Optimisation du modèle murin de parodontite induite par ligature pour la recherche préclinique

Notre laboratoire étudie les maladies parodontales, en examinant comment l’inflammation cause des lésions aux gingivales et aux os chez différents groupes d’individus. Nous visons à freiner la gingivite et la parodontite en ciblant de nouveaux acteurs et voies nouvelles de la maladie. Le modèle simplifié de parodontite induite par ligature utilise un fil simple à double nœud entre les dents, utilisant des outils imprimés en 3D, le lit dentaire de la souris et le support de ligature, qui est en fait moins complexe que les modèles traditionnels.

Cette approche utilise la technique d’inhalation par anesthésie, qui permet une récupération plus rapide chez la souris, en moins de 10 minutes, comparé aux modèles plus traditionnels utilisant une anesthésie injectable, où le temps de récupération peut être d’environ 30 minutes. Pour préparer l’ensemble du lit dentaire de la souris, posez toutes les parties du lit dentaire et la colle sur la plateforme de travail. Ensuite, fixez les pièces stabilisatrices de la tête en place avec la colle.

À l’aide d’une lame numéro trois sur un manche de scalpel 15C, biseautez les bords tranchants de la partie extérieure du porte-ligature à un angle de 45 degrés pour réduire l’inconfort lors du verrouillage ou du déverrouillage. Alignez tous les coins arrondis internes sur la serrure du porte-ligatura. Retirez le flash des bords supérieur et inférieur de l’impression 3D, et biseaufrez ces bords à 45 degrés.

Retirez une tranche de chaque extrémité du support de ligature à un angle de 45 degrés pour éviter une blessure traumatique aux tissus mous. Assurez-vous que chaque extrémité du porte-ligature comporte une encoche en V. Si cette encoche en V est visible, placez doucement une lame de scalpel 15C à la base de l’encoche.

Maintenant, inclinez soigneusement la lame vers la surface extérieure de la pointe et affinez la base de l’encoche en V sur le bord extérieur. Si l’encoche en V n’est pas visible, placez une lame de scalpel 15C au centre de la pointe du porte-ligature et, d’un mouvement délibéré, effectuez une coupe peu profonde pour créer une encoche en V. Lors du passage de la ligature dans les rainures, assurez-vous que les deux nœuds sont centrés et à niveau lorsqu’ils sont vus à l’avant du support de la ligaure.

À l’aide d’un explorateur dentaire, vérifiez que la ligature rebondit en place sans glisser lorsqu’une légère force est appliquée entre les nœuds. Pour la pose de la ligature, placez la souris anesthésiée dans le lit dentaire de la souris, le dos contre le lit et le nez proche du cône du nez. À l’aide d’élastiques, stabilisez la tête de la souris et ouvrez sa bouche.

Pour placer une ligature du côté droit, tenez le porte-ligature dans la main droite et l’explorateur dans la main gauche. Placez doucement la pointe de l’explorateur sous le contact interproximal des première et deuxième molaires du côté palatal. Avec la pointe exploratrice, touchez d’abord les dents, puis descendez et reposez-vous contre la gencive pour éviter de traumatiser les tissus mous.

Reposez la poignée d’exploration en angle horizontale une fois correctement positionnée. Assurez-vous d’utiliser correctement la pointe Explorer pour la pose de la ligature. Accrocher l’explorateur à la zone de contact proximal et stabiliser la tête contre les forces réactionnaires.

Rétractez la joue à l’aide du support de ligature et positionnez la ligature au-dessus du contact interproximal entre la première et la deuxième molaire. Ensuite, faites pivoter la poignée du porte-ligature jusqu’à 45 degrés, et combinez un léger balancement et un glissement, poussez la ligature à travers le contact. À l’aide de pinces fines, attachez le fil excédentaire attaché au nœud du côté droit.

Tirez le fil à travers les dents vers la gauche, puis faites glisser les ciseaux le long du fil jusqu’à ce qu’il soit positionné à environ 1,5 millimètre du nœud avant de couper. Pour l’analyse micro CT, ouvrez le logiciel et cliquez sur Fichier, puis Importer l’image. Dans le menu contextuel, cliquez sur Parcourir.

