Name: Croissance de sphéroïdes tridimensionnels desmoplastiques du cancer du pancréas à partir de la co-culture (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 42 s
Description: Apprenez à créer des sphéroïdes desmoplastiques 3D par co-culture pour étudier le cancer du pancréas. Cette méthode reproduit fidèlement l'environnement tumoral clinique et permet le criblage thérapeutique.

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<meta charset="utf8"></head><body>Modèle 3D-PDAC capturant la desmoplasie pour l’évaluation thérapeutique

<ol><li>Hingorani, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+and+stromal+co-evolution+and+complicity+in+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Epithelial and stromal co-evolution and complicity in pancreatic cancer.</a> Nat Rev Cancer. 23 (2), 57-77 (2023).</li>
<li>Laklai, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genotype+tunes+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+tissue+tension+to+induce+matricellular+fibrosis+and+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Genotype tunes pancreatic ductal adenocarcinoma tissue tension to induce matricellular fibrosis and tumor progression.</a> Nat Med. 22 (5), 497-505 (2016).</li>
<li>Binker, M. G., Binker-Cosen, M. J., Binker-Cosen, A. A., Cosen-Binker, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironmental+factors+and+extracellular+matrix+degradation+in+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pancreas%22%5BJournal%5D)">Microenvironmental factors and extracellular matrix degradation in pancreatic cancer.</a> J Pancreas. 15 (4), 280-285 (2014).</li>
<li>Spano, D., Zollo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+microenvironment%3A+a+main+actor+in+the+metastasis+process%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Tumor microenvironment: a main actor in the metastasis process.</a> Clin Exp Metastasis. 29 (4), 381-395 (2012).</li>
<li>Ware, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+an+in+vitro+3D+PDAC+stroma+rich+spheroid+model%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Generation of an in vitro 3D PDAC stroma rich spheroid model.</a> Biomaterials. 108, 129-142 (2016).</li>
<li>Sunami, Y., Häußler, J., Kleeff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+heterogeneity+of+pancreatic+stellate+cells%2C+mesenchymal+stem+cells%2C+and+cancer-associated+fibroblasts+in+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Cellular heterogeneity of pancreatic stellate cells, mesenchymal stem cells, and cancer-associated fibroblasts in pancreatic cancer.</a> Cancers. 12 (12), 3770(2020).</li>
<li>Öhlund, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+populations+of+inflammatory+fibroblasts+and+myofibroblasts+in+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Distinct populations of inflammatory fibroblasts and myofibroblasts in pancreatic cancer.</a> J Exp Med. 214 (3), 579-596 (2017).</li>
<li>Pandol, S., Edderkaoui, M., Gukovsky, I., Lugea, A., Gukovskaya, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Desmoplasia+of+pancreatic+ductal+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Desmoplasia of pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> Clin Gastroenterol Hepatol. 7 (11), S44-S47 (2009).</li>
<li>Watanabe, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+pancreatic+ductal+cancer%3A+fibrotic+focus+and+%CE%B2-catenin+expression+correlate+with+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Advanced pancreatic ductal cancer: fibrotic focus and β-catenin expression correlate with outcome.</a> Pancreas. 26 (4), 326-333 (2003).</li>
<li>Hu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-infiltrating+podoplanin%2B+fibroblasts+predict+worse+outcome+in+solid+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Physiol+Biochem%22%5BJournal%5D)">Tumor-infiltrating podoplanin+ fibroblasts predict worse outcome in solid tumors.</a> Cell Physiol Biochem. 51 (3), 1041-1050 (2018).</li>
<li>Kapałczyńska, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2D+and+3D+cell+cultures-a+comparison+of+different+types+of+cancer+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">2D and 3D cell cultures-a comparison of different types of cancer cell cultures.</a> Arch Med Sci. 14 (4), 910-919 (2018).</li>
