27 octobre 2023
Un protocole pour évaluer la destruction quantitative des cellules tumorales par les cellules de Jurkat exprimant le récepteur de l’antigène chimérique (CAR) ciblant l’antigène tumoral unique. Ce protocole peut être utilisé comme plate-forme de criblage pour l’optimisation rapide des constructions de charnières CAR avant la confirmation dans les lymphocytes T dérivés du sang périphérique.
Les cellules CAR-T sont constamment améliorées pour obtenir de meilleures réponses dans les essais cliniques humains. Nous cherchons des moyens d’évaluer cela dans notre laboratoire à l’aide d’une méthode impartiale à haut débit, comme l’utilisation de l’imagerie fluorescente pour filtrer les combinaisons qui fonctionnent le mieux. Il existe plusieurs combinaisons de constructions qui peuvent être conçues pour n’importe quel fragment variable de chaîne unique en modifiant la géométrie des domaines extracellulaire et charnière.
Nous avons conçu ce protocole pour identifier les combinaisons les plus efficaces dans l’élimination des cellules cibles à l’aide de cellules Jurkat. Il s’agit d’un protocole rapide et à haut débit pour cribler les constructions CAR en fonction de leur cytotoxicité à l’aide de cellules Jurkat, qui sont ensuite validées avec des cellules T conventionnelles. Une douzaine de constructions CAR différentes peuvent être testées simultanément dans une plaque de 96 puits en utilisant cette technique.
Ici, à Akhavan Lab, nous quantifions en chiffres absolus la cyclose directe des cellules cibles par les cellules CAR exprimant les cellules Jurkat à haut débit pour cribler plusieurs constructions CAR. L’objectif principal de notre laboratoire est d’améliorer la traduction clinique de la thérapie par cellules CAR-T contre les tumeurs cérébrales de haut grade. Nous tirons parti des criblages de médicaments à haut débit comme modalité pour améliorer la cytotoxicité des cellules CAR-T, ainsi que pour cibler le microenvironnement tumoral.
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Ce protocole décrit une méthode à haut débit pour évaluer la cytotoxicité des cellules Jurkat exprimant des CAR contre les cellules tumorales. Il permet un criblage rapide de diverses constructions de CAR pour identifier les combinaisons les plus efficaces pour cibler des antigènes tumoraux spécifiques.
Rapid, high-throughput cytotoxicity evaluation of CAR constructs in Jurkat cells enables early-stage de-risking and prioritization of CAR designs before resource-intensive primary T cell validation. This platform accelerates the identification of hinge-optimized CARs with superior target cell killing, supporting efficient portfolio triage in oncology cell therapy pipelines. By quantifying cytotoxicity across multiple constructs simultaneously, teams can make data-driven decisions at critical discovery inflection points.
This high-throughput cytotoxicity platform fits at the interface of early discovery and lead identification, bridging construct design with preclinical validation. It enables rapid hypothesis testing and construct triage before advancing to resource-intensive primary T cell or in vivo studies.