Name: Microscopie intravitale à deux photons du poumon de souris transplanté (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 16 s
Description: Découvrez la microscopie intravitale à deux photons pour étudier les mécanismes immunitaires dans le poumon de souris transplanté. Cette technique révèle les interactions cellulaires en temps réel et améliore la compréhension de l'immunologie des greffons pulmonaires.

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<meta charset="utf8"></head><body>Surveillance en temps réel de la dynamique cellulaire dans la transplantation pulmonaire de souris

<table><tbody><tr><td>0,75 % povidone iode</td><td>Aplicare</td><td>NDC 52380-0126-2</td><td>Pour désinfectant</td></tr><tr><td>Cathéter IV 1 pouce 20G</td><td>Terumo</td><td>SROX2025CA</td><td>Pour tube endotrachéal (ETT)</td></tr><tr><td>Ruban de soie 1 pouce</td><td>Durapore</td><td>3M ID 7100057168</td><td>Pour fixer la souris en position</td></tr><tr><td>Lentille longue objectif longue immersion dans l’eau 20x</td><td>Olympus</td><td>N20X-PFH</td><td></td></tr><tr><td>3M Colle</td> <td>VetbondMedi-Vet.com</td><td>10872</td><td>Pour coller le verre de protection sur le poumon</td></tr><tr><td>655 nm points quantiques non ciblés</td><td>ThermoFisher</td><td>Q21021MP</td><td>Pour l’étiquetage des vaisseaux sanguins</td></tr><tr><td>70 % d’éthanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>EX0281</td><td>Pour désinfectant</td></tr><tr><td>Argent High Temp Fine Tip Cautery Pen</td><td>McKesson</td><td>231</td><td></td></tr><tr><td>Black Oy-joint (2 cm)</td><td>Quincaillerie</td><td>N/A</td><td>Pour l’imagerie sur mesure chambre</td></tr><tr><td>Boulon (2)</td><td>Quincaillerie</td><td>N/A</td><td>Pour chambre d’imagerie sur mesure</td></tr><tr><td>Écrou à oreilles en laiton (2)</td><td>Quincaillerie</td><td>N/A</td><td>Pour chambre d’imagerie sur mesure</td></tr><tr><td>Buprénorphine 1,3 mg/mL</td><td>Fidelis Santé animale</td><td>NDC 86084-100-30</td><td>Pour le contrôle de la douleur</td></tr><tr><td>Caméléon titane-saphir Laser pulsé femtoseconde Cohérent</td><td></td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Verre de protection (24 mm x 50 mm)</td><td>Thomas Scientific</td><td>1202F63</td><td>Pour chambre d’imagerie sur mesure</td></tr><tr><td>Pince anti-moustique incurvée (1)</td><td>Fine Science Tools</td><td>13009-12</td><td></td></tr><tr><td>Contrôleur de chauffage à deux canaux</td><td>Warner Instruments</td><td>TC-344B</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux fins (1)</td><td>Fine Science Tools</td><td>15040-11</td><td></td></tr><tr><td>Microscope vertical à platine fixe</td><td>Olympus</td><td>BX51WI</td><td></td></tr><tr><td>Gaze (coupée à 1 cm x 3 cm)</td><td>McKesson</td><td>476709</td><td>À placer sous le poumon gauche</td></tr><tr><td>Graisse sous vide poussé</td><td>Dow Corning</td><td>N/A</td><td>Pour coller le verre de protection sur la plaque supérieure</td></tr><tr><td>Isoflurane 1 %</td><td>Sigma Aldrich</td><td>26675-46-7</td><td>Pour l’anesthésie Chlorhydrate</td>de</tr><tr><td>kétamine 100 mg/mL</td><td>Vedco</td><td>NDC 50989-996-06</td><td>Pour l’anesthésie</td></tr><tr><td>Tôle (3 cm x 7 cm)</td><td>Quincaillerie</td><td>N/A</td><td>Pour une chambre d’imagerie sur mesure</td></tr><tr><td>Applicateurs pointus en coton</td><td>Solon</td><td>56225</td><td>Pour manipuler les poumons et pour la dissection contondante</td></tr><tr><td>Power Pro Ultra</td><td>clipper Oster</td><td>078400-020-001</td><td></td></tr><tr><td>Puralube Vet pommade pour les yeux</td><td>Medi-Vet.com</td><td>11897</td><td>Pour prévenir la dessiccation oculaire</td></tr><tr><td>Ventilateur pour petits animaux</td><td>Harvard Appareil</td><td>55-0000</td><td></td></tr><tr><td>Pince droite (1)</td><td>Fine Science Tools</td><td>91113-10</td><td></td></tr><tr><td>Pilote d’obturateur à trois canaux</td><td>Uniblitz</td><td>VMM-D3</td><td>Scanner résonnant</td></tr><tr><td>x.y.z Moteur pas à pas optique</td><td>Prior Scientific</td><td>OptiScan II</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine 20 mg/mL</td><td>Akorn</td><td>NDC 59399-110-20</td><td>Pour le contrôle de la douleur</td></tr></tbody></table>

