Name: Modèle murin de l’association de la partition hépatique et de la ligature de la veine porte pour une procédure d’hépatectomie échelonnée assistée par microscopie (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-01-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 45 s
Description: Découvrez la technique ALPPS pour l'hépatectomie échelonnée chez la souris, modèle murin PMX. Cette méthode explore les mécanismes de régénération hépatique post-opératoire et les voies moléculaires impliquées.

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<meta charset="utf8"></head><body>Étude de la régénération hépatique de l’ALLPS dans des modèles animaux pour l’hépatectomie par étapes

<ol><li>Michalopoulos, G. K., Bhushan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration%3A+Biological+and+pathological+mechanisms+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration: Biological and pathological mechanisms and implications.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 18 (1), 40-55 (2021).</li>
<li>Chapelle, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimation+of+the+future+remnant+liver+function+is+a+better+tool+to+pr+edict+post-hepatectomy+liver+failure+than+platelet-based+liver+scores%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Estimation of the future remnant liver function is a better tool to pr edict post-hepatectomy liver failure than platelet-based liver scores.</a> Eur J Surg Oncol. 43 (12), 2277-2284 (2017).</li>
<li>Isfordink, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Portal+vein+ligation+versus+portal+vein+embolization+for+induction+of+hypertrophy+of+the+future+liver+remnant%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Portal vein ligation versus portal vein embolization for induction of hypertrophy of the future liver remnant: A systematic review and meta-analysis.</a> Surg Oncol. 26 (3), 257-267 (2017).</li>
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<li>Darnis, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subtotal+hepatectomy+in+swine+for+studying+small-for-size+syndrome+and+portal+inflow+modulation%3A+Is+it+reliable%5BTitle%5D)+AND+%22HPB+%28Oxford%29%22%5BJournal%5D)">Subtotal hepatectomy in swine for studying small-for-size syndrome and portal inflow modulation: Is it reliable.</a> HPB (Oxford). 17 (10), 881-888 (2015).</li>
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<li>Kikuchi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+associating+liver+partition+and+portal+vein+occlusion+for+st+aged+hepatectomy+on+tumor+growth+in+a+mouse+model+of+liver+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Impact of associating liver partition and portal vein occlusion for st aged hepatectomy on tumor growth in a mouse model of liver metastasis.</a> Eur J Surg Oncol. 44 (1), 130-138 (2018).</li>
<li>Schlegel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpps%3A+From+human+to+mice+highlighting+accelerated+and+novel+mechanism+s+of+liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Alpps: From human to mice highlighting accelerated and novel mechanism s of liver regeneration.</a> Ann Surg. 260 (5), 839-846 (2014).</li>
<li>Dili, A., Lebrun, V., Bertrand, C., Leclercq, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associating+liver+partition+and+portal+vein+ligation+for+staged+hepate+ctomy%3A+Establishment+of+an+animal+model+with+insufficient+liver+remnan+t%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Associating liver partition and portal vein ligation for staged hepate ctomy: Establishment of an animal model with insufficient liver remnan t.</a> Lab Invest. 99 (5), 698-707 (2019).</li>
<li>Schadde, E., Hertl, M., Breitenstein, S., Beck-Schimmer, B., Schläpfer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+model+of+the+associating+liver+partition+and+portal+vein+ligation+for+staged+hepatectomy+%28alpps%29+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Rat model of the associating liver partition and portal vein ligation for staged hepatectomy (alpps) procedure.</a> J Vis Exp. (126), e55895(2017).</li>
<li>Allaire, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+frontiers+in+liver+resection+for+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22JHEP+Rep%22%5BJournal%5D)">New frontiers in liver resection for hepatocellular carcinoma.</a> JHEP Rep. 2 (4), 100134(2020).</li>
<li>Memi, F., Ntokou, A., Papangeli, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crispr%2Fcas9+gene-editing%3A+Research+technologies%2C+clinical+applications+and+ethical+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Perinatol%22%5BJournal%5D)">Crispr/cas9 gene-editing: Research technologies, clinical applications and ethical considerations.</a> Semin Perinatol. 42 (8), 487-500 (2018).</li>
<li>Saviano, A., Henderson, N. C., Baumert, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+genomics+and+spatial+transcriptomics%3A+Discovery+of+novel+cell+states+and+cellular+interactions+in+liver+physiology+and+disease+biology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Single-cell genomics and spatial transcriptomics: Discovery of novel cell states and cellular interactions in liver physiology and disease biology.</a> J Hepatol. 73 (5), 1219-1230 (2020).</li>
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<table><tbody><tr><td>Injection de glucose à 5 % (500 mL)</td><td>Shapuaisi pharma (http://www.zjspas.com/)</td><td>H20003666</td><td>Efficace, bon marché, facile d’accès appareil d’anesthésie</td></tr><tr><td></td><td>RWD (www.rwdls.com)</td><td>R500</td><td>prix bas et qualité précieuse. Il convient aux opérations avec des débutants</td></tr><tr><td>C57 BL/6</td><td>The Jackson Lab</td><td>22349-2023</td><td>Stabilité des souches</td></tr><tr><td>isoflurane</td><td>KCSW (kcsw.szqisoubao.com)</td><td>H19980141</td><td></td></tr><tr><td>méloxicam</td> durable et économique <td>Boehringer-Ingelheim</td><td>H20020217</td> Des micropinces <td>durables et efficaces</td></tr><tr><td></td><td>peuvent traiter</td><td>60018920</td><td>Durable et efficace</td></tr><tr><td>microinstrument</td><td>CH usine d’instruments microchirurgicaux</td><td>HC-A804-1</td><td>durable et rentable</td></tr><tr><td>lactate de sodium ringer</td><td>Shapuaisi pharma (http://www.zjspas.com/)</td><td>H20193277</td><td>Efficace, bon marché et facile d’accès</td></tr><tr><td>ligne de suture</td><td>CH usine d’instruments microchirurgicaux</td><td>6-0 / 8-0</td><td>rapport performance-prix élevé</td></tr><tr><td>anticorps</td><td>topiques chenxin pharmacologie ( www.cisen-pharma.com)</td><td>H20020217</td><td>Éviter efficacement l’infection par incision</td></tr></tbody></table>