<li>Monberg, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Occult+polyclonality+of+preclinical+pancreatic+cancer+models+drives+in+vitro+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Occult polyclonality of preclinical pancreatic cancer models drives in vitro evolution.</a> Nat Commun. 13 (1), 3652(2022).</li>
<li>Emerman, J. T., Pitelka, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintenance+and+induction+of+morphological+differentiation+in+dissociated+mammary+epithelium+on+floating+collagen+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro%22%5BJournal%5D)">Maintenance and induction of morphological differentiation in dissociated mammary epithelium on floating collagen membranes.</a> In Vitro. 13 (5), 316-328 (1977).</li>
<li>Kelm, J. M., Timmins, N. E., Brown, C. J., Fussenegger, M., Nielsen, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+generation+of+homogeneous+multicellular+tumor+spheroids+applicable+to+a+wide+variety+of+cell+types%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Method for generation of homogeneous multicellular tumor spheroids applicable to a wide variety of cell types.</a> Biotechnol Bioeng. 83 (2), 173-180 (2003).</li>
<li>Kikuta, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+stellate+cells+promote+epithelial-mesenchymal+transition+in+pancreatic+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Pancreatic stellate cells promote epithelial-mesenchymal transition in pancreatic cancer cells.</a> Biochem Biophys Res Commun. 403 (3-4), 380-384 (2010).</li>
<li>Lee, J. -H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+co-culture+of+pancreatic+tumor+spheroids+with+stellate+cells+as+a+novel+3D+model+for+investigation+of+stroma-mediated+cell+motility+and+drug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Microfluidic co-culture of pancreatic tumor spheroids with stellate cells as a novel 3D model for investigation of stroma-mediated cell motility and drug resistance.</a> J Exp Clin Cancer Res. 37 (1), 4(2018).</li>
<li>Wong, C. -W., Han, H. -W., Tien, Y. -W., Hsu, S. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomaterial+substrate-derived+compact+cellular+spheroids+mimicking+the+behavior+of+pancreatic+cancer+and+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Biomaterial substrate-derived compact cellular spheroids mimicking the behavior of pancreatic cancer and microenvironment.</a> Biomaterials. 213, 119202(2019).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+heterospecies+spheroids+of+pancreatic+stroma+and+cancer+cells+demonstrate+key+phenotypes+of+pancreatic+ductal+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Oncol%22%5BJournal%5D)">3D heterospecies spheroids of pancreatic stroma and cancer cells demonstrate key phenotypes of pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> Transl Oncol. 14 (7), 101107(2021).</li>
<li>Vonlaufen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+stellate+cells%3A+partners+in+crime+with+pancreatic+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Pancreatic stellate cells: partners in crime with pancreatic cancer cells.</a> Cancer Res. 68 (7), 2085-2093 (2008).</li>
<li>Bachem, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+carcinoma+cells+induce+fibrosis+by+stimulating+proliferation+and+matrix+synthesis+of+stellate+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Pancreatic carcinoma cells induce fibrosis by stimulating proliferation and matrix synthesis of stellate cells.</a> Gastroenterology. 128 (4), 907-921 (2005).</li>
<li>Greco, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+cancer+cells+invasiveness+is+mainly+affected+by+interleukin-1%CE%B2+not+by+transforming+growth+factor-%CE%B21%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biol+Markers%22%5BJournal%5D)">Pancreatic cancer cells invasiveness is mainly affected by interleukin-1β not by transforming growth factor-β1.</a> Int J Biol Markers. 20 (4), 235-241 (2005).</li>
<li>Arao, S., Masumoto, A., Otsuki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B21+integrins+play+an+essential+role+in+adhesion+and+invasion+of+pancreatic+carcinoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">β1 integrins play an essential role in adhesion and invasion of pancreatic carcinoma cells.</a> Pancreas. 20 (2), 129-137 (2000).</li>
