Name: Mesure de la fonction mitochondriale des lymphocytes T CD8 naïfs et effecteurs (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: Découvrez le test Mito Stress pour analyser la bioénergétique des lymphocytes T CD8 naïfs et effecteurs. Cette méthode permet d'évaluer le métabolisme mitochondrial et la signalisation du récepteur des cellules T en temps réel.

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<table><tbody><tr><td>Antimycine A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8674</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD28</td><td>Biolegend</td><td>102116</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD3/CD28 Dynabeads</td><td>ThermoFisher</td><td>11456D</td><td></td></tr><tr><td>Biotinylé anti-CD3</td><td>Biolegend</td><td>317320</td><td></td></tr><tr><td>Albumine sérique bovine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>108321-42-2</td><td></td></tr><tr><td>Kit d’isolement des lymphocytes T CD8a+</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-104-075</td><td></td></tr><tr><td>Filtres à cellules (100 &micro ; m)</td><td>CELL TREAT</td><td>229485</td><td></td></tr><tr><td>Acide éthylènediaminetétraacétique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E8008</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>26873-85-8</td><td>gradient de densité moyen&nbsp ;</td></tr><tr><td>FCCP ((4-(trifluorométhoxy) phényl)carbonohydrazonoyl dicyanure)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2920</td><td></td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-6152</td><td></td></tr><tr><td>Glutamine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7513</td><td></td></tr><tr><td>LS Colonnes</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>Colonnes de sélection positive</td></tr><tr><td>Colonne magnétique de séparation cellulaire</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-301</td><td></td></tr><tr><td>Microplaque</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr><tr><td>Oligomycine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>75351</td><td></td></tr><tr><td>Pyruvate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>113-24-6</td><td></td></tr><tr><td>Recobinant IL-2</td><td>PeproTech</td><td>200-02</td><td></td></tr><tr><td>Rotenone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8875</td><td></td></tr><tr><td>Média hippocampe</td><td>Agilent</td><td>103576-100</td><td></td></tr><tr><td>Cartouche de capteur</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9275</td><td></td></tr><tr><td>Stérile 6 puits</td><td>CELL TREAT</td><td>230601</td><td></td></tr><tr><td>Stérile 24 puits</td><td>CELL TREAT</td><td>229524</td><td></td></tr><tr><td>XF Calibrant</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr></tbody></table>

mesure de la fonction mitochondriale des lymphocytes t cd8 naïfs et effecteurs

Measuring Mitochondrial Function of Na&#239;ve and Effector CD8 T Cells

Les capacités métaboliques glycolytiques et oxydatives peuvent être mesurées à l’aide d’un test fonctionnel mitochondrial qui évalue les capacités en ciblant les composants de la chaîne de transport d’électrons à des points temporels particuliers (Figure 2A). Différents schémas d’injection peuvent être chargés sur les ports de cartouche du capteur pour modifier le test traditionnel et évaluer la stimulation TCR aiguë (Figure 2B,C). Le nombre de ...

Mesure de la fonction mitochondriale des lymphocytes T CD8 naïfs et effecteurs

Understanding how immunometabolism impacts the function, differentiation, and fate of lymphocytes has garnered significant interest and attention. ...

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JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

À médiation cellulaire lymphocytotoxicité (LMC) dosages peuvent être utilisés pour tester les réponses autoréactifs et étudier les mécanismes de mort cellulaire in vitro. Cependant, en utilisant des cellules vivantes techniques d'imagerie microscopique confocale avec des colorants fluorescents, le type et la cinétique de la mort cellulaire ainsi que les voies utilisées peuvent être étudiés plus en détail.

Méthodes d&#39;évaluation bêta Mediated la mort cellulaire par les lymphocytes T cytotoxiques

Cette vidéo démontre l’évaluation du fonctionnement mitochondrial des cellules endothéliales vasculaires cérébrales (CVE) à l’aide d’un test de flux extracellulaire. Les cellules CVE sont plaquées dans une plaque de culture cellulaire à flux extracellulaire. Les capteurs de flux extracellulaire sont hydratés avant d’être chargés et étalonnés dans le bioanalyseur. La plaque contenant les cellules est ensuite chargée pour analyse.

