Modèles de plaies chez la souris et préparation de suspensions unicellulaires

Nos recherches ont principalement porté sur l’impact des cordons ombilicaux des véhicules extracellulaires dérivés de CSM sur la cicatrisation des plaies au niveau de la cellule unique. Et l’objectif principal de cette partie de l’étude est d’établir un modèle de masse de blessure stable, aiguë et de pleine épaisseur, qui est une base cruciale pour nos expériences. Le processus de cicatrisation des plaies est extrêmement complexe, impliquant l’interaction synchronisée de différentes cellules dans le temps et l’espace.

La cellule unique et le séquençage sont devenus la dernière méthode d’étude de l’ingéniosité cellulaire et de prédiction de la différenciation cellulaire et des trajectoires de développement au cours de la cicatrisation osseuse. Et l’obtention d’une suspension unicellulaire de haute qualité à partir de tissus déformés est la clé de cette recherche. Notre protocole crée un modèle de souris plus stable et plus épaisse, évitant les problèmes de cycle pilaire et de tension latérale, et empêche le grattage de la souris et l’activité naturelle d’affecter les résultats.

De plus, nous utilisons les enzymes mélangées pour une dissociation efficace des tissus, ce qui permet d’obtenir des suspensions unicellulaires de haute qualité. Pour commencer, attribuez au hasard des souris à des groupes de contrôle et d’expérimentation et hébergez-les dans une animalerie spécifique exempte d’agents pathogènes. Fournir aux souris un accès illimité à la nourriture standard et à l’eau du robinet de l’autoclave.

Fixez doucement la souris en position couchée et nettoyez l’abdomen avec des cotons-tiges imbibés d’alcool. Après avoir anesthésié la souris, appliquez une crème dépilatoire sur le dos et attendez deux minutes. Essuyez délicatement la crème avec de la gaze humide pour éviter d’endommager la peau.

Essuyez ensuite la peau avec de la gaze stérile séchée. Disposez le poinçon de biopsie cutanée de l’autoclave, les ciseaux, les pinces et le chiffon chirurgical frais sur une plate-forme stérile. Placez la souris anesthésiée en position couchée et désinfectez la peau dorsale avec trois écouvillons alternés de bétadine et d’alcool à 70 %.

Trempez le tampon dans de l’encre et faites une marque sur la partie centrale supérieure du dos de la souris. À l’aide de ciseaux chirurgicaux, excisez soigneusement toute la couche cutanée du dos le long de la marque circulaire, exposant complètement la couche musculaire. Laissez la plaie ouverte sans pansement, ce qui lui permet de former naturellement une croûte.

Administrer 0,1 millilitre de chlorhydrate de buprénorphine à 10 % par voie sous-cutanée près de la plaie. Replacez la souris dans sa cage individuelle en position couchée. Après l’anesthésie, observez et photographiez la plaie de la souris tous les deux jours pour mesurer la taille de la plaie.

Par voie sous-cutanée, injectez 100 microgrammes d’exosome dérivé de cellules souches mésenchymateuses du cordon ombilical humain autour du site d’incision d’une souris anesthésiée du groupe de traitement. Injectez 200 microlitres de PBS autour du site d’incision de la souris du groupe témoin. Le fait de placer des plaies des deux côtés d’une souris a entraîné des différences notables dans la zone de la plaie en raison de l’élasticité de la peau de la souris.

Le groupe de traitement par exosomes dérivés de cellules souches mésenchymateuses du cordon ombilical humain a montré une guérison plus rapide par rapport au groupe témoin. La guérison complète s’est produite plus rapidement dans le modèle de tampon que dans le groupe d’anneaux métalliques suturés.