Name: Collecte sur le terrain et identification systématique en laboratoire de Rhodiola crenulata (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-10-27T13:20:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: Découvrez une méthode rapide d'identification de Rhodiola crenulata par observation morphologique, évaluation olfactive et chromatographie sur couche mince. Cette approche économique facilite la recherche en pharmacognosie et la conservation des plantes médicinales.

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Ce travail a été soutenu par la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (81973569, 82274207 et 82104533), le projet de promotion de la recherche Xinglin Scholar de l’Université de Chengdu de MTC (XKTD2022013) et le programme clé de recherche et développement du Ningxia (2023BEG02012).

Rhodiola crenulata est récolté dans la montagne enneigée de Zhuoda, comté de Ganzi, préfecture autonome tibétaine de Ganzi, province du Sichuan, Chine (N 31.44570°, E 99.96086°, 4892 m). Les plantes sont authentifiées comme authentiques par le professeur Yi Zhang de l’École de médecine ethnique de l’Université de médecine traditionnelle chinoise de Chengdu.
1. Collection de Rhodiola crenulata
<ol><li>Photographiez la carte de l’habitat du Rhodiola crenulata.</li>
	<li>Photographiez la plante entière, les feuilles, le calice et le rhizome de Rhodiola crenulata.</li>
	<li>Utilisez une bêche pour éliminer les mauvaises herbes et les pierres cassées à moins de 1 m de la Rhodiola crenulata afin d’assurer une exploitation minière en douceur.</li>
	<li>Déterrez le sol avec une houe jusqu’à ce que toute la rhizosphère soit visible et récupérez la racine pivotante. REMARQUE :Les racines et les rhizomes de Rhodiola crenulata utilisés dans les parties médicinales doivent être récoltés en automne, lorsque les tiges florales se fanent.</li>
</ol>2. Identification des caractéristiques
<ol><li>Observez les traits d’apparence de Rhodiola crenulata à l’œil nu : racines pivotantes et rhizomes cylindriques et courts, surface brune, épiderme jaune membraneux avec un motif rose et tranches rouge orangé ou bordeaux.</li>
	<li>Identifiez-le par l’odeur : Il donne une odeur parfumée lorsqu’il est près du nez.</li>
	<li>Identifiez-le par le goût : Prenez un petit morceau de racine dans la bouche, buvez d’abord puis mâchez, goûtez légèrement amer, puis sucré.</li>
</ol>3. Identification microscopique des granules d’amidon dans la poudre médicinale
<ol><li>Retirez la terre à la surface de la Rhodiola crenulata avec une brosse, mettez-la au four à 40 °C et retournez les herbes toutes les 24 h. REMARQUE : La facilité de rupture des matières médicinales est considérée comme la norme pour sécher l’humidité.</li>
	<li>Saupoudrer les médicaments séchés à l’aide d’une machine à poudre et filtrer la poudre médicinale à l’aide du tamis médicamenteux n° 3 (voir le tableau des matériaux).</li>
	<li>Prenez une lame propre (voir Tableau des matériaux), creusez la poudre avec une aiguille de dissection (voir Tableau des matériaux) et placez-la uniformément à un tiers de la lame à moins de 2 mm.</li>
	<li>Utilisez un compte-gouttes en verre (voir tableau des matériaux) pour ajouter une goutte d’eau désionisée à la poudre. Utilisez une pince à épiler (voir Tableau des matériaux) pour tenir une extrémité du verre de protection (voir Tableau des matériaux) pour toucher rapidement le niveau de liquide et couvrir la poudre. REMARQUE : Utilisez une aiguille anatomique pour mélanger doucement l’eau et la poudre médicinale afin d’assurer un mélange uniforme des échantillons. Il ne doit pas y avoir de bulles d’air entre la lame, la poudre et le verre de protection.</li>