microscopie intravitale à deux photons du poumon de souris transplanté

Intravital Two-Photon Microscopy of the Transplanted Mouse Lung

Après 1 h de stockage ischémique à froid à 4 °C, nous avons transplanté orthotopiquement le poumon gauche d’une souris B6 dans une souris B6. LysM-GFPsouris 4, puis une imagerie intravitale à deux photons a été réalisée, comme décrit ci-dessus. Nous avons effectué l’imagerie à deux moments après la greffe - 2 h (Figure 3A) et 24 h (Figure 3B). Les vaisseaux sanguins sont marqués en rouge par les points q injectés immédiatement avant l’imagerie. De plus, nous pouvons visualiser les monocytes qui ont pris des q-points à 24 h4. Des neutrophiles dérivés du receveur étiquetés en vert peuvent être vus en train de s’infiltrer dans le greffon pulmonaire dans la vidéo correspondante 24 h après la greffe (vidéo supplémentaire 1). Les alvéoles peuvent être visualisées comme des cratères sombres dus au SHG du collagène (flèches blanches sur la figure 3). On observe qu’à 24 h après la greffe, il y a plus de neutrophiles dans le poumon qu’à 2 h après la greffe (Figure 3).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66566/66566fig01.jpg"> Figure 1 : Préparation de la souris pour l’imagerie à deux photons. (A) Réouverture de la peau sur la thoracotomie gauche. (B) Peau et tissus mous excisés sur le thorax gauche. (C, D) Nervures serrées pendant 10 s avant de se diviser. (E) Gauche 3rd-5 e côtes réséquées pour créer une fenêtre mesurant ~0,8 cm cranio-caudalement x 1,0 cm antéropostérieurement. (F) Poumon gauche élevé hors de la poitrine gauche et placé sur une bande de gaze. (G) Une chambre d’imagerie avec une fenêtre d’imagerie recouvre le poumon gauche. (H) La chambre d’imagerie placée sur la platine du microscope. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/66566fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66566/66566fig02.jpg"> Figure 2 : Configuration de la chambre d’imagerie. (A) La chambre d’imagerie placée sur la platine du microscope. (B) Vue agrandie du mécanisme de boulon à ressort pour fixer la plaque supérieure sur le poumon gauche. (C) Avant et arrière de la plaque supérieure avec joint torique et verre de protection appliqués. Les lignes blanches représentent la zone où la graisse sous vide est appliquée pour faire adhérer le verre de protection à la plaque supérieure. Le cercle gris représente un anneau de colle à appliquer sur le verre de protection. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/66566fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66566/66566fig03.jpg"> Figure 3 : Imagerie intravitale à deux photons d’une greffe de poumon gauche de souris de B6 à B6. Souris LysM-GFP avec 1 h de stockage ischémique à froid. L’imagerie est réalisée (A) 2 h et (B) 24 h après la transplantation. Le rouge représente les q-dots. Le vert représente les neutrophiles de B6. Bénéficiaire du LysM-GFP. Le bleu représente le SHG d’alvéoles riches en collagène. Les flèches blanches indiquent les espaces aériens alvéolaires. La barre d’échelle représente 20 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/66566fig03large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
Figure supplémentaire 1 : Plaque supérieure avec deux résistances fixées pour fournir un chauffage supplémentaire. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/Supplemental%20Figure%201.zip" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.</a>
Vidéo supplémentaire 1 : Imagerie à deux photons en accéléré du poumon gauche d’une souris transplantée de B6 à B6. Souris LysM-GFP avec 1 h de stockage ischémique à froid, réalisée à 24 h après la transplantation. Le rouge représente les q-dots. Le vert représente les neutrophiles du receveur de LysM-GFP. Le bleu représente la deuxième génération harmonique des alvéoles riches en collagène. La barre d’échelle représente 20 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/Supplemental%20Video%201.zip" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.</a>

Microscopie intravitale à deux photons du poumon de souris transplanté

Complications after lung transplantation are largely related to the host immune system responding to the graft. Such immune responses are regulated by ...

intravital-two-photon-microscopy-of-the-transplanted-mouse-lung

Research

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JoVE Journal

Medicine

Médecine

Nous avons développé des outils de laboratoire roman et de protocoles pour l'acquisition d'imagerie intravitale du thymus. Notre technique devrait aider à l'identification de «niches» dans le thymus où le développement des cellules T se produit.

Imagerie intravitale du Thymus souris utilisant la 2-microscopie biphotonique

Ce protocole décrit l’utilisation de la microscopie multiphotonique pour effectuer une imagerie à long terme, à haute résolution, sur cellule unique, du poumon intact en temps réel à l’aide d’une fenêtre d’imagerie stabilisée sous vide.