Allez dans le dossier contenant les fichiers DICOM pour un scan et sélectionnez le premier fichier. Cliquez sur Examiner pour trouver et sélectionner d’autres fichiers dans le dossier pour le même échantillon scanné. Ensuite, cliquez sur OK. Une fois que les images commencent à charger, cliquez sur Visualiser et Isosurface.

Changez le seuil d’image à 5 000 et le pourcentage de facteur qualité de surface à 55. Cochez les cases Activer le lissage d’image et Clip Surface avec le ROI actuel, puis cliquez sur Mettre à jour. Pour ajuster les propriétés des niveaux, faites un clic droit sur Fenêtre/Niveau en bas, puis cliquez sur Modifier les propriétés de la fenêtre/Niveau.

Réglez la densité osseuse à 2 000 et gardez-la constante pour toutes les mesures. Pour manipuler les plans, utilisez les raccourcis clavier IJK hide and show pour les trois plans différents. Faites un clic droit et déplacez le curseur pour zoomer et dézoomer.

Appuyez sur Maj et cliquez sur le bouton gauche pour faire le panoramique. Ensuite, cliquez sur Trancher pour déplacer et faire pivoter les plans. Ensuite, cliquez sur le centre du plan pour le déplacer vers l’avant ou l’arrière.

Sinon, placez le curseur au centre du plan désiré, et utilisez les flèches haut et bas pour déplacer le plan une tranche à la fois. Cliquez sur le bord du plan pour faire tourner autour d’une droite parallèle à cette arête au centre du plan. Cliquez sur le coin d’un plan pour faire tourner autour du plan.

Ensuite, orientez la tranche Z, visible en bleu en haut de l’écran, de sorte que les surfaces des trois dents deviennent visibles en même temps ou aussi proches que possible. Ensuite, faites défiler le même plan de tranche Z jusqu’à ce que les racines des première et deuxième molaires deviennent visibles, afin de bien définir l’anatomie et les canaux environnants. Alignez l’axe des x avec les racines buccales des première et deuxième molaires à travers la partie centrale de chaque canal radiculaire.

Sinon, alignez-vous par la racine buccale de la première molaire et la racine distobucale de la deuxième molaire. Ensuite, utilisez l’orientation de la tranche X comme référence pour l’alignement de la tranche Y. Alignez la tranche Y verticalement parallèle à travers la racine de la première molaire du panneau de la tranche X.

Faites pivoter le plan pour orienter la racine verticalement, et observez que les lignes bleues traversent le milieu de la racine. Dans le panneau en tranche en Y, pour mesurer la distance entre la jonction cémento-émail, ou CEJ, et la crête alvéolaire, ou ABC, placez le curseur au point le plus profond de la rainure au niveau du CEJ et appuyez sur 1. Ensuite, placez le curseur au point le plus proche de l’ABC et appuyez sur 2.

Une flèche bleue indique le premier point, et le second point est indiqué par une flèche verte. Si les flèches indiquant les points de mesure n’apparaissent pas immédiatement, passez la flèche au-dessus des zones désirées et appuyez sur les touches numériques du clavier. Si la CJ est difficile à déterminer, utilisez les flèches haut et bas pour faire défiler les tranches adjacentes afin de confirmer sa position.

Lorsque déterminer le point le plus proche de l’ABC est difficile, mesurez plusieurs points pour assurer une mesure cohérente. Malgré notre succès avec notre article sur les protocoles, de nouveaux chercheurs ont encore rencontré des difficultés dans l’assemblage et l’utilisation des outils imprimés en 3D, du lit dentaire de la souris, du support de ligature. Pour y remédier, nous avons créé une vidéo étape par étape qui guide les chercheurs à travers l’assemblage et l’utilisation de ces outils imprimés en 3D afin qu’ils puissent être utilisés en laboratoire.

Notre équipe de recherche a utilisé des études cliniques et le modèle simplifié de parodontite induite par ligature pour découvrir comment un groupe de protéines nommé inflammasome peut être utilisé pour stopper le développement de l’inflammation et de la parodontite.