Approches complémentaires pour interroger le flux de mitophagie dans les cellules β pancréatiques

Ce protocole décrit deux méthodes pour l’analyse quantitative de la mitophagie dans les cellules β pancréatiques : premièrement, une combinaison de colorants spécifiques aux mitochondries perméables aux cellules, et deuxièmement, un rapporteur de mitophagie génétiquement codé. Ces deux techniques sont complémentaires et peuvent être déployées en fonction de besoins spécifiques, ce qui permet une flexibilité et une précision dans l’adressage quantitatif du contrôle de la qualité mitochondriale.

Notre protocole décrit deux méthodes complémentaires pour étudier le flux de mitophagie des cellules bêta à la résolution d’une seule cellule par cytométrie en flux. Le protocole mt-Keima utilise un rapporteur de mitophagie génétique, tandis que le protocole MtPhagy combine trois colorants fluorescents, ce qui facilite l’extrapolation à des cellules difficiles à transfecter dans des échantillons humains. Les évaluations de la mitophagie à l’aide d’approches biochimiques traditionnelles et d’approches d’imagerie sont à la fois longues et difficiles.

Il est donc important de développer de nouvelles méthodes robustes et efficaces pour étudier le flux de mitophagie dans les cellules bêta. Les méthodes mt-Keima et MtPhagy sont toutes deux des évaluations quantitatives efficaces pour étudier le flux de mitophagie dans les cellules bêta pancréatiques. Ainsi, le laboratoire Soleimanpour se concentre sur les différents mécanismes qui conduisent à l’insuffisance des cellules bêta pancréatiques et au diabète.

Et nous nous concentrons spécifiquement sur les différents aspects du cycle de vie mitochondrial, y compris la mitophagie, pour comprendre comment les défauts de la fonction mitochondriale conduisent au développement du diabète.