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JoVE Journal Biology
Preparation of a Single-Cell Suspension from Mouse Carotid Arteries for Single-Cell Sequencing

Préparation d’une suspension unicellulaire à partir d’artères carotides de souris pour le séquençage unicellulaire

Full Text
3,667 Views
04:21 min
January 19, 2024

DOI: 10.3791/65863-v

Fengchan Li1, Zhen Zhu1, Yun Du1, Li Zhu1,2,3, Chaojun Tang1,2,3

1Cyrus Tang Hematology Center, Cyrus Tang Medical Institute,Soochow University, 2Collaborative Innovation Center of Hematology of Jiangsu Province,Soochow University, 3Suzhou Key Laboratory of Thrombosis and Vascular Biology,Soochow University

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study addresses the challenges of low cellular viability and large cell debris in vascular tissue dissociation by presenting a two-step cell digestion protocol specifically for mouse carotid arteries. The protocol yields a high viability single-cell suspension that is adaptable for other vessels, advancing techniques in cardiovascular research.

Key Study Components

Research Area

  • Cardiovascular research
  • Cell dissociation methods
  • Single-cell analysis

Background

  • Common issues with vascular tissue dissociation include low cellular viability and large debris.
  • Effective dissociation methods are crucial for studying various cell types within blood vessels.
  • Previous protocols may lack adaptability or require specialized equipment.

Methods Used

  • Two-step enzymatic cell digestion
  • Mouse carotid arteries
  • Filtration and centrifugation techniques

Main Results

  • 176,000 single cells were successfully collected from mouse carotid arteries.
  • The protocol enhanced dissociation efficiency and cell viability.
  • Unsupervised clustering identified four main cell types in the carotid arteries.

Conclusions

  • The study provides an effective protocol for preparing single-cell suspensions from carotid arteries.
  • This methodology has implications for targeted therapies in cardiovascular diseases.

Frequently Asked Questions

What advantages does this protocol offer over previous methods?
It provides higher cell viability and can be applied to various vascular tissues with minor adjustments.
Are any special instruments required for this protocol?
No, the methods can be carried out with common laboratory equipment.
What cell types can be isolated using this method?
The protocol allows for the isolation of multiple cell types found in the carotid artery.
How does the protocol impact cardiovascular research?
It facilitates the study of vascular biology by enabling detailed cellular analysis.
Is this method applicable to other tissues?
Yes, with minor modifications, it can be adapted for other vascular tissues.
What is the expected outcome of using this protocol?
The protocol aims to yield a high number of viable single cells for further analysis.

Nous décrivons ici un protocole de digestion cellulaire en deux étapes pour la préparation d’une suspension unicellulaire des artères carotides de souris.

La faible solubilité et le débriefing cellulaire plus important sont les principales difficultés de la dissociation du tissu vasculaire. Notre méthode de digestion en deux étapes est très appropriée pour la dissociation du tissu carotidien et peut être utilisée pour préparer des suspicions unicellulaires pour d’autres vaisseaux avec des modifications mineures, ce qui la rend très utile dans la recherche cardiovasculaire. Ce protocole est adapté à l’obtention de plusieurs types de cellules dans l’artère carotide, et il peut être facilement répété sans équipement spécial.

À l’avenir, nous visons à utiliser les sous-classes cellulaires découvertes par séquençage d’ions unicellulaires pour le traitement ciblé des maladies cardiovasculaires.

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