	<li>Ouvrez le microscope (voir Tableau des matériaux) et placez la lame à l’étape 3.4 sur la plate-forme pour la fixer. Ajustez la source lumineuse et la spirale de mise au point grossière pour voir la poudre. Ajustez la fine spirale parafocale jusqu’à ce que les tissus soient clairement visibles. Passez à un objectif 40x et observez les granules d’amidon. REMARQUE : Amidonnez les grains se présentant comme un ou plusieurs grains, et le point ombilical apparaît en forme de chevron ou de fissure.</li>
</ol>4. Identification microscopique des cathéters, des cellules de liège, des fibres, des cellules de parenchyme du bois et des masses pigmentaires dans la poudre médicinale
<ol><li>Prenez une lame propre (voir Tableau des matériaux), creusez la poudre avec une aiguille de dissection (voir Tableau des matériaux) et placez-la au tiers de la lame.</li>
	<li>Utilisez un compte-gouttes en verre (voir le tableau des matériaux) pour ajouter une goutte d’hydrate de chloral (voir le tableau des matériaux) à la poudre. Prenez la diapositive avec une pince à épiler (voir tableau des matériaux) et chauffez-la trois fois dans la lampe à alcool, chaque fois pendant 1 s. REMARQUE : Les bulles doivent être évitées pendant le chauffage. Le liquide reste non fluide, ce qui indique que la pénétration est complète.</li>
	<li>Utilisez un compte-gouttes en verre pour ajouter une goutte de glycérine (voir tableau des matériaux). Utilisez une pince à épiler pour tenir une extrémité du verre de protection afin de toucher rapidement le niveau de liquide.</li>
	<li>Ouvrez le microscope et placez la lame sur la plate-forme pour la fixer. Ajustez la source lumineuse et la spirale de mise au point grossière pour voir la poudre. Ajustez la fine spirale parafocale jusqu’à ce que les tissus soient clairement visibles. Observez le cathéter, les cellules de liège, les fibres, les cellules du parenchyme en bois et le bloc pigmentaire en passant à une lentille d’objectif 40x. NOTE : Polygone ou long polygonal de cellules de liège, vaisseau en spirale avec structure hélicoïdale évidente, parenchyme du xylème contenant des cristaux de sable d’oxalate de calcium et bloc de pigment rouge ou rouge brunâtre.</li>
</ol>5. Préparation d’échantillons chromatographiques sur couche mince (CCM) de Rhodiola crenulata et de sa référence
<ol><li>Placez le papier de pesée sur la balance (voir tableau des matériaux) et pesez 3 g de poudre de Rhodiola crenulata.</li>
	<li>Prendre la poudre dans un flacon conique de 100 mL (voir Tableau des matériaux) et ajouter 25 mL de méthanol à l’aide d’une grosse pipette ventrale (voir Tableau des matériaux). Placez la bouteille conique dans l’instrument à ultrasons. Réglez la puissance sur 250 W, la fréquence sur 40 kHz et le temps sur 30 min (voir le tableau des matériaux), puis allumez l’instrument. REMARQUE : Le but de l’appareil à ultrasons est de s’assurer que la poudre de Rhodiola crenulata est complètement dissoute sans affecter les résultats des expériences chromatographiques ultérieures sur couche mince.</li>
	<li>Retirez la bouteille conique et rincez la bouteille extérieure à l’eau courante à température ambiante (RT).</li>
	<li>Aspirer 800 μL de liquide préparé à l’étape 5.3 avec une seringue de 1 mL. Filtrer avec une membrane filtrante microporeuse de 0,22 μm (voir le tableau des matériaux) et prélever 400 μL de solution d’échantillon à mi-courant de Rhodiola crenulata dans un flacon d’échantillon chromatographique.</li>