<li>Sawai, H., Yamamoto, M., Okada, Y., Sato, M., Akamo, Y., Takeyama, H., Manabe, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alteration+of+integrins+by+Interleukin-1alpha+in+human+pancreatic+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Alteration of integrins by Interleukin-1alpha in human pancreatic cancer cells.</a> Pancreas. 23 (4), 399-405 (2001).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+and+function+of+the+epidermal+growth+factor+receptor+in+physiology+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Expression and function of the epidermal growth factor receptor in physiology and disease.</a> Physiol Rev. 96 (3), 1025-1069 (2016).</li>
<li>Deer, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotype+and+genotype+of+pancreatic+cancer+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Phenotype and genotype of pancreatic cancer cell lines.</a> Pancreas. 39 (4), 425(2010).</li>
<li>Stahle, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+in+LPA-induced+tumor+cell+migration%3A+critical+role+of+phosphorylated+ERK%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Mechanisms in LPA-induced tumor cell migration: critical role of phosphorylated ERK.</a> J Cell Sci. 116, Pt 18 3835-3846 (2003).</li>
<li>Aubert, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decrease+of+human+pancreatic+cancer+cell+tumorigenicity+by+%CE%B11%2C+3galactosyltransferase+gene+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Decrease of human pancreatic cancer cell tumorigenicity by α1, 3galactosyltransferase gene transfer.</a> Int J Cancer. 107 (6), 910-918 (2003).</li>
<li>Miknyoczki, S. J., Chang, H., Klein-Szanto, A., Dionne, C. A., Ruggeri, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Trk+tyrosine+kinase+inhibitor+CEP-701+%28KT-5555%29+exhibits+significant+antitumor+efficacy+in+preclinical+xenograft+modelsof+human+pancreatic+ductal+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">The Trk tyrosine kinase inhibitor CEP-701 (KT-5555) exhibits significant antitumor efficacy in preclinical xenograft modelsof human pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> Clin Cancer Res. 5 (8), 2205-2212 (1999).</li>
<li>Fukasawa, M., Korc, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+endothelial+growth+factor-trap+suppresses+tumorigenicity+of+multiple+pancreatic+cancer+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Vascular endothelial growth factor-trap suppresses tumorigenicity of multiple pancreatic cancer cell lines.</a> Clin Cancer Res. 10 (10), 3327-3332 (2004).</li>
<li>Hernández-Camarero, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+%28pro%29+enzymes+treatment+suppresses+BXPC-3+pancreatic+Cancer+Stem+Cell+subpopulation+and+impairs+tumour+engrafting%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Pancreatic (pro) enzymes treatment suppresses BXPC-3 pancreatic Cancer Stem Cell subpopulation and impairs tumour engrafting.</a> Sci Rep. 9 (1), 11359(2019).</li>
<li>Ware, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+homogenous+three-dimensional+pancreatic+cancer+cell+spheroids+using+an+improved+hanging+drop+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Generation of homogenous three-dimensional pancreatic cancer cell spheroids using an improved hanging drop technique.</a> Tissue Eng Part C Methods. 22 (4), 312-321 (2016).</li>
<li>Longati, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+pancreatic+carcinoma+spheroids+induce+a+matrix-rich%2C+chemoresistant+phenotype+offering+a+better+model+for+drug+testing%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">3D pancreatic carcinoma spheroids induce a matrix-rich, chemoresistant phenotype offering a better model for drug testing.</a> BMC Cancer. 13, 95(2013).</li>
<li>Kpeglo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+the+mechanical+stiffness+of+pancreatic+ductal+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Matrix+Biol+Plus%22%5BJournal%5D)">Modeling the mechanical stiffness of pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> Matrix Biol Plus. 14, 100109(2022).</li>
