Name: Modèle de pochite chez le rat après proctocolectomie et anastomose iléale-anale à l’aide de sulfate de dextran sodique (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-31T13:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 5 s
Description: Découvrez comment établir un modèle de pochite chez le rat par chirurgie IPAA et traitement au DSS. Cette méthode permet d'étudier la pathogenèse et les traitements de cette affection inflammatoire.

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<meta charset="utf8"></head><body>Modèle expérimental de pochite chez le rat pour l’étude de la pathogenèse et du traitement de la colite ulcéreuse

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</ol>

<table><tbody><tr><td>Éthanol anhydre</td><td>Tianjin Fengchuan Chemical Reagent Technology Co., Ltd</td><td>Chine</td><td>Coloration de l’hématoxine-éosine Sulfate</td></tr> de <tr><td>dextran Sodium&nbsp ;</td><td>&nbsp ; Yeasen&nbsp ;</td><td>60316ES76</td><td>Utilisé pour induire l’inflammation</td></tr> de la poche <tr><td>Solution de formaldéhyde</td><td>Tianjin Zhiyuan Reagent Company</td><td>Chine</td><td>Gaze de coloration à l’hématoxine-éosine</td></tr><tr><td>Jiangxi</td><td>Zhonggan Medical Equipment Company</td><td>Chine</td><td>Utilisé pour la microchirurgie animale</td></tr><tr><td>Hématoxyline</td><td>Pékin Zhongshan Jinqiao Company</td><td>Chine</td><td>Coloration à l’hématoxine-éosine</td></tr><tr><td>Interféron &gamma ; &nbsp ; Kit de réactifs de détection</td><td>Cloud-clone</td><td>SEA049Ra</td><td>Détection des facteurs inflammatoires</td></tr><tr><td>Kit de détection Interleukin-10</td><td>Cloud-clone</td><td>SEA056Ra</td><td>Détection des facteurs inflammatoires</td></tr> Kit <tr>de<td>détection Interleukin-17</td><td>Cloud-clone</td><td>SEA063Ra</td><td>Détection des facteurs inflammatoires</td></tr><tr><td>Kit de détection Interleukin-6</td><td>Cloud-clone</td><td>SEA079Ra</td><td>Détection des facteurs inflammatoires</td></tr><tr><td>Iodophor</td><td>Tangpai Medical Equipment Co., Ltd</td><td>Chine</td><td>Utilisé pour la microchirurgie</td></tr><tr><td>animale Instruments de manipulation microscopiques</td><td>Aesculap</td><td>Allemagne</td><td>Utilisé pour la microchirurgie animale</td></tr><tr><td>Occludin</td><td>abcam</td><td>ab216327</td><td>Test immunohistochimique</td></tr><tr><td>Aiguille à coudre</td><td>Yangzhou Fuda Medical Equipment Co., Ltd</td><td>Chine</td><td>Utilisé pour la microchirurgie animale</td></tr><tr><td>facteur de nécrose tumorale &alpha ; Kit de réactifs de détection</td><td>Cloud-clone</td><td>SEA133Ra</td><td>Détection des facteurs inflammatoires</td></tr><tr><td>Microscope chirurgical binoculaire pour deux personnes</td><td>OPTON</td><td>Allemagne</td><td>Utilisé pour la microchirurgie animale</td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Tianjin Yingda Rare and Precious Reagent Factory</td><td>Chine</td><td>Coloration à l’hématoxine-éosine</td></tr></tbody></table>

modèle de pochite chez le rat après proctocolectomie et anastomose iléale-anale à l’aide de sulfate de dextran sodique

A Rat Model of Pouchitis Following Proctocolectomy and Ileal Pouch-Anal Anastomosis Using Dextran Sulfate Sodium