À long terme à haute résolution Microscopie intravitale dans le poumon avec un vide Stabilisé Imaging Window

Ce protocole décrit l’imagerie intravitale des souris transgéniques exprimant des marqueurs fluorescents spécifiques des cellules. Intravitale imagerie fournit une méthode non invasive pour les observations à haute résolution dans les animaux vivants à l’aide de windows implantables permettant la visualisation microscopique des processus est possible. Cette méthode est particulièrement utile pour étudier les processus longitudinales.

La microscopie intravitale du système vasculaire associées à la tumeur en utilisant Advanced dorsale pli fenêtre Chambers sur des souris transgéniques fluorescents

Dans cette étude, nous présentons un protocole pour effectuer deux photons intravitale d’imagerie et de la cellule analyse des interactions dans la muqueuse trachéale murine après infection par le virus de la grippe. Ce protocole sera pertinent pour les chercheurs qui étudient la dynamique de cellules immunitaires lors d’infections respiratoires.

Imagerie cellulaire Interaction dans la muqueuse trachéale au cours de l’infection par le Virus grippal à l’aide de la microscopie intravitale biphotonique

Le protocole introduit ici permet la caractérisation de la capacité de radioralliement pulmonaire des lymphocytes humains primaires dans des conditions inflammatoires in vivo. Une infiltration pulmonaire des cellules immunitaires humaines moutschen transférés dans un modèle murin d’inflammation allergique peut être imagée et quantifiée par microscopie à fluorescence lumière-feuille de tissu pulmonaire chimiquement défrichées.

Avancée d’imagerie du poumon Homing des Lymphocytes humains dans un modèle In Vivo de l’Inflammation allergique, issue des feuilles lumière microscopie expérimentale

L’imagerie in vivo est un outil puissant pour l’étude de la biologie dans la santé et la maladie. Ce protocole décrit l’imagerie transpupillaire de la rétine de la souris avec un microscope standard à deux photons. Il démontre également différentes méthodes d’imagerie in vivo pour marquer par fluorescence plusieurs cohortes cellulaires de la rétine.

Transpupillaire Imagerie in vivo à deux photons de la rétine de souris

Nous présentons ici un protocole pour l’implantation chirurgicale d’une fenêtre optique à demeure permanente pour le thorax murin, qui permet une imagerie intravitale à haute résolution du poumon. La permanence de la fenêtre la rend bien adaptée à l’étude des processus cellulaires dynamiques dans le poumon, en particulier ceux qui évoluent lentement, tels que la progression métastatique des cellules tumorales disséminées.

Une fenêtre permanente pour enquêter sur les métastases cancéreuses au poumon

Nous décrivons la transplantation intraparenchymateuse de cellules progénitrices neurales humaines transduites avec un double vecteur rapporteur exprimant la protéine fluorescente vert luciférase (GFP) dans le cerveau de la souris. Après la transplantation, le signal de la luciférase est mesuré à plusieurs reprises à l’aide de la bioluminescence in vivo et de cellules greffées exprimant la GFP identifiées dans des sections du cerveau à l’aide de la microscopie à fluorescence.

Transplantation intracérébrale et suivi in vivo de la bioluminescence des cellules progénitrices neurales humaines dans le cerveau de la souris

Le manuscrit décrit une méthodologie pour l’établissement ainsi que le suivi longitudinal de la croissance des métastases pulmonaires spontanées à partir de tumeurs mammaires injectées orthotopiquement, susceptible d’intervention à tous les stades de la cascade métastatique.

In vivo Imagerie pour mesurer les métastases pulmonaires spontanées de cellules tumorales mammaires injectées orthotopiquement

La thérapie cellulaire offre une intervention prometteuse pour la fibrose pulmonaire en utilisant des cellules progénitrices pour réparer les tissus endommagés et améliorer la fonction pulmonaire. Comme l’imagerie joue un rôle central dans le suivi de l’intégration cellulaire, nous décrivons ici le suivi in vivo de la thérapie cellulaire pour la fibrose pulmonaire guidé par l’imagerie par particules magnétiques dans un modèle murin.

Suivi in vivo guidé par l’image de cellules progénitrices de l’épithélium pulmonaire distal transplantées pour la fibrose pulmonaire à l’aide de l’imagerie par particules magnétiques

Ici, nous présentons un protocole pour l’imagerie intravitale d’un Mycobacterium tuberculosis atténué approuvé par BSL-2. Souche dans le poumon murin utilisant une fenêtre pulmonaire permanente. Cette approche permet une analyse longitudinale à résolution unicellulaire des interactions précoces hôte-pathogène, y compris la localisation bacillaire, la dynamique vasculaire et l’absorption des macrophages dans le même microenvironnement pulmonaire.

Imagerie intravitale de Mycobacterium tuberculosis auxotrophe atténué dans le poumon murin lors d’une infection intravasculaire précoce

Découvrez la microscopie intravitale à deux photons pour étudier les mécanismes immunitaires dans le poumon de souris transplanté. Cette technique révèle les interactions cellulaires en temps réel et améliore la compréhension de l'immunologie des greffons pulmonaires.

Microscopie intravitale à deux photons du poumon de souris transplanté

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