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DOI: 10.3791/65638-v
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This protocol describes methods to prepare peripheral, mature, and nuclear eye lens fiber cells for immunofluorescence staining to study complex cell-to-cell interdigitations and the membrane architecture.
Ce protocole décrit des méthodes pour préparer les cellules périphériques, matures et nucléaires de la fibre du cristallin de l’œil pour la coloration par immunofluorescence afin d’étudier les interdigitations complexes de cellule à cellule et l’architecture de la membrane.
Le cristallin est un organe ellipsoïde transparent situé dans la chambre antérieure de l’œil et est responsable de la focalisation fine de la lumière sur la rétine pour créer une image claire. La fonction de la lentille repose sur ses propriétés biomécaniques, les interdigitations complexes entre les cellules de la fibre de lentille se sont récemment avérées importantes pour la rigidité de la lentille. Bien que la morphologie spécialisée des cellules à fibres de cristallin ait déjà été décrite par microscopie électronique, on sait peu de choses sur les protéines nécessaires à ces membranes imbriquées.
Des études antérieures se sont appuyées sur des coupes de tissu de cristallin, qui ne permettent pas une visualisation claire de l’architecture cellulaire complexe. Nous avons créé et perfectionné une nouvelle technique pour préserver fidèlement les interdigitations membranaires complexes entre les cellules de fibres du cristallin pour la coloration et l’imagerie par microscopie confocale de protéines spécifiques. Dans ce protocole, il existe également une nouvelle méthode pour colorer les cellules fibreuses du centre de la lentille, également connue sous le nom de noyau de la lentille.
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