Évaluation de l’état général de rats modèles de poche iléale après l’établissement Après que l’opérateur ait réussi la courbe d’apprentissage chirurgical IPAA, les rats ont bien toléré la chirurgie, avec une durée chirurgicale de 192,94 min ± 27,15 min, et moins de complications postopératoires sont survenues. Au début de la période postopératoire, les rats ont connu une diminution de l’apport alimentaire, mais leur appétit préopératoire a été rétabli dans les 10 à 14 jours suivant la chirurgie. L’activité postopératoire précoce a légèrement diminué et il n’y avait pas de sécrétions évidentes dans les yeux et le nez. La perte de poids avant et après la chirurgie était de 21,17 g ± 1,59 g. Le poids postopératoire initial a montré une tendance à la baisse, avec une réduction maximale de 69,58 g ± 33,19 g. La croissance stable a commencé le 8,25 jour ± 2,53 jours après la chirurgie, et le 31e jour après la chirurgie, le poids dépassait 9,35% ± 4,7% du poids le lendemain de la chirurgie. Les rats ont pu déféquer dans les 24 heures suivant l’opération, avec des selles molles mais pas de selles sanglantes. La formation de selles molles s’est produite entre le 9et le 12e jour après l’opération.
Augmentation compensatoire de la poche iléale Le 35e jour après l’opération, la cavité abdominale du rat a été ouverte sous anesthésie, révélant une forte adhérence entre la poche iléale et la cavité pelvienne. Après avoir soigneusement séparé l’adhérence entre la poche et les tissus environnants, une hypertrophie compensatoire de la poche iléale, un épaississement de la paroi intestinale et une légère dilatation de l’intestin grêle distal ont été observés (Figure 1). La longueur de la poche iléale était de 2,89 cm ± 0,28 cm au moment de l’opération, tandis que le 35e jour après l’opération, elle mesurait 3,86 cm ± 0,87 cm, montrant une différence statistique significative de P = 0,000). La surface muqueuse (cm2) de la poche iléale a également été significativement augmentée par rapport à la mesure chirurgicale (6,46 ± 0,85 vs 17,02 ± 4,61, P = 0,000). Il n’y avait pas de différence significative entre le groupe IPAA et le groupe de la pochite iléale (P &gt; 0,05).
Évaluation de l’état général et score fécal des rats atteints de pochite iléale Le 31e jour après l’opération, le DSS a été administré au groupe de la pochite iléale. Au début de l’administration, le groupe IPAA et le groupe de la pochite iléale avaient le même poids corporel (352,00 g ± 30,03 g contre 352,00 g ± 25,92 g, P = 1) et étaient généralement en bon état. Cependant, la quantité de nourriture et d’eau consommée dans le groupe de la pochite iléale a diminué, ce qui a entraîné une fatigue mentale, des cheveux ternes, une sécrétion dans les yeux et le nez, une diminution de la mobilité, et aucun changement significatif n’a été observé dans le groupe IPAA. Au 35ejour après l’opération, le poids du groupe de la poche iléale était significativement inférieur à celui du groupe IPAA (322,83 g ± 29,24 g vs 364,83 g ± 30,13 g, P = 0,028) (Figure 2).
Le groupe de la pochite iléale a présenté une diarrhée importante le premier jour après l’administration du DSS, et le deuxième jour après l’administration du DSS, ils avaient du mucus, du pus et des selles sanglantes (Figure 3). Le 35e jour après la chirurgie, les scores deselles 11 du groupe IPAA et du groupe de la pochite iléale étaient respectivement de (4,33 ± 0,82 vs 2,17 ± 0,75, P = 0,001. Les rats du groupe IPAA avaient un anus propre et non polluant, tandis que les rats atteints de pochite iléale avaient un gonflement de l’anus accompagné de mucus, de pus et de selles sanglantes.
Modifications histopathologiques de la poche iléale
Observation macroscopique de spécimens de poche iléale Dans le groupe IPAA, la paroi intestinale de la poche iléale s’est épaissie, et aucune érosion, ulcère ou point de saignement n’a été observé. Dans le groupe de la poche iléale, les vaisseaux sanguins du mésentère du sac de stockage deviennent plus épais et la muqueuse de la poche iléale est largement ou localement enflammée, avec une érosion visible, des ulcères et des points de saignement, dont certains sont accompagnés d’une dilatation distale importante de l’intestin grêle (Figure 4).
Observation microscopique du tissu de la poche iléale Dans le groupe de rats IPAA, l’extrémité de certaines villosités intestinales dans le tissu de la poche est devenue émoussée, accompagnée d’une petite quantité d’infiltration de neutrophiles, et parfois, une petite quantité d’exsudation a été observée à la surface de la muqueuse.
En revanche, la disposition des villosités intestinales dans le tissu de la poche iléale des rats du groupe de la poche iléale était extrêmement désordonnée. Certaines villosités intestinales étaient manquantes, et une érosion importante et de multiples ulcères inégaux étaient visibles sans impliquer la couche musculaire. Cela s’est accompagné d’un grand nombre d’infiltrations de neutrophiles et de lymphocytes, d’une exsudation excessive et d’une inflammation visible de la crypte. Le score pathologique du tissu de la poche iléale dans le groupe de la poche iléale était significativement plus élevé que celui du groupe IPAA, avec une différence statistique significative observée (8,50 ± 1,76 vs 1,33 ± 0,52, P = 0,000) (Figure 5).
Niveau d’expression de la protéine fonctionnelle de la barrière intestinale occludine L’occludine, une protéine fonctionnelle importante de la barrière intestinale, est exprimée sur la membrane cellulaire du tissu de la poche iléale dans les groupes IPAA et pochite iléale de rats11. Cependant, le niveau d’expression de la protéine occludine dans le groupe de la poche iléale était significativement inférieur à celui du groupe IPAA (0,25 ± 0,03 vs 0,15 ± 0,02, P = 0,000) (Figure 6).
Détection de facteurs inflammatoires dans la poche iléale Les niveaux d’expression de l’IL-6, de l’IL-17, du TNF-α et de l’INF-γ dans le tissu de la poche iléale des rats du groupe de la pochite iléale étaient significativement plus élevés que ceux du groupe IPAA (tels que déterminés par le test ELISA16). À l’inverse, l’IL-10 a montré des résultats opposés, avec des différences statistiques observées (P = 0,000) (tableau 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66623/66623fig01.jpg"> Figure 1 : L’état de la poche iléale. La flèche indique la poche iléale (A) au moment de l’intervention chirurgicale et (B) l’élargissement compensatoire de la poche iléale le 35e jour après l’intervention (lors du prélèvement de l’échantillon). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66623/66623fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66623/66623fig02.jpg"> Figure 2 : Tendance des changements de poids corporel chez les rats après une chirurgie IPAA. La barre d’erreur est liée à l’écart-type, n = 6 dans chaque groupe. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66623/66623fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66623/66623fig03.jpg"> Figure 3 : Photographie d’excréments de rats. (A) Groupe IPAA. (B) Groupe de la pochite iléale. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66623/66623fig03large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66623/66623fig04.jpg"> Figure 4 : Observation macroscopique de spécimens de poche iléale. (A) Groupe IPAA. (B) Groupe de la pochite iléale. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66623/66623fig04large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66623/66623fig05.jpg"> Figure 5 : Modifications pathologiques du tissu de la poche iléale du rat. (A) Groupe IPAA. (B) Groupe de la pochite iléale. Barres d’échelle : 60 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66623/66623fig05large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66623/66623fig06.jpg"> Figure 6 : Détection immunohistochimique de l’expression de la protéine occludine dans le tissu de la poche iléale du rat. (A) Groupe IPAA. (B) Groupe de la pochite iléale. Barres d’échelle : 60 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66623/66623fig06large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Groupe</td>
			<td>n</td>
			<td>L’IL-6</td>
			<td>L’IL-10</td>
			<td>L’IL-17</td>
			<td>TNF-α</td>
			<td>INF-γ</td>
		</tr><tr><td>Groupe IPAA</td>
			<td>6</td>
			<td>2,60 ± 0,36</td>
			<td>5,81 ± 0,66</td>
			<td>17.48 ± 4.81</td>
			<td>86.94 ± 24.06</td>
			<td>4,08 ± 0,56</td>
		</tr><tr><td>Groupe de la pochite</td>
			<td>6</td>
			<td>6,94 ± 1,18</td>
			<td>2,77 ± 0,60</td>
			<td>34,82 ± 2,41</td>
			<td>213,00 ± 26,11</td>
			<td>9,67 ± 1,70</td>
		</tr><tr><td>P</td>
			<td>0</td>
			<td>0.000</td>
			<td>0.000</td>
			<td>0.000</td>
			<td>0.000</td>
			<td>0.000</td>
		</tr></tbody></table>Tableau 1 : Niveau d’expression des facteurs inflammatoires dans le tissu de la poche iléale du rat (pg/mL).

