Name: Reconstruction vasculaire avec la technique du brassard dans la transplantation hépatique orthotopique de souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-12-01T13:10:00.000+00:00
Duration: 5 min 25 s
Description: Découvrez la technique du brassard pour la reconstruction vasculaire dans la transplantation hépatique orthotopique chez la souris. Cette méthode permet d'étudier les lésions d'ischémie froide et de reperfusion.

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Ce travail a été soutenu par la recherche fondamentale 2022 JST (The Japanese Society for Transplantation).

Le protocole expérimental a été approuvé par le Comité d’expérimentation animale de l’Université de Kyoto. L’étude a utilisé des souris C57BL/6, âgées de plus de 10 semaines et pesant entre 25 g et 30 g, obtenues d’une source commerciale (voir le tableau des matériaux). Tous les animaux ont été anesthésiés avec de l’isoflurane à 2,5 % (selon les protocoles approuvés par l’établissement), maintenus dans des conditions spécifiques exemptes d’agents pathogènes, et toutes les procédures expérimentales ont été menées conformément à la réglementation sur l’expérimentation animale de l’Université de Kyoto. Les instruments appropriés utilisés pour l’étude sont énumérés dans la Table des matériaux et illustrés à la figure 1 et à la figure 2.
1. Sélection des animaux
<ol><li>Utilisez des souris d’un poids corporel de 25 à 30 g. REMARQUE : Bien que les allogreffes de foie de souris2 soient généralement acceptées à travers la barrière complexe d’histocompatibilité majeure, nous avons opté pour le modèle syngénique MOLT dans cette étude pour nous concentrer sur le mécanisme détaillé de la lésion de reperfusion de l’ischémie froide10. Les souris pesant moins de 25 g ne sont pas recommandées car il est impossible d’insérer une endoprothèse interne dans un canal biliaire mince. De même, les souris pesant plus de 30 g ne sont pas recommandées en raison de la présence d’une grande quantité de graisse intra-abdominale autour des vaisseaux.</li>
</ol>2. Fabrication de manchettes
<ol><li>Préparez des cathéters intraveineux de 20 G et 16 G pour le PV et l’IHIVC, respectivement.</li>
	<li>À l’aide d’un scalpel, coupez le cathéter pour créer le brassard. Le corps principal du brassard doit mesurer 2 mm de longueur, avec une poignée d’extension de 1 mm (Figure 3A). REMARQUE : Si la poignée est trop grande, il peut devenir difficile d’insérer le brassard.</li>
	<li>Sur la surface du brassard, créez une rainure peu profonde pour la fixation du fil à l’aide du dos de la lame du scalpel. REMARQUE : Lorsque vous appliquez l’arrière de la lame du scalpel sur le brassard, assurez-vous que la pointe de la lame est à un angle d’environ 60 degrés (comme illustré sur la figure 3B). Après avoir fait la première rainure, fixez la lame du scalpel et tournez le brassard. Idéalement, deux rainures sont recommandées, mais une seule rainure peut suffire sans problème.</li>
</ol>3. Fixation du brassard
<ol><li>Dans un récipient en plastique de forme rectangulaire, placez des petits glaçons et placez un petit gobelet en métal (6 cm de diamètre) sur le dessus. Remplissez la tasse de liquide de préservation d’organe (voir le tableau des matériaux) et placez le greffon syngénique à l’intérieur.</li>
	<li>Roulez doucement le greffon hépatique syngénique (extrait d’une autre souris donneuse) à l’aide d’un coton-tige, en veillant à ce que la porte hépatique soit tournée vers le haut. Retirez soigneusement tout sang stocké dans la lumière de la VCI avec un liquide de préservation d’organe.</li>
	<li>Enfilez le PV dans le brassard à l’aide d’un fil attaché, par exemple, à la veine splénique (voir Figure 4A).</li>
	<li>Avec la poignée du brassard à la position 12 heures, fixez la poignée et le brassard avec une pince bulldog (voir le tableau des matériaux), en le positionnant à 2 à 3 mm du bord PV.</li>
	<li>Fixez davantage la pince du bouledogue à l’aide d’une grande pince vasculaire et d’un moule de fixation pour établir le champ opératoire (voir Figure 4B).</li>
	<li>Inspectez soigneusement le lumen PV à un grossissement d’environ 15 à 20x. Si nécessaire, l’eau qui s’écoule peut améliorer la visibilité de la lumière.</li>
	<li>Saisissez doucement la lumière PV et extériorisez-la à travers le brassard.</li>