	<li>Peser et ajouter 2 mg de salidroside, de tyrosol et d’acide gallique (voir le tableau des matières) dans 3 flacons coniques distincts de 100 ml, respectivement. Ajoutez 25 mL de méthanol avec une grosse pipette ventrale dans chaque bouteille conique.</li>
	<li>Placez la bouteille conique dans l’instrument à ultrasons, réglez la puissance sur 250 W, la fréquence sur 40 kHz et le temps sur 30 min, puis répétez l’étape 5.3 (voir le tableau des matériaux).</li>
	<li>Aspirer 800 μL de liquide préparé à l’étape 5.6 avec une seringue de 1 mL. Filtrer avec une membrane filtrante microporeuse de 0,22 μm (voir le tableau des matériaux) et prélever 400 μL de solution étalon de salidroside, de tyrosol et d’acide gallique dans les flacons d’échantillon chromatographiques correspondants.</li>
</ol>6. Identification TLC
<ol><li>Pipeter du trichlorométhane (5 mL), de l’acétate d’éthyle (4 mL), du méthanol (2 mL) et de l’acide formique (0,5 mL) (voir le tableau des matières). Ajouter sur un côté du cylindre de chromatographie à double réservoir (voir tableau des matériaux), agiter et mélanger uniformément. Couvrir la culasse supérieure.</li>
	<li>Placer l’acide gallique, le salidroside, la solution étalon de tyrosol et la solution de Rhodiola crenulata sur le support d’échantillons dans les positions A1-A4.</li>
	<li>Placez la feuille de silicone de 5 cm x 10 cm (voir tableau des matériaux) sur la table d’échantillonnage. Démarrez la machine d’échantillonnage automatique (voir tableau des matériaux) et ouvrez la vanne de régulation d’air.</li>
	<li>Ouvrez le logiciel visionCATS (voir Tableau des matériaux). Cliquez sur Nouveau > Nouveau dossier (nommé test d’échantillon de Rhodiola crenulata ) > OK. Cliquez sur Nouvelle méthode (nom Test d’échantillon de Rhodiola crenulata ) > OK > ATS 4.</li>
	<li>Cliquez sur Terminer la définition de l’étape. Cliquez sur Suivre l’affectation pour modifier la description (acide gallique, salidroside, tyrosol et échantillon de Rhodiola crenulata ).</li>
	<li>Cliquez sur Étapes HPTLC. Définissez les paramètres de la couche mince (5 cm x 10 cm). Sélectionnez Type d’application (bande), définissez les paramètres (Tableau 1), puis cliquez sur le bouton OK .</li>
	<li>Qualité de remplissage/rinçage ouvert. Cochez Remplir uniquement le volume programmé. Réglez le niveau du fond du flacon (mm) sur 0,5 et cliquez sur le bouton OK.</li>
	<li>Cliquez sur Exécuter la méthode.</li>
	<li>Cliquez sur le bouton Suivre l’affectation , cochez la case Centre et définissez les paramètres (Tableau 2).</li>
	<li>Cliquez sur le bouton Continuer pour l’échantillonnage automatique.</li>
	<li>Éteignez la machine d’échantillonnage automatique et la vanne d’air. Retirez la feuille de silicone de la machine d’échantillonnage automatique.</li>
	<li>Placez la feuille de silicone de l’autre côté du cylindre de chromatographie à double réservoir à l’étape 6.1, couvrez la culasse supérieure et pré-saturez pendant 20 min.</li>
	<li>Serrez doucement l’extrémité supérieure de la plaque à couche mince avec une pince à épiler, placez rapidement la feuille de silicone dans l’agent de développement et couvrez la culasse supérieure. REMARQUE : Retirez la feuille de silicone lorsque le bord avant dépliable est à 0.5-1.0 cm de l’extrémité supérieure de la plaque de couche mince.</li>
	<li>Une fois le solvant organique évaporé, vaporisez la solution chromogène sur la surface de la feuille de silicone à température ambiante pour obtenir des résultats chromogènes. NOTE : La solution chromogène est une solution aqueuse contenant 2 % de FeCl3 et 1 % de K3[Fe(CN)6].</li>
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Caractérisation microscopique et identification par CCM du crénelé de rhodiola