modèle murin de l’association de la partition hépatique et de la ligature de la veine porte pour une procédure d’hépatectomie échelonnée assistée par microscopie

A Mouse Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy Procedure Aided by Microscopy

Contrairement à l’intervention chirurgicale PVL (étapes 2, 3, 4 et 5 du protocole), les souris qui ont été soumises à l’intervention chirurgicale ALPPS (étapes 2, 3, 4, 5 et 6) ont démontré une propension accrue à la prolifération cellulaire. La figure 2 délimite la démarcation ischémique du lobe moyen du foie après la ligature de la veine porte, ainsi que le champ visuel pendant la transsection hépatique, ce qui représente une distinction clé entre l’ALPPS et la PVL. Notamment, les niveaux de médiateurs inflammatoires, y compris le facteur de nécrose tumorale α (TNF-α), les interleukines et le facteur de croissance hépatique (HGF), dans le tissu hépatique, dépassent ceux observés dans le groupe PVL. C’est ce que montre la figure 4C où le groupe ALPPS avait des taux d’IL-6 plus élevés que le groupe PVL, ce qui suggère que l’inflammation peut être impliquée dans la régénération rapide du foie. Pour étayer davantage ces résultats, une analyse comparative du rapport poids/poids hépatique et des niveaux d’expression de ki67, un marqueur largement reconnu de la prolifération cellulaire, dans le tissu hépatique, deux jours après l’opération, a été effectuée. Les figures 4A, B et 5 montrent que le foie du groupe ALPPS présente une capacité de prolifération accrue.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66098/66098fig01.jpg"> Figure 1 : Instruments chirurgicaux et consommables. (A) 1 : Antibiotiques topiques pour les incisions ; 2: 6-0, 8-0 Sutures chirurgicales ; 3 : Éponges de gélatine hémostatiques. (B) 1 : Des ciseaux et 2 : Des porte-aiguilles sont utilisés pour l’incision et la suture de la cavité abdominale. (C) Les procédures microscopiques nécessitent l’utilisation de 1 : ciseaux, 2 : pinces, 3, 4 : pinces à dissectionner, 5 : écarteurs abdominaux. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66098/66098fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66098/66098fig02.jpg"> Figure 2 : L’intervention chirurgicale hépatique. (A) Ligature et transection de la veine porte. La ligature séquentielle de 1, 2 et 3 est méticuleusement exécutée, en même temps que la division méticuleuse du parenchyme hépatique dans le lobe moyen. (B) La ligne de démarcation du lobe moyen est représentée visuellement par la présence d’une ligne pointillée blanche. (C) À la suite de l’examen microscopique, le foie est méticuleusement disséqué le long de la limite ischémique délimitée. Abréviations : RLL = lobe latéral droit ; LML = lobe moyen gauche ; LLL = lobe latéral gauche ; RML = lobe médian droit. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66098/66098fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66098/66098fig03.jpg"> Figure 3 : Ligature de la veine porte. (A) La ligature de la veine porte du lobe latéral droit ; la zone pointillée correspond à la RLL ligaturée. (B) La ligature de la veine porte du lobe moyen gauche et du lobe latéral gauche ; La zone de la ligne pointillée représente l’entrée pour la ligature des branches de la veine porte. (C) La zone pointillée correspond à la LML ligaturée et à la LLL. (D) La ligature de la veine porte du lobe caudé ; La région pointillée délimite le lobe moyen droit physiologiquement perfusé, tandis que les flèches délimitent la branche de la veine porte du lobe caudé, discrètement encastrée dans le parenchyme hépatique. Abréviations : RLL = lobe latéral droit ; LML = lobe moyen gauche ; LLL = lobe latéral gauche. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66098/66098fig03large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66098/66098fig04v2.jpg"> Figure 4 : Comparaison des futurs restes hépatiques, du rapport de croissance cinétique, du taux de survie et de l’ALT plasmatique au cours de la première semaine entre l’ALPPS et la PVL. (A) La FLR a été évaluée dans le groupe PVL et le groupe PVL+T après la chirurgie. (B) Le KGR a été évalué comme le gain de rapport LMR/poids corporel par jour. La KGR dans le groupe ALPPS a augmenté rapidement dans les 2 jours suivant la chirurgie, puis a progressivement diminué, mais était toujours plus élevée que celle du groupe PVL. (C) IL-6 plasmatique entre PVL et ALPPS. (D) Courbe de survie après PVL et ALPPS. (E) AST plasmatique entre PVL et ALPPS. Abréviations : RPF = futurs restes de foie ; PVL = ligature de la veine porte ; PVL + T = ligature de la veine porte + transection ; KGR = rapport de croissance cinétique ; LMR = gauche ; ALPPS = association de la partition hépatique et de la ligature de la veine porte pour l’hépatectomie étagée ; ALT = Alanine aminotransférase. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66098/66098fig04largev2.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66098/66098fig05.jpg"> Figure 5 : Marqueurs et morphologie de la régénération hépatique après ligature de la veine porte ou transsection combinée. (A) La morphologie hépatique a été évaluée dans le groupe de chirurgie simulée, le groupe PVL et le groupe PVL+T 2 jours après l’opération. La zone délimitée signifie les lobes hépatiques régénérés ; barre d’échelle = 1 cm. (B) La coloration par fluorescence a révélé des niveaux hétérogènes de prolifération cellulaire dans des cohortes chirurgicales distinctes du foie ; barre d’échelle = 100 μm, ***P &lt; 0,001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66098/66098fig05large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66098/66098fig06.jpg"> Figure 6 : Images HE de la veine porte à la veine centrale après ALPPS. (A) Le foie de la coloration HE d’ALPPS de 0 jour à 2 jours. (B) Coloration HE de 3 jours à 7 jours. Barre d’échelle = 100 μm. Abréviations : HE = hématoxyline et éosine ; ALPPS = association de la partition hépatique et de la ligature de la veine porte pour l’hépatectomie étagée. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66098/66098fig06large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>

Modèle murin de l’association de la partition hépatique et de la ligature de la veine porte pour une procédure d’hépatectomie échelonnée assistée par microscopie

Hepatectomy is widely regarded as the primary treatment for hepatic malignancies; yet, postoperative liver failure remains a major cause of perioperative ...