<li>Jang, S. -D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-cancer+activity+profiling+of+chemotherapeutic+agents+in+3D+co-cultures+of+pancreatic+tumor+spheroids+with+cancer-associated+fibroblasts+and+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Anti-cancer activity profiling of chemotherapeutic agents in 3D co-cultures of pancreatic tumor spheroids with cancer-associated fibroblasts and macrophages.</a> Cancers. 13 (23), 5955(2021).</li>
<li>Pednekar, K. P., Heinrich, M. A., van Baarlen, J., Prakash, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+3D+%C2%B5tissues+mimicking+the+fibrotic+stroma+in+pancreatic+cancer+to+study+cellular+interactions+and+stroma-modulating+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Novel 3D µtissues mimicking the fibrotic stroma in pancreatic cancer to study cellular interactions and stroma-modulating therapeutics.</a> Cancers. 13 (19), 5006(2021).</li>
<li>Kim, S. -K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+heterogeneity+and+plasticity+of+cancer+cell+migration+in+a+pancreatic+tumor+three-dimensional+culture+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Phenotypic heterogeneity and plasticity of cancer cell migration in a pancreatic tumor three-dimensional culture model.</a> Cancers. 12 (5), 1305(2020).</li>
<li>Hwang, H. J., Oh, M. -S., Lee, D. W., Kuh, H. -J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+quantitative+analysis+of+stroma-mediated+cancer+cell+invasion%2C+matrix+remodeling%2C+and+drug+response+in+a+3D+co-culture+model+of+pancreatic+tumor+spheroids+and+stellate+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Multiplex quantitative analysis of stroma-mediated cancer cell invasion, matrix remodeling, and drug response in a 3D co-culture model of pancreatic tumor spheroids and stellate cells.</a> J Exp Clin Cancer Res. 38 (1), 258(2019).</li>
<li>Durymanov, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcutaneous+inoculation+of+3D+pancreatic+cancer+spheroids+results+in+development+of+reproducible+stroma-rich+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Oncol%22%5BJournal%5D)">Subcutaneous inoculation of 3D pancreatic cancer spheroids results in development of reproducible stroma-rich tumors.</a> Transl Oncol. 12 (1), 180-189 (2019).</li>
<li>Giustarini, G., Teng, G., Pavesi, A., Adriani, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+3D+heterocellular+spheroids+of+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+for+the+study+of+cell+interactions+in+the+tumor+immune+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Characterization of 3D heterocellular spheroids of pancreatic ductal adenocarcinoma for the study of cell interactions in the tumor immune microenvironment.</a> Front Oncol. 13, 1156769(2023).</li>
<li>Alseud, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+biological+activity+of+11-oxygenated+and+heterocyclic+estrone+analogs+in+pancreatic+cancer+monolayers+and+3D+spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorg+Med+Chem%22%5BJournal%5D)">Synthesis and biological activity of 11-oxygenated and heterocyclic estrone analogs in pancreatic cancer monolayers and 3D spheroids.</a> Bioorg Med Chem. , (2024).</li>
<li>Fitzgerald, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+activation+protein+regulates+natural+killer+cell+migration%2C+extravasation+and+tumor+infiltration%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Fibroblast activation protein regulates natural killer cell migration, extravasation and tumor infiltration.</a> bioRxiv. , 429622(2021).</li>
<li>Wishart, G., Gupta, P., Schettino, G., Nisbet, A., Velliou, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+tissue+models+as+tools+for+radiotherapy+screening+for+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Radiol%22%5BJournal%5D)">3D tissue models as tools for radiotherapy screening for pancreatic cancer.</a> Br J Radiol. 94 (1120), 20201397(2021).</li>
<li>Peirsman, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MISpheroID%3A+a+knowledgebase+and+transparency+tool+for+minimum+information+in+spheroid+identity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">MISpheroID: a knowledgebase and transparency tool for minimum information in spheroid identity.</a> Nat Methods. 18 (11), 1294-1303 (2021).</li>