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Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Il existe plus de 90 espèces de plantes de rhodiola dans le monde, et plus de 60% de toutes les espèces se trouvent en Chine, les plus courantes étant la Rhodiola crenulata, la Rhodiola rosea, la Rhodiolas achalinensis et la Rhodiola algida17. La Rhodiola crenulata, enregistrée dans la première partie de la pharmacopée chinoise (2020), est une médecine traditionnelle tibétaine cultivée en haute altitude. La demande du marché pour Rhodiola crenulata aug...

La phytothérapie a une longue histoire et une riche expérience d’application en Chine, et c’était le premier enregistrement systématique dans le classique à base de plantes de Shennong1. La découverte de l’artémisinine appliquée au paludisme a favorisé le développement de la phytothérapie à un nouveau stade1. L’utilisation de la technologie scientifique moderne pour découvrir le mécanisme exact de la phytothérapie augmente le taux d’utilisation et la demande de phytothérapie, ouvrant un nouveau marché international pour elle 2,3,4. Cependant, cela a entraîné une série d’effets négatifs. Les non-professionnels ont une vague compréhension des caractéristiques de la phytothérapie, ce qui fait que l’utilisation de la phytothérapie fait face à un énorme risque de sécurité5.
Rhodiola crenulata, l’une des plantes de l’espèce Rhodiola, est principalement distribuée au Tibet, au nord-ouest du Yunnan et à l’ouest du Sichuan en Chine (Figure 1)6,7. Rhodiola crenulata comprend du salidroside, du tyrosol, de l’acide gallique et d’autres composés pour le traitement des maladies liées à l’hypoxie grâce à la fonction de « revigorer le qi et de favoriser la circulation sanguine, d’éclaircir le pouls et de calmer l’asthme »8,9,10,11. L’étude sur le terrain montre que Rhodiola crenulata peut être trouvé dans les zones d’éboulis alpins, les pentes de ravines et les crevasses rocheuses à une altitude de 4 000 à 5 600 m. Son environnement de culture est froid, plein de soleil et de rayonnement intense, et il appartient à l’écosystème des prairies alpines. Rhodiola crenulata peut être distribué en populations lamellaires et ponctuelles en fonction du terrain de croissance, et le flux génétique peut être effectué par pollinisation croisée.
L’avortement pollinique du genre Rhodiola, l’excavation illégale et l’environnement écologique dégénéré font de Rhodiola crenulata une espèce en voie de disparition 6,12. Compte tenu de la valeur médicinale élevée de Rhodiola crenulata, des produits contrefaits devraient affluer sur le marché. Cet article présente l’habitat de Rhodiola crenulata et quelques méthodes pratiques d’identification en laboratoire. Tout d’abord, nous avons observé l’environnement de croissance de Rhodiola crenulata et ses propriétés médicinales. Deuxièmement, la microstructure de la poudre médicinale a été observée au microscope. La dernière étape est le point clé. Les composants représentatifs de Rhodiola crenulata ont été séparés et identifiés en fonction des différentes propriétés d’adsorption ou de dissolution de ces composants dans une certaine substance. Les méthodes d’authentification par ADN ou d’analyse métabolomique des plantes médicinales sont compliquées et coûteuses13. Ces méthodes de base, pratiques et économiques permettent d’identifier rapidement la Rhodiola crenulata.