Évaluation de la fonction mitochondriale dans les cellules endothéliales vasculaires cérébrales

Ce protocole décrit un test de cytotoxicité sensible basé sur des cellules. En énumérant la diminution de la fréquence des lymphocytes T CD4+ cibles vivantes en présence d’un nombre croissant de lymphocytes T CD8+ effecteurs, ce test permet d’évaluer directement l’activité cytolytique des lymphocytes T CD8+ spécifiques de l’antigène.

Test de cytométrie en flux cellulaire pour mesurer l’activité cytotoxique

Décrit ici est un procédé pour détecter et quantifier les protéines de la membrane externe des mitochondries par immunomarquage des mitochondries isolées à partir de tissus et l'analyse par cytométrie en flux rongeur. Cette méthode peut être étendue à évaluer les aspects fonctionnels des sous-populations mitochondriales.

Immunodétection de la membrane externe de protéines par cytométrie en flux de mitochondries isolées

Cet article illustre une méthode puissante pour quantifier les mitochondries ou lysosomes dans les cellules vivantes. La combinaison de colorants spécifiques lysosome ou mitochondries avec des anticorps fluorescent conjugués contre marqueurs de surface permet la quantification de ces organites chez les populations de cellules mixtes, comme les cellules primaires récoltées dans des échantillons de tissus, en utilisant cytométrie en flux multicolore.

Multicolor Flow Cytometry-basé Quantification des mitochondries et des Lysosomes dans les cellules T

Nous décrivons ici un essai de tuerie in vivo basé sur la cytométrie en flux qui permet l’examen de l’immunodominance dans les réponses cytotoxiques des lymphocytes T (CTL) à un antigène tumoral modèle. Nous fournissons des exemples de la façon dont ce dosage élégant peut être utilisé pour les études mécanistes et pour les tests d’efficacité des médicaments.

Adaptation des dosages de cytotoxicité in vivo à l’étude de l’immunodominance dans des réponses cellulaires spécifiques à la tumeur et aux lymphocytes T

Ici nous décrivons une méthode fiable pour mesurer la masse mitochondriale et le potentiel de membrane dans les cellules souches hématopoïétiques et les cellules T cultivées ex vivo.

Mesure de la masse mitochondriale et du potentiel membranaire dans les cellules souches hématopoïétiques et les lymphocytes T par cytométrie de flux

L’adaptation métabolique est fondamentale pour les lymphocytes T car elle dicte la différenciation, la persistance et la cytotoxicité. Ici, un protocole optimisé pour surveiller la respiration mitochondriale dans les cellules T primaires humaines différenciées par cytokines ex vivo est présenté.

Surveillance en temps réel de la respiration mitochondriale dans les cellules T primaires humaines différenciées par cytokines

Une procédure d’étude de la dynamique du métabolisme de l’ADN mitochondrial (ADNmt) dans les cellules à l’aide d’un format de plaque multipuits et d’une imagerie automatisée par immunofluorescence pour détecter et quantifier la synthèse et la distribution de l’ADNmt est décrite. Cela peut être utilisé pour étudier les effets de divers inhibiteurs, stress cellulaires et silençage génique sur le métabolisme de l’ADNmt.

Quantification à haut débit basée sur l’image de la synthèse et de la distribution de l’ADN mitochondrial

Cette technique décrit un flux de travail efficace pour visualiser et mesurer quantitativement le potentiel de la membrane mitochondriale et les niveaux de superoxyde dans les cellules HeLa à l’aide de l’imagerie en direct basée sur la fluorescence.

Quantification basée sur la fluorescence du potentiel de membrane mitochondriale et des niveaux de superoxyde à l’aide de l’imagerie en direct dans les cellules HeLa

Les méthodes d’étude de la bioénergétique mitochondriale sous des concentrations de substrat physiologiquement pertinentes dans les cellules immunitaires sont limitées. Nous fournissons un protocole détaillé qui utilise la fluorespirométrie à haute résolution pour évaluer les changements dans la réponse du potentiel de la membrane mitochondriale à la demande d’énergie dans les cellules T humaines, les monocytes et les cellules mononucléées périphériques.

Fluorespirométrie à haute résolution pour évaluer les changements dynamiques du potentiel de la membrane mitochondriale dans les cellules immunitaires humaines

Découvrez le test Mito Stress pour analyser la bioénergétique des lymphocytes T CD8 naïfs et effecteurs. Cette méthode permet d'évaluer le métabolisme mitochondrial et la signalisation du récepteur des cellules T en temps réel.

Mesure de la fonction mitochondriale des lymphocytes T CD8 naïfs et effecteurs

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