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Nous avons établi un modèle murin roman d'un système de poids suspendu pour le portail triade d'occlusion. Cette technique peut être utile pour des enquêtes futures de l'ischémie dans les modèles murins hépatiques.

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Cette vidéo décrit une procédure d’imagerie permettant d’observer et d’étudier la dynamique intravasculaire d’un tissu hépatique de souris à l’aide de la microscopie multiphotonique après stabilisation de l’organe. La microscopie multiphotonique permet d’imager les tissus biologiques à haute résolution spatiale in vivo.

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Visualisation des vasculaire et parenchymateuse Régénération après 70% hépatectomie partielle chez des souris normales

Induction rapide hypertrophie du foie par une hépatectomie Staged associant la Partition de foie et de la ligature de la veine porte (ALPPS) a été proposé pour la résection de tumeurs hépatiques résécables borderline. Ce modèle peut élucider les mécanismes impliqués dans l’hypertrophie rapide et permet de tester des médicaments qui favorisent ou bloquent l’accélération de la régénération.

Modèle de rat de la Partition du foie associant et la ligature de la veine porte pour la procédure de mise en scène une hépatectomie (ALPPS)

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La ligature partielle biliaires chez la souris : un modèle contrôlé de la cholestase Obstructive localisée

Le protocole actuel optimise les méthodes de perfusion/décellularisation in situ du foie et de microscopie à deux photons afin d’établir une plateforme fiable pour visualiser la dynamique du remodelage de la matrice extracellulaire (ECM) au cours de la stéatohépatite non alcoolique (NASH).

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Ici, nous présentons un protocole pour créer des xénogreffes orthotopiques de carcinome hépatocellulaire avec et sans ligature de l’artère hépatique et effectuer une imagerie non invasive par tomographie par émission de positrons (TEP) de l’hypoxie tumorale en utilisant [18 F]Fluoromisonidazole ([18 F]FMISO) et [18 F]Fluorodésoxyglucose ([18F]FDG).

Imagerie TEP/RM non invasive dans un modèle murin orthotopique de carcinome hépatocellulaire

Nous avons établi un modèle murin de fibrose hépatique chronique, qui fournit un modèle animal approprié pour l’étude mécaniste de la fibrose hépatique induite par le virus de l’atrésie biliaire (AB) et une plate-forme pour les futurs traitements de l’AB.

Un modèle murin de fibrose hépatique chronique pour l’étude de l’atrésie biliaire

Dans ce protocole, nous discutons de la mise en œuvre d’un modèle de transplantation hépatique orthotopique réussie (OLT) chez la souris. De plus, les adjuvants permettant d’analyser plus en détail la perméabilité de l’allogreffe après une OLT réussie chez une souris sont également discutés, en particulier à l’aide de la microtomodensitométrie (microCT).

Transplantation hépatique orthotopique réussie chez la souris à l’aide de l’angiographie par microtomodensitométrie

Le modèle murin d’hépatectomie partielle de 2/3 (66 %) est bien décrit dans la littérature, mais les hépatectomies plus étendues imitant le syndrome de petite taille après une transplantation hépatique ont rarement été utilisées. Nous décrivons une procédure d’hépatectomie prolongée à 78 % dans un modèle murin qui entraîne une létalité postopératoire d’environ 50 % chez des souris saines.

Hpatectomie prolongée à 78 % dans un modèle chirurgical de souris

Ce protocole présente un pipeline d’imagerie complet pour visualiser et modéliser la morphologie des cellules étoilées hépatiques dans le tissu hépatique intact. Cette approche combine le marquage fluorescent des fibroblastes utilisant la génétique de la souris, une préparation tissulaire in situ basée sur la perfusion hépatique, et une méthode modifiée de nettoyage tissulaire iDISCO pour obtenir une transparence optique.

Cartographie de la morphologie des cellules étoilées hépatiques dans des modèles murins de fibrose hépatique

Découvrez la technique ALPPS pour l'hépatectomie échelonnée chez la souris, modèle murin PMX. Cette méthode explore les mécanismes de régénération hépatique post-opératoire et les voies moléculaires impliquées.

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