	<li>Une fois complètement extériorisé, fixez-le avec une double ligature à l’aide de 8-0 fil de soie le long de la rainure de la manchette (Figure 4C,D). REMARQUE : Assurez-vous que la ligature n’est pas lâche. Veillez également à ce que le point de ligature ne soit pas trop grand, car il pourrait interférer avec l’insertion du brassard. Le point de ligature peut être positionné dans n’importe quelle direction.</li>
	<li>Fixez le brassard à l’IHIVC en utilisant une procédure similaire à celle utilisée pour le PV (Figure 4E). REMARQUE : Lorsque vous clampez l’IHIVC avec le ballonnet, évitez de mordre dans le parenchyme hépatique. Comme le col est plus court que le PV, déterminez soigneusement la position de serrage.</li>
	<li>Créez un noeud coulant en passant le fil autour de la base de l’IHIVC pour ligaturer temporairement l’IHIVC (Figure 5). Ce fil sera retiré après la reperfusion.</li>
</ol>4. Reconstruction de la veine porte
<ol><li>Anesthésier la souris receveuse en induisant une anesthésie avec de l’isoflurane à 2,5 % et la réduire à 0,6 % avant d’extraire le foie natif comme décrit dans la littérature publiée2. Désinfecter la zone chirurgicale au moins trois fois en alternant des cycles d’iodophore et d’éthanol à 70 % avant la laparotomie.</li>
	<li>Assurez-vous que le lobe hépatique est correctement positionné et que le ballonnet est exempt de pliage et de torsion.</li>
	<li>Saisissez doucement le bord PV du récipient à l’aide d’une pince à grains et fixez-le avec un étau. REMARQUE : Dans cet article, un étau fait référence à un appareil mécanique utilisé pour fixer les pinces de Péan sur la table. Pour plus d’informations sur l’étau, voir Tableau des matériaux.</li>
	<li>Appliquez une pince vasculaire sur le PV du receveur et passez un 8-0 Du fil de soie autour de lui.</li>
	<li>Créez une section 1/4 de circonférence à environ 0,5 mm du bord PV (Figure 6A). Agrandissez le trou tout en faisant passer une solution saline à travers la lumière à l’aide d’un instrument spécialisé (une aiguille de 27 G dont la pointe est coupée et pliée en forme de L).</li>
	<li>Utilisez une pince droite pour saisir la poignée du brassard et insérez-la dans la lumière.</li>
	<li>Une fois complètement inséré, fixez le brassard avec un 8-0 fil de soie. Une seule ligature suffit pour la fixation.</li>
	<li>Retirez la pince vasculaire et reperfuser le foie.</li>
	<li>Relâchez délicatement la pince de Péan et terminez la reconstruction de la veine porte. L’ensemble du processus de reconstruction photovoltaïque devrait prendre environ 5 min.</li>
</ol>5. Reconstruction de la veine cave inférieure infrahépatique
<ol><li>Positionnez le lobe du foie de manière appropriée et déplacez la pince de Péan attachée à l’IHIVC dorsal du receveur vers le lobe inférieur droit du greffon, en la fixant avec un étau.</li>
	<li>Éliminez tout tissu hépatique restant autour de l’IVIHC du receveur en frottant doucement avec un coton-tige.</li>
	<li>Passer un 8-0 fil de soie autour de l’IVIHC du receveur.</li>
	<li>Créez une section circonférentielle de 1/4 à environ 0,5 mm du bord IVIHC du receveur (figure 6B).</li>
	<li>Après avoir introduit une solution saline normale dans la lumière, insérez le brassard dans la lumière. REMARQUE : En raison du col court, le brassard est souvent inséré plus peu profondément que dans le PV.</li>
	<li>Fixez soigneusement le brassard avec un 8-0 fil de soie, puis retirez la pince vasculaire et la pince de Péan.</li>
</ol>6. Soins postopératoires
<ol><li>Utilisez un coussin chauffant et une lampe chauffante pour faciliter la récupération postopératoire.</li>
	<li>Surveillez en permanence la pression artérielle, la fréquence cardiaque, la fréquence respiratoire, la température corporelle, ainsi que la consommation de nourriture et d’eau.</li>
	<li>Adminsiter injection sous-cutanée de carprofène (5 mg/kg, toutes les 6 h ou jusqu’à ce que nécessaire) pour soulager la douleur postopératoire. Suivre les directives institutionnelles locales. REMARQUE : Si l’état des souris se détériore, l’expérience sera immédiatement arrêtée et les souris seront euthanasiées par inhalation de dioxyde de carbone.</li>
	<li>Pour prélever l’échantillon de tissu, anesthésez à nouveau les souris et euthanasiez-les selon une méthode approuvée par l’IACUC.</li>
</ol>