<table><tbody><tr><td>0,22 &mu ; m millipore</td><td>filter Millipore SLGP033RB</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Machine d’échantillonnage automatique</td><td>CAMAG</td><td>ATS 4</td><td></td></tr><tr><td>Hydrate de chloral</td><td>Fuzhou Brunei Technology Co., Ltd</td><td>ST1002</td><td></td></tr><tr><td>Chromatographic&nbsp ; échantillon&nbsp ; bouteilles</td><td>Zhejiang ALWSCI Technology Co., Ltd</td><td>C0000008</td><td></td></tr><tr><td>Flacon conique</td><td>Sichuan Shubo Co., Ltd</td><td>1121</td><td></td></tr><tr><td>Verre de couverture</td><td>Citotest Labware Manufacturing Co., Ltd</td><td>10211818c</td><td></td></tr><tr><td>Aiguille de dissection</td><td>Shanghai Bingyu Fluid Technology Co., Ltd</td><td>BY-5026</td><td></td></tr><tr><td>Balance électronique</td><td>SHIMADZU</td><td>ATX124</td><td></td></tr><tr><td>Acétate d’éthyle</td><td>Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd</td><td>2022120901</td><td></td></tr><tr><td>Acide formique</td><td>Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd</td><td>Acide 2021110801</td><td></td></tr><tr><td>gaulois</td><td>Chengdu Herbpurify Co., Ltd</td><td>M-017</td><td></td></tr><tr><td>Glycérol</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd</td><td>10010618</td><td></td></tr><tr><td>Broyeur à grande vitesse</td><td>Beijing Zhongxingweiye Instrument Co., Ltd</td><td>FW-100</td><td></td></tr><tr><td>Méthanol</td><td>Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd</td><td>Microscope 20230108</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Chongqing Oprec Nistrument Co.,&nbsp ; Ltd</td><td>B203</td><td></td></tr><tr><td>Lame de microscope</td><td>Citotest Labware Manufacturing Co., Ltd</td><td>7105P-G</td><td></td></tr><tr><td>Four</td><td>Shanghai Yuejin Medical Equipment Co., Ltd</td><td>DHG-8145</td><td></td></tr><tr><td>Tamis de pharmacopée</td><td>Hangzhou Xingrun</td><td>usine de tamis 572423281330</td><td></td></tr><tr><td>Pipette</td><td>Changde BKMAM Biotechnology Co., Ltd</td><td>120302008</td><td></td></tr><tr><td>Salidroside</td><td>Chengdu Herbpurify Co., Ltd</td><td>H-040</td><td></td></tr><tr><td>Réservoir d’eau saturée&nbsp ;</td><td>Yancheng Liegu Technology Co., Ltd</td><td>10*20 P-1</td><td></td></tr><tr><td>Plaque de gel de silice</td><td>Yantai Jiangyou Silica Gel Development&nbsp ; Co., Ltd</td><td></td> HSG20211227 <td></td></tr><tr><td>Trichlorométhane</td><td>Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd</td><td>20221013-1</td><td></td></tr><tr><td>Pince à épiler&nbsp ;</td><td>Changde BKMAM Biotechnology Co., Ltd</td><td>130302027</td><td></td></tr><tr><td>Tyrosol</td><td>Chengdu Herbpurify Co., Ltd</td><td>L-042</td><td></td></tr><tr><td>Équipement à ultrasons</td><td>Ningbo Xinyi Ultrasonic Equipment Co., Ltd</td><td>SB-8200DTS</td><td></td></tr><tr><td>Pipette volumétrique</td><td>Changde BKMAM Biotechnology Co., Ltd</td><td>120301006</td><td></td></tr></tbody></table>

collecte sur le terrain et identification systématique en laboratoire de rhodiola crenulata

Field Collection and Laboratory Routine Identification of Rhodiola crenulata

L’identification des médicaments est la prémisse et la garantie de la sécurité des médicaments. La majorité des chercheurs scientifiques privilégient le processus d’identification simple, rapide, efficace et peu coûteux des plantes médicinales. Rhodiola crenulata est un médicament traditionnel tibétain cultivé à haute altitude, principalement distribué dans les régions du Tibet, du Yunnan et du Sichuan en Chine. Le crénelé de rhodiola possède de multiples bioactivités, telles que des propriétés anti-inflammatoires, anti-hypoxies et antioxydantes, et a un grand potentiel de développement. Avec la demande croissante du marché et une diminution rapide de la teneur en ressources, un grand nombre de produits confus de Rhodiola crenulata ont troublé les gens. Par conséquent, ce protocole introduit un processus standard pour l’identification de Rhodiola crenulata sur le terrain combiné à des tests de laboratoire de routine. La combinaison de l’habitat, des caractéristiques microscopiques et de la chromatographie sur couche mince permettra sans aucun doute d’identifier Rhodiola crenulata rapidement, efficacement et économiquement, contribuant ainsi au développement continu de la médecine tibétaine et au contrôle de la qualité des matériaux médicinaux.

Ce protocole expérimental décrit l’identification et la collecte de Rhodiola crénelée sur le terrain. Le crénelé de rhodiola a tendance à vivre dans les zones d’éboulis alpines, les pentes des ravins et les crevasses rocheuses à haute altitude. L’habitat, la plante entière, la fleur et les feuilles de Rhodiola crénelée peuvent être représentés à la figure 2. La rhodiola crénelée a un rhizome brun rougeâtre (figure 3A). Une ima...