Modèle de pochite chez le rat après proctocolectomie et anastomose iléale-anale à l’aide de sulfate de dextran sodique

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Le présent protocole décrit le développement d’un modèle de colite semblable à celui de Crohn chez les rongeurs. L’inflammation transmurale entraîne une sténose au site d’instillation du TNBS et un élargissement mécanique est observé dans le segment proximal de la sténose. Ces changements permettent d’étudier le stress mécanique dans la colite.

Un modèle de rongeur induit par le TNBS pour étudier le rôle pathogène du stress mécanique dans la maladie de Crohn

Ce protocole décrit un modèle de transplantation intestinale avec iléostomie basé sur le rat pour l’évaluation de l’évolution temporelle de l’intervention médicamenteuse sur le rejet de greffe.

Modèle de rejet de greffe de rat de transplantation intestinale avec iléostomie extériorisée pour l’évaluation du pronostic longitudinal

Création décollements de rétine expérimentales avec une hauteur reproductible et durable de détachement, et sans hémorragie sous-rétinienne, est important pour l'étude de la physiopathologie des photorécepteurs perte de cellules dans la maladie de la rétine et l'évaluation des interventions thérapeutiques potentielles. Ici, nous rapportons une telle méthode en détail.

Décollement de la rétine modèle chez les rongeurs par injection sous-rétinienne de hyaluronate de sodium

Découvrez comment établir un modèle de pochite chez le rat par chirurgie IPAA et traitement au DSS. Cette méthode permet d'étudier la pathogenèse et les traitements de cette affection inflammatoire.

Modèle de pochite chez le rat après proctocolectomie et anastomose iléale-anale à l’aide de sulfate de dextran sodique

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