Stratégies pour une anastomose vasculaire efficace dans la transplantation hépatique de souris

<ol><li>Qian, S. G., Fung, J. J., Demetris, A. V., Ildstad, S. T., Starzl, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+liver+transplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Orthotopic liver transplantation in the mouse.</a> Transplantation. 52 (3), 562-564 (1991).</li>
<li>Yokota, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+mouse+liver+transplantation+to+study+liver+biology+and+allograft+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Orthotopic mouse liver transplantation to study liver biology and allograft tolerance.</a> Nat Protoc. 11 (7), 1163-1174 (2016).</li>
<li>Shen, X. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+responses+in+a+new+mouse+model+of+prolonged+hepatic+cold+ischemia+followed+by+arterialized+orthotopic+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transpl%22%5BJournal%5D)">Inflammatory responses in a new mouse model of prolonged hepatic cold ischemia followed by arterialized orthotopic liver transplantation.</a> Liver Transpl. 11 (10), 1273-1281 (2005).</li>
<li>Kageyama, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemia-reperfusion+injury+in+allogeneic+liver+transplantation%3A+A+role+of+CD4+T+cells+in+early+allograft+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Ischemia-reperfusion injury in allogeneic liver transplantation: A role of CD4 T cells in early allograft injury.</a> Transplantation. 105 (9), 1989-1997 (2021).</li>
<li>Li, T., Hu, Z., Wang, L., Lv, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Details+determining+the+success+in+establishing+a+mouse+orthotopic+liver+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Details determining the success in establishing a mouse orthotopic liver transplantation model.</a> World J Gastroenterol. 26 (27), 3889-3898 (2020).</li>
<li>Tian, Y., Rüdiger, H. A., Jochum, W., Clavien, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+arterialized+and+nonarterialized+orthotopic+liver+transplantation+in+mice%3A+Prowess+or+relevant+model%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Comparison of arterialized and nonarterialized orthotopic liver transplantation in mice: Prowess or relevant model.</a> Transplantation. 74 (9), 1242-1246 (2002).</li>
<li>Steger, U., Sawitzki, B., Gassel, A. M., Gassel, H. J., Wood, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+hepatic+rearterialization+on+reperfusion+injury+and+outcome+after+mouse+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Impact of hepatic rearterialization on reperfusion injury and outcome after mouse liver transplantation.</a> Transplantation. 76 (2), 327-332 (2003).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+various+techniques+of+mouse+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">A review of various techniques of mouse liver transplantation.</a> Transplant Proc. 45 (6), 2517-2521 (2013).</li>
<li>Kojima, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+carcinoembryonic+antigen-related+cell+adhesion+molecule+1-T+cell+immunoglobulin+domain+and+mucin+domain-containing+protein+3+cross+talk+alleviates+liver+transplant+injury+in+mice+and+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">T cell carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1-T cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing protein 3 cross talk alleviates liver transplant injury in mice and humans.</a> Gastroenterology. 165 (5), 1233-1248 (2023).</li>
<li>Yokota, S., Yoshida, O., Ono, Y., Geller, D. A., Thomson, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+transplantation+in+the+mouse%3A+Insights+into+liver+immunobiology%2C+tissue+injury%2C+and+allograft+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transpl%22%5BJournal%5D)">Liver transplantation in the mouse: Insights into liver immunobiology, tissue injury, and allograft tolerance.</a> Liver Transpl. 22 (4), 536-546 (2016).</li>
</ol>

Aucun auteur n’a de conflit d’intérêts à divulguer.

L’apprentissage de la reconstruction vasculaire est l’aspect le plus difficile de la réussite de la MOLT. La qualité du brassard influence considérablement la difficulté de la reconstruction, compte tenu de la petite taille de la souris5. Cet article fournit un protocole détaillé pour la préparation, la fixation et la reconstruction du brassard.
Bien qu’il n’y ait pas de différences majeures par rapport aux rapports précédents concernant la prépa...

