Essai validable de réaction en chaîne de polymérase numérique par gouttelettes pour la détection de vecteurs viraux adéno-associés dans des études de bioexcrétion de larmes

Notre protocole quantifie les vecteurs viraux adéno-associés dans des matrices complexes. Une détection et une quantification précises sont essentielles pour évaluer leur performance dans les essais cliniques. Ce protocole vise spécifiquement à combler les lacunes réglementaires actuelles dans la conception d’études moléculaires conformes aux bonnes pratiques de laboratoire.

Dans le cadre du développement de vecteurs viraux, les organismes de réglementation exigent l’évaluation de la bioexcrétion des vecteurs. La ddPCR est une technologie prometteuse pour cette évaluation car elle permet une quantification précise sans l’utilisation d’une courbe standard et une sensibilité améliorée par rapport à la qPCR. La quantification précise dans les matrices complexes rencontrées dans les milieux cliniques, telles que les déchirures, peut être difficile à valider en raison de l’interférence et de l’inhibition de la PCR.

Des quantités limitées d’échantillons cliniques peuvent également limiter la capacité de détecter des événements rares si le test n’est pas suffisamment sensible. Notre approche développe un cadre reproductible et adaptable basé sur la ddPCR pour valider les tests à utiliser dans les études réglementées. Cette méthode évite une étape spécifique d’extraction de l’ADN, ce qui permet une validation plus rationalisée et fournit des critères clairs pour évaluer la performance du test afin d’assurer la robustesse et la répétabilité.

Ce protocole a le potentiel d’être appliqué à toute étude d’excrétion de vecteurs viraux, pas seulement à la détection de l’AAV dans les larmes, comme présenté ici. Il crée un cadre robuste et reproductible à partir duquel de multiples programmes réglementés adaptés à l’objectif peuvent être élaborés.