Ici, nous décrivons l’identification de Rhodiola Crenulata à partir de l’habitat, de la morphologie des plantes, des propriétés médicinales, des caractéristiques microscopiques et de la chromatographie sur couche mince.

Collecte sur le terrain et identification systématique en laboratoire de Rhodiola crenulata

The identification of medicinal materials is the premise and guarantee of drug safety. The majority of scientific researchers are bound to favor the ...

La portée de notre recherche est centrée sur la réalisation d’une enquête sur les ressources de la médecine ethnique. Plus précisément, cette étude vise à développer des méthodes rapides et pratiques pour l’identification de Rhodiola crenulata. Le protocole que nous proposons présente une méthode rentable, simple et rapide pour identifier diverses matières médicinales à base de plantes.Notre laboratoire concentrera ses futurs efforts de recherche sur l’étude de deux domaines principaux, la répartition de la recherche associée à Rhodiola crenulata et les impacts pharmacologiques de cette espèce.

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Nous fournissons un protocole de génotypage coût-efficace et rapide moléculaire qui emploie diverses amorces spécifiques de PCR que les différences cibles séquence d'ADN au sein de la région de l'espaceur chloroplastique trnL-F à la différence entre les variétés...

Une méthode de génotypage basé sur la PCR pour distinguer les variétés de type sauvage et les plantes ornementales de Imperata cylindrica</em

Ici, nous utilisons une méthode d’extraction (PHWE) eau chaude sous pression, qui utilise une machine à expresso domestique non modifiée afin d’introduire les étudiants de premier cycle à la chimie des produits naturels dans le laboratoire. Deux expériences sont présentées : PHWE d’eugénol et acetyleugenol de clous de girofle et PHWE de seselin et (+)-epoxysuberosin de la plante australienne reflexa Correa.

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Présenté est un protocole pour un test de concurrence de plaque déterminer si un compost spécifique est susceptible de contenir des bactéries et des champignons qui inhibent la croissance de Rhizoctonia solani.

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Ici, les essais biologiques conçus pour suivre l’évolution d’un pathogène fongique, Colletotrichum fioriniae, en présence de bleuet ou canneberges extraits floraux sur couvre-objet en verre sont décrites. Eau - chloroforme- et l’eau de pluie de champ - basent florale extraction techniques sont détaillées ainsi que de mieux comprendre comment cette information peut être appliquée.

COLLETOTRICHUM fioriniae Développement dans l’eau et des extraits floraux axée sur le chloroforme aux bleuets et aux canneberges

Présenté ici est un protocole pour l’identification sur le terrain de Matricaria chamomilla à l’aide d’un système qPCR portable. Ce protocole facile à exécuter est idéal pour confirmer l’identité d’une espèce botanique à des endroits où l’accès à l’équipement et à l’expertise de laboratoire est limité, comme les fermes et les entrepôts.

Identification sur le terrain de Matricaria chamomilla à l’aide d’un système qPCR portable

Ici, nous testons la dissolution des granules de Rhodiola (RG) in vitro, traçons des courbes de dissolution du salidroside, de l’acide gallique et du gallate d’éthyle dans de l’eau ultrapure, et ajustons les courbes à différents modèles mathématiques. Ce protocole fournit des informations et des conseils pour les études de bioéquivalence in vivo et de corrélation in vivo-in vitro de RG.

Détermination in vitro de la dissolution de composants multi-index en médecine tibétaine Granules de rhodiola

Ce protocole propose une méthode comparative pour évaluer les traits stomatiques et épidermiques de deux espèces distinctes à l’aide de peelings épidermiques, de techniques de dégagement et d’analyse d’images assistée par IA. L’objectif est de permettre une quantification à haut débit et reproductible des structures cellulaires sous-jacentes à la fonction stomatique pour des applications agricoles et la recherche végétale à grande échelle.

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Découvrez une méthode rapide d'identification de Rhodiola crenulata par observation morphologique, évaluation olfactive et chromatographie sur couche mince. Cette approche économique facilite la recherche en pharmacognosie et la conservation des plantes médicinales.

Collecte sur le terrain et identification systématique en laboratoire de Rhodiola crenulata

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