Surveillance actine démontage Time-lapse microscopie

D’accord, ce que j’aimerais faire aujourd’hui, c’est vous montrer comment construire une chambre d’écoulement, une chambre de fusion pour l’imagerie sur un microscope vertical. Ce que je fais ensuite, c’est que je crée deux espaces à l’aide d’un film. Donc, ce que je fais, c’est que je prends le film para, je le coupe en petites bandes.

Ensuite, je vais former, cela formera essentiellement les canaux pour les, les murs, et je les sèche avec un air incliné. J’ai mis la lamelle sur le dessus du para, et voici le terminé. Ensuite, je le chauffe sur un bloc de chaleur pour faire fondre le paramètre et créer essentiellement un joint.

Donc, ce qu’il s’agit, c’est le verre de couverture ici, puis au-dessus du verre de couverture se trouvent deux couches de phim, comme vous le voyez ici. Et puis en plus de cela, encore une fois, il y a un, c’est un bordereau de couverture de 22 par deux de deux millimètres. Celui-ci juste ici, que j’ai pressé contre le param pour faire tomber le sceau.

D’accord, donc le liquide va dans une direction ici et je peux l’aspirer avec un papier filtre ici dans cette direction. Et je vais vous montrer comment faire dans un instant. Donc, ce que j’aime faire, c’est que j’aime le mettre dans une chambre humidifiée, ce qui est très simple.

Prenez deux types de bandes surélevées et placez un filtre de papier en dessous. Et pour que ce soit bruyant pendant que je, j’ai mis le couvercle, la glissade de couvercle sur la chambre d’écoulement. Maintenant, la façon dont vous introduisez une solution dans la chambre est que vous placez simplement la pointe de la pipette à l’entrée de la chambre et que vous venez de la fendre.

Maintenant, ce que je fais, c’est que j’incube la chambre avec le couvercle fermé pendant 10 minutes. Ce que je fais habituellement pour aspirer le liquide de l’autre côté, c’est de l’utiliser, de prendre un papier filtre et de le couper en fines lanières comme ceci. Et je prends une de ces fines bandes et j’applique simultanément la solution dans l’entrée tout en mettant le papier filtre à la sortie pour aspirer l’échange, la solution.

Ainsi, vous verrez le liquide s’écouler à travers la solution. Et puis j’attends cinq minutes pour la mi-clôture. Maintenant, ce que je suis prêt à faire, c’est de mettre l’actine et l’actine, je dois en fait polymériser, je polymérise à l’intérieur de la chambre d’écoulement et c’est exactement les mêmes procédures avant.

Donc, parce que comme ça, et maintenant que l’action est polymérisée, je lave tout l’excès d’action non polymérisée en utilisant un grand volume de tampon juste. Donc, ici, j’ai environ une centaine de microlitres et c’est quelques volumes de chambre de réaction de tampon. Juste, vous savez, quand le papier filtre devient saturé, je dois changer de direction. D’accord?

Et donc je suis prêt à faire de l’imagerie avec ça. Donc, chambre de perfusion avec de l’actine attachée à celle-ci. Maintenant, je prends la lame, je la monte sous le microscope, et comme j’imagerie avec un objectif à huile, je vais mettre de l’huile d’immersion sur la surface supérieure du couvercle, toucher l’herbe, de sorte que la solution ou la protéine ou tout ce qui agit à l’intérieur.

Donc, ce que je fais, c’est que je peux réellement échanger le côté de la solution pendant que je fais l’imagerie en accéléré. Ainsi.