<li>Durymanov, M., Kroll, C., Permyakova, A., Reineke, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+endocytosis+in+nanoparticle+penetration+of+3D+pancreatic+cancer+spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharm%22%5BJournal%5D)">Role of endocytosis in nanoparticle penetration of 3D pancreatic cancer spheroids.</a> Mol Pharm. 16 (3), 1074-1082 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Axio Observer microscope inversé</td><td>Carl Zeiss</td><td>0450-354</td><td></td></tr><tr><td>Cellomètre Auto T4</td><td>Nexcelom Bioscience LLC</td><td>Auto-T4</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, poudre, haute teneur en glucose</td><td>Gibco</td><td>12100046</td><td></td></tr><tr><td>Âne anti-mouton conjugué avec Alexa Fluor 568</td><td>Abcam</td><td>ab175712</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal de bovin&nbsp ;</td><td>Cytiva</td><td>SH3091003HI</td><td></td></tr><tr><td>IgG anti-lapin de chèvre étiqueté avec Alexa Fluor 488&nbsp ;</td><td>Abcam</td><td>ab150077</td><td></td></tr><tr><td>Solution saline équilibrée Hanks (HBSS)&nbsp ;</td><td>Gibco</td><td>14175145</td><td></td></tr><tr><td>Cellules stellaires pancréatiques humaines (HPaSteC)</td><td>ScienCell</td><td>3830</td><td></td></tr><tr><td>Microscope Nikon</td><td>Nikon</td><td>Eclipse Ts 100</td><td></td></tr><tr><td>Nunc 96 puits Polystyrène à fond rond Plaques à micropuits</td><td>Thermo Scientific</td><td>12-565-331</td><td></td></tr><tr><td>Olympus Fluoview FV1200 laser confocal</td><td>Olympus</td><td>N/A</td><td>Produit arrêté de série</td></tr><tr><td>PANC-1</td><td>ATCC</td><td>CRL-1469</td><td></td></tr><tr><td>Poly-HEMA</td><td>Sigma</td><td>P3932</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps polyclonaux anti-laminine de lapin&nbsp ;</td><td>Abcam</td><td>ab11575</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps polyclonaux de collagène anti-type I de lapin&nbsp ;</td><td>Abcam</td><td>ab34710</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps polyclonaux anti-acide hyaluronique de mouton</td><td>Abcam</td><td>ab53842</td><td></td></tr><tr><td>Kit complet de milieux cellulaires stellaires&nbsp ;</td><td>ScienCell</td><td>5301</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine&nbsp ;</td><td>MP Biomedicals, LLC</td><td>153571</td><td>Solution de trypsine préparée selon le protocole du fabricant et utilisée à 0,25 % p/v ;</td></tr><tr><td>Solution de neutralisation de la trypsine (TNS)</td><td>ScienCell</td><td>103</td><td></td></tr></tbody></table>

croissance de sphéroïdes tridimensionnels desmoplastiques du cancer du pancréas à partir de la co-culture

Growing Desmoplastic Three-Dimensional Pancreatic Cancer Spheroids from Co-Culture

Trois des étapes les plus critiques de la croissance des sphéroïdes sont le dénombrement initial des cellules, les étapes de mélange pendant l’ensemencement des sphéroïdes et l’exécution de changements de milieu en temps opportun pour permettre aux sphéroïdes de se développer (figure 1). De plus, il est essentiel de se familiariser avec la figure 2 sur les changements de supports après le jour 3 pour permettre des changements de supports efficaces en raison de l’augmentation du volume de supports par puits. Lorsque toutes ces étapes sont exécutées selon les instructions données, on constate que les sphéroïdes (figure 3) se développent jusqu’à un volume moyen de 0,048 ± 0,012 mm3 (451 μm x 462,84 μm) (figure 4). Dans certains cas, les cellules peuvent mieux se développer, ce qui a conduit à des volumes moyens initiaux plus importants de 0,096 ± 0,014 mm3 (611 μm x 560 μm) au jour 14. Diverses raisons peuvent conduire les sphéroïdes à avoir des volumes initiaux plus importants, tels que le maintien de la température et de l’humidité de l’incubateur ou l’utilisation de passages cellulaires plus précoces, qui ont une vitalité légèrement améliorée par rapport aux passages ultérieurs.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66625/66625fig03.jpg"> Figure 3 : Un sphéroïde représentatif vu au jour 14 (taille : 451,59 μm x 462,84 μm). Barre d’échelle = 200 μm. Chaque sphéroïde est mesuré le long de son axe le plus long et de son axe le plus court, respectivement, et utilisé l’équation décrite dans la section des méthodes pour calculer le volume. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66625/66625fig03large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66625/66625fig04.jpg"> Figure 4 : Progression de la croissance des sphéroïdes sur 17 jours. Les planches 1 et 2 sont des répliques. Les barres d’erreur représentent l’écart type. Ce chiffre peut être utilisé comme une estimation approximative des volumes de sphéroïdes qui peuvent être observés les jours 6, 10, 14 et 17. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66625/66625fig04large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
