendorf</td><td>Z683957</td><td></td></tr><tr><td>Nest-O-Patch</td><td>Heka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Neurobasal-A Medium</td><td>Gibco</td><td>10888022</td><td>Sans vitamine A</td></tr><tr><td>Neurobasal-A</td><td>Medium Gibco</td><td>12348-017</td><td>Rouge de phénol sans</td></tr><tr><td>acides aminés non essentiels</td><td>Gibco</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>NOR-QH-II-66</td><td></td><td></td><td>Composés expérimentaux non disponible auprès d’une source commerciale</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-998-944</td><td>4 pouces</td></tr><tr><td>de largeur Paraformaldéhyde</td><td>EMS</td><td>RT-15710</td><td></td></tr><tr><td>PATHCHMASTER</td><td>Heka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline-Streptomycine</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Système de perfusion</td><td>Nanion</td><td>4000120</td><td></td></tr><tr><td>PFA</td><td>EMS</td><td>RT-15710</td><td></td></tr><tr><td>Saline à phosphate Fisher</td><td>Scientific</td><td>AAJ75889K2</td><td>Réactif de qualité</td></tr><tr><td>Poly-D-Lysine</td><td>Fisher Scientific</td><td>A3890401</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-Lysine</td><td>Sigma Life Sciences</td><td>P4707</td><td></td></tr><tr><td>Port-a-Patch</td><td>Nanion</td><td>21000072</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure</td><td>de potassium Sigma Life Sciences</td><td>P5405</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps primaire</td><td>Invitrogen</td><td>MA5-34653</td><td>Rabbit Monoclonal</td></tr><tr><td>Prism</td><td>GraphPad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Propofol</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC0758676</td><td>Ampoule de 1 mL</td></tr><tr><td>QH-II-66</td><td></td><td></td><td>Composés expérimentaux non disponibles auprès d’une source commerciale</td></tr><tr><td>Réservoirs de réactifs</td><td>VWR</td><td>89094-664</td><td>Lames</td></tr><tr><td>stériles, 75 x 25 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-544-7</td><td>Givré d’un côté</td></tr><tr><td>Bicarbonate</td><td>de sodium Corning</td><td>25-035-Cl</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de sodium</td><td>Fisher Scientific</td><td>S271-3</td><td></td></tr><tr><td>Pyruvate de sodium</td><td>Gibco</td><td>11360-070</td><td></td></tr><tr><td>Synth-a-Freeze Medium</td><td>Gibco</td><td>R00550</td><td>Cryoconservation</td></tr><tr><td>TMRE</td> Fisher <td>Scientific</td><td>50-196-4741</td><td></td></tr><tr><td>Réactif TMRE Kit</td><td>Abcam</td><td>AB113852</td><td>Kit</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma Aldrich</td><td>NC0704309</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Gibco</td><td>15-250-061</td><td>Solution, 0,4</td></tr> % <tr><td>Trypsine/EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200-072</td><td>Solution, 0,25</td></tr> % <tr><td>Vortex Mixer</td><td>VWR</td><td>97043-562</td><td></td></tr><tr><td>Whatman Filter Paper</td><td>Fisher Scientific</td><td>09-927-841</td><td></td></tr></tbody></table>

criblage des canaux ioniques dans les cellules cancéreuses

Screening Ion Channels in Cancer Cells

Les canaux ioniques sont essentiels au développement cellulaire et au maintien de l’homéostasie cellulaire. La perturbation de la fonction des canaux ioniques contribue au développement d’un large éventail de troubles ou de canalopathies. Les cellules cancéreuses utilisent des canaux ioniques pour conduire leur propre développement, ainsi que pour s’améliorer en tant que tumeur et pour s’assimiler dans un microenvironnement qui comprend diverses cellules non cancéreuses. En outre, l’augmentation des niveaux de facteurs de croissance et d’hormones dans le microenvironnement tumoral peut entraîner une expression améliorée des canaux ioniques, ce qui contribue à la prolifération et à la survie des cellules cancéreuses. Ainsi, le ciblage pharmacologique des canaux ioniques est potentiellement une approche prometteuse pour traiter les tumeurs malignes solides, y compris les cancers primitifs et métastatiques du cerveau. Ici, des protocoles pour caractériser la fonction des canaux ioniques dans les cellules cancéreuses et des approches pour analyser les modulateurs des canaux ioniques afin de déterminer leur impact sur la viabilité du cancer sont décrits. Il s’agit notamment de colorer une cellule (s) pour un canal ionique, de tester l’état polarisé des mitochondries, d’établir la fonction du canal ionique à l’aide de l’électrophysiologie et d’effectuer des tests de viabilité pour évaluer la puissance du médicament.

Ci-dessus sont des procédures sélectionnées qui peuvent être utilisées pour caractériser les canaux ioniques dans les cellules cancéreuses. Le premier protocole met en évidence la coloration d’un canal ionique. Comme détaillé, il existe de nombreux défis lors de la coloration d’un canal ionique ou, d’ailleurs, de toute protéine présente dans la membrane extracellulaire. La figure 1 montre la coloration d’une sous-unité du récepteur pentamère GABAA. Le deuxième protocole met en évi...

Le ciblage pharmacologique des canaux ioniques est une approche prometteuse pour le traitement des tumeurs solides. Des protocoles détaillés sont fournis pour caractériser la fonction des canaux ioniques dans les cellules cancéreuses et tester les effets des modulateurs des canaux ioniques sur la viabilité du cancer.

Criblage des canaux ioniques dans les cellules cancéreuses

Ion channels are critical for cell development and maintaining cell homeostasis. The perturbation of ion channel function contributes to the development ...

La fonction des canaux ioniques est cruciale en biologie cellulaire et a un impact significatif sur la croissance du cancer. Notre équipe se concentre sur le ciblage des canaux ioniques pour faciliter les traitements contre le cancer. Le domaine a récemment acquis une meilleure compréhension du microenvironnement tumoral et de la façon dont les cellules cancéreuses s’installent dans les tissus sains, soulignant l’importance des canaux ioniques dans le cancer.L’un des plus grands défis de l’expérience actuelle est la disponibilité d’un modèle animal immunocompétent capable de tester efficacement les traitements thérapeutiques. Nous avons établi que le récepteur GABA A est une vulnérabilité thérapeutique à des cancers disparates et identifié une nouvelle classe d’activateurs du récepteur GABA A qui altèrent efficacement les cellules cancéreuses. Les canaux ioniques jouent un rôle crucial dans la régulation du comportement des cellules cancéreuses, et ils ont un grand potentiel en tant que cible pour le traitement du cancer.Notre recherche a mis en évidence comment une classe établie de médicaments peut être utilisée pour traiter efficacement le cancer.

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Criblage des canaux ioniques dans les cellules cancéreuses

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