Visualisation des protéines de faible abondance et des modifications post-traductionnelles dans des embryons de drosophile vivants par injection d’anticorps fluorescents

Ce protocole décrit le marquage et l’injection par fluorescence personnalisés à base d’anticorps dans les embryons précoces de drosophile pour permettre l’imagerie en direct de protéines de faible abondance ou de modifications post-traductionnelles difficiles à détecter à l’aide des approches traditionnelles GFP/mCherry-tag.

Nous cherchons à comprendre comment les signaux mécaniques et biochimiques sont corrélés à la morphogenèse animale, y compris la détection et la réponse aux forces par les cellules et les molécules. D’autres molécules se sont révélées mécanosensibles, fonctionnant différemment sous différents niveaux de tension. Cependant, le contexte physiologique et la fonction de ces événements sensibles à la force restent largement inconnus.

En raison de la nature dynamique des événements sensibles à la force, notre domaine repose en grande partie sur l’imagerie par fluorescence à grande vitesse et l’enregistrement en accéléré pour capturer les comportements moléculaires et cellulaires. De nombreuses protéines marquées par fluorescence ne sont pas assez brillantes pour être imagées, et cela nécessite une résolution spatio-temporelle sans blanchiment significatif. D’autre part, les méthodes traditionnelles d’immunofluorescence ne peuvent capturer qu’un instantané de l’appareil moléculaire et cellulaire après fixation.

Cette méthode ouvre la voie au suivi dynamique de la localisation de nombreux récepteurs protéiques de faible abondance des principales voies de signalisation, telles que Notch, Wnt et les voies BMP. Finalement, en plus des cascades de signalisation linéaires traditionnelles, nous pouvons localiser et où les événements de signalisation se produisent à l’échelle subcellulaire.