La transplantation hépatique orthotopique de souris (MOLT) est une méthode expérimentale efficace signalée pour la première fois en 19911. Ce modèle expérimental, qui utilise des souris génétiquement modifiées et divers réactifs de recherche, a joué un rôle central dans l’étude de l’ischémie chaude et froide et des lésions de reperfusion. Cependant, la grande complexité technique du modèle a entravé le développement d’une médecine de base pour la transplantation hépatique2. La MOLT comporte trois étapes principales : (1) le prélèvement du foie de la souris donneuse, (2) la chirurgie de la table arrière et (3) l’implantation du foie chez le receveur. Parmi ces procédures de receveur, l’anastomose vasculaire pose le plus grand défi. Alors que l’anastomose de la veine cave inférieure suprahépatique est généralement complétée par une couture à la main2, la veine cave inférieure infrahépatique (IHIVC) et la veine porte (PV) peuvent être reconstruites plus efficacement à l’aide de brassards en plastique au lieu de sutures cousues à la main.
La période anhépatique signifie l’intervalle entre l’ablation du foie natif du receveur et l’implantation du greffon. Pour garantir des résultats cohérents, il est impératif de limiter le temps anhépatique à moins de 20 min. Par conséquent, les études utilisant ce modèle ont été limitées à des institutions spécifiques 3,4,5,6,7,8,9. Parmi les différentes étapes de la MOLT, la réalisation d’une reconstruction PV et IHIVC en douceur est cruciale pour minimiser le temps anhépatique et assurer la réussite de la transplantation.
La reconstruction PV et IVC est généralement réalisée à l’aide de brassards vasculaires puisque la technique du brassard simplifie l’anastomose vasculaire par rapport aux sutures cousues à la main 2,5,8. La technique impliquée dans la préparation du brassard vasculaire et la fixation sécurisée du brassard a un impact significatif sur la complexité de la reconstruction vasculaire du receveur. Notre objectif est de fournir un guidage visuel détaillé pour de nombreux conseils techniques liés à la méthode du brassard, réduisant ainsi la courbe d’apprentissage. Ces clips vidéo permettront de bien comprendre comment fixer le brassard aux vaisseaux et reconstruire le PV et l’IHIVC pendant la chirurgie du receveur.

<table><tbody><tr><td>Cathéter intraveineux 16 G</td><td>TERUMO</td><td>SR-FF2032</td><td>Brassard IHIVC</td></tr><tr><td>20 G Cathéter intraveineux</td><td>TERUMO</td><td>SR-FF1651</td><td>Brassard PV</td></tr><tr><td>8-0 tresse soie</td><td>Natsume Seisakusho</td><td>CR9-80B2</td><td>8-0 soie</td></tr><tr><td>Belzer UW Solution de stockage frigorifique&nbsp ;</td><td>Astellas</td><td>Liquide de préservation d’organe</td><td></td></tr><tr><td>Bulldog clamp</td><td>B BRAUN</td><td>FB329R</td><td>Bulldog</td></tr><tr><td>clamp C57BL/6 souris&nbsp ; &nbsp ;</td><td>Oriental Bio Service</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solution d’inhalation d’isoflurane</td><td>Viatris</td><td></td><td>Anesthesic</td></tr><tr><td>Micro Blunted Tips 0,1 mm x 0,06 mm&nbsp ;</td><td>F.S.T</td><td>11253-20</td><td>Micropince droite</td></tr><tr><td>Micro Serrefine Applicateur à pince avec serrure</td><td>F.S.T</td><td>18056-14</td><td>Applicateur à pince pour cuve</td></tr><tr><td>Micro Serrefines&nbsp ;</td><td>F.S.T</td><td>18055-4</td><td>Pince pour récipient</td></tr><tr><td>N°11 Lames de rechange</td><td>Rasoir de sécurité FEATHER 11</td><td></td><td>lames</td></tr><tr><td>Ciseaux ophtalmiques, manche rond</td><td>B BRAUN</td><td>FD103R</td><td>Microciseaux</td></tr><tr><td>Récipient en plastique de forme rectangulaire&nbsp ; &nbsp ;</td><td>Daiso</td><td></td><td>10 cm de long, 15 cm de large et 6 cm de haut</td></tr><tr><td>Embouts SuperGrip</td><td>F.S.T</td><td>00649-11&nbsp ;</td><td>Micropinces incurvées</td></tr><tr><td>SZX7</td><td>Olympus</td><td>SZX7</td><td></td></tr><tr><td>Microscope Étau</td><td>Niigataseiki</td><td>00505351</td><td>Un outil mécanique pour fixer la pince de Péan sur la table</td></tr></tbody></table>

reconstruction vasculaire avec la technique du brassard dans la transplantation hépatique orthotopique de souris