Cependant, dans les cas où les cellules ne sont pas comptées correctement ou que la suspension cellulaire n’est pas complètement mélangée, ou que la culture finale n’est pas régulièrement maintenue, ou qu’une combinaison de ces erreurs se produit, cela peut conduire au développement de sphéroïdes plus petits ou de sphéroïdes incomplètement développés. Des sphéroïdes d’apparence similaire ont également été observés lorsque les études d’optimisation initiales n’ont complété les milieux que dans les puits autour de la périphérie de la plaque le jour 3 au lieu de la plaque entière (Figure 5). Par ailleurs, dans les cas où les cellules ne sont pas bien mélangées, ou si des erreurs initiales de comptage/dilution conduisent à l’ensemencement de plus de cellules par puits que la recommandation, plusieurs sphéroïdes peuvent être observés par puits. Un résultat similaire a été observé lorsque les cellules PANC-1 :HPaSteC ont été utilisées à un rapport de 240:120 (Figure 6). Cela peut également être observé à l’occasion lorsque les sphéroïdes sont cultivés par direction, mais que ces sphéroïdes sont moins nombreux (p. ex., 4 puits sur 96 peuvent contenir deux sphéroïdes par puits au lieu d’un). Dans les cas où plusieurs sphéroïdes sont rencontrés, évitez d’utiliser les puits avec plusieurs sphéroïdes ou notez les changements de volume lorsque ces sphéroïdes sont traités. Des changements de support inappropriés où la pointe de la pipette plonge sous le halo (Figure 1) peuvent également entraîner une perte accidentelle des sphéroïdes.
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66625/66625fig05.jpg"> Figure 5 : Une image représentative d’un sphéroïde mal développé au jour 14. Barre d’échelle = 200 μm. Ici, les cellules ne se sont pas bien agrégées, il devient donc difficile de mesurer la longueur et la largeur du sphéroïde. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66625/66625fig05large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66625/66625fig06.jpg"> Figure 6 : Une image représentative d’un puits contenant deux sphéroïdes mal développés, comme on le voit au jour 14. Barre d’échelle = 200 μm. Ici, l’un des sphéroïdes a une taille de 246,61 μm x 178,31 μm et l’autre de 289,13 μm x 252,35 μm. Il s’agit d’un exemple où il y a probablement un problème avec les dilutions initiales ou la qualité des cellules qui ont été utilisées pour démarrer l’expérience. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66625/66625fig06large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
Les sphéroïdes développent également une MEC avec quatre des principaux composants de la MEC : le collagène-I, la laminine, l’acide hyaluronique et la fibronectine. Dans des études publiées précédemment par le laboratoire, l’avantage de la co-culture par rapport à PANC-1 seul a été démontré en termes de sphéroïdes homo PANC-1 présentant du collagène diffus, pas de fibronectine et un dépôt d’acide hyaluronique moindre.
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66625/66625fig07.jpg"> Figure 7 : Image représentative des quatre principaux composants de la MEC observés au jour 17 chez les sphéroïdes non traités : collagène I, laminine, acide hyaluronique et fibronectine. Ces images sont obtenues après cryocoupes d’immunomarquage du sphéroïde. La luminosité de ces images a été augmentée uniformément pour aider à mettre en évidence les différences d’apparence. Les zones où les tissus sont endommagés ou manquants doivent être ajustées pendant que les mesures d’intensité sont effectuées. Barres d’échelle = 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66625/66625fig07large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a>

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