Vascular Reconstruction with the Cuff Technique in Mouse Orthotopic Liver Transplantation

La transplantation hépatique orthotopique de souris est une méthodologie efficace pour étudier les mécanismes sous-jacents de l’ischémie hépatique et des lésions de reperfusion. Cependant, les défis techniques constituent un obstacle à l’utilisation de ce précieux modèle expérimental et à la transmission de ces compétences à la prochaine génération. L’aspect le plus difficile de cette procédure est la reconstruction vasculaire, y compris la veine porte (PV), la veine cave inférieure infrahépatique (IHIVC) et la veine cave inférieure suprahépatique. L’utilisation de brassards en plastique, plutôt que de sutures, permet une reconstruction PV et IHIVC plus fluide. Les vaisseaux sont reconstruits en fixant un brassard fabriqué à partir d’un cathéter intraveineux à l’extrémité du vaisseau greffé et en interposant le brassard dans le vaisseau receveur. Les deux aspects les plus cruciaux sont de visualiser correctement la lumière interne du vaisseau et d’éviter l’utilisation d’une force excessive. Notre objectif est de fournir un aperçu technique des reconstructions vasculaires à l’aide de la technique du brassard en chirurgie du receveur. Ces conseils techniques pour la technique du brassard devraient aider les microchirurgiens à faciliter la reconstruction vasculaire et à faire avancer leurs recherches.

La reconstruction PV est réussie lorsque, lors du déclampage de la veine porte, il n’y a pas de tortuosité et que le foie est uniformément perfusé. Le temps anhépatique doit être inférieur à 20 min, car le temps anhépatique supérieur à 25 min augmente le risque de mortalité chez la souris. La reconstruction de l’IHIVC est considérée comme réussie s’il n’y a pas de régurgitation sanguine du greffon.
Le stockage du greffon à des températures froides pendant 1 h à l’aide d’une solution de préserv...

Ce protocole fournit des informations techniques pour la reconstruction vasculaire à l’aide de la technique du brassard dans la transplantation hépatique orthotopique de souris.

Reconstruction vasculaire avec la technique du brassard dans la transplantation hépatique orthotopique de souris

Mouse orthotopic liver transplantation is an effective methodology for investigating the underlying mechanisms of liver ischemia and reperfusion injury. ...

Nous concentrons nos recherches sur la transplantation hépatique, en particulier sur l’ischémie froide et les lésions de reperfusion chaude. Nous utilisons le modèle de transplantation hépatique de souris comme outil de recherche à cette fin. Parce que la technique est difficile, il peut donc falloir beaucoup de temps pour apprendre et obtenir des résultats cohérents.À l’avenir, nous aimerions mener des recherches sur la transplantation de stéatose hépatique. C’est encore un problème à surmonter lors de la transplantation hépatique clinique.

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Une transplantation hépatique orthotopique chez le rat

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Murin col de l&#39;utérus Cœur, la transplantation en utilisant une technique de modification de manchette

La technique du brassard raccourcit et facilite le modèle de transplantation cardiaque cervicale hétérotopique chez la souris en évitant les anastomoses de suture techniquement difficiles des petits vaisseaux. Les détails techniques présentés dans cet article vidéo devraient permettre aux chercheurs d’établir ce modèle dans leurs laboratoires.

Heterotopic col de l&#39;utérus chez la souris Transplantation cardiaque

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Re-artérialisé Transplantation de foie partielle de Rat in vivo axée sur le navire 70 % hépatectomie

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Un modèle de Rat de la Orthotopic Transplantation hépatique en utilisant une Technique nouvelle anastomose magnétique pour la Reconstruction de veine sus-hépatique

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Complications réduites après reconnexion artérielle dans un modèle de rat de transplantation orthotopique de foie

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Reconstruction vasculaire avec la technique du brassard dans la transplantation hépatique orthotopique de souris

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