Name: Préparation et analyse de lames histologiques de globes oculaires de rat et de souris pour évaluer la rétine (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-08-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: Apprenez la préparation de lames histologiques de globes oculaires de rongeurs pour évaluer la rétine en microscopie optique. Ce protocole détaillé facilite l'étude des maladies ophtalmiques et neurodégénératives.

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<meta charset="utf8"></head><body>Évaluation de l’épaisseur de la rétine et du nombre de couches cellulaires ganglionnaires dans les globes oculaires des rongeurs

<ol><li>Kels, B. D., Grzybowski, A., Grant-Kels, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+ocular+anatomy%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Human ocular anatomy.</a> Clin Dermatol. 33 (2), 140-146 (2015).</li>
<li>Gupta, M. P., Herzlich, A. A., Sauer, T., Chan, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+anatomy+and+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Retinal anatomy and pathology.</a> Dev Ophthalmol. 55, 7-17 (2016).</li>
<li>Masland, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+diversity+in+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Neuronal diversity in the retina.</a> Curr Opin Neurobiol. 11 (4), 431-436 (2001).</li>
<li>Vecino, E., Rodriguez, F. D., Ruzafa, N., Pereiro, X., Sharma, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glia-neuron+interactions+in+the+mammalian+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Glia-neuron interactions in the mammalian retina.</a> Prog Retin Eye Res. 51, 1-40 (2016).</li>
<li>Boulton, M., Dayhaw-Barker, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+retinal+pigment+epithelium%3A+Topographical+variation+and+ageing+changes%5BTitle%5D)+AND+%22Eye+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">The role of the retinal pigment epithelium: Topographical variation and ageing changes.</a> Eye (Lond). 15 (Pt 3), 384-389 (2001).</li>
<li>Baden, T., Euler, T., Berens, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+retinal+basis+of+vision+across+species%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Understanding the retinal basis of vision across species.</a> Nat Rev Neurosci. 21 (1), 5-20 (2020).</li>
<li>Nguyen-Ba-Charvet, K. T., Chédotal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+retinal+layers%5BTitle%5D)+AND+%22C+R+Biol%22%5BJournal%5D)">Development of retinal layers.</a> C R Biol. 337 (3), 153-159 (2014).</li>
<li>Adams, T., Chernoff, E., Wilson, J., Dharmarajan, S. Reactive muller glia as potential retinal progenitors. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAdams%2C+T+%22InTech%22">InTech</a>. , (2013).</li>
<li>Salman, A., Mcclements, M. E., Maclaren, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+on+the+regeneration+potential+of+m%C3%BCller+glia+in+the+mammalian+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Insights on the regeneration potential of müller glia in the mammalian retina.</a> Cells. 10 (8), 1957(2021).</li>
<li>Marchesi, N., Fahmideh, F., Boschi, F., Pascale, A., Barbieri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+neurodegenerative+diseases%3A+Interconnection+between+retina+and+cortical+areas%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Ocular neurodegenerative diseases: Interconnection between retina and cortical areas.</a> Cells. 10 (9), 2394(2021).</li>
<li>Enoch, J., Mcdonald, L., Jones, L., Jones, P. R., Crabb, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+whether+sight+is+the+most+valued+sense%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Evaluating whether sight is the most valued sense.</a> JAMA Ophthalmol. 137 (11), 1317-1320 (2019).</li>
<li>Struebing, F. L., Geisert, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+animal+models+can+tell+us+about+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Mol+Biol+Transl+Sci%22%5BJournal%5D)">What animal models can tell us about glaucoma.</a> Prog Mol Biol Transl Sci. 134, 365-380 (2015).</li>
<li>Bouhenni, R. A., Dunmire, J., Sewell, A., Edward, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Animal models of glaucoma.</a> J Biomed Biotechnol. 2012, 692609(2012).</li>
<li>Wilding, L. A., Uchihashi, M., Bergin, I. L., Nowland, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enucleation+for+treating+rodent+ocular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Enucleation for treating rodent ocular disease.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 54 (3), 328-332 (2015).</li>
<li>Lin, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+to+inject+ocular+drug+implants+into+mouse+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">A protocol to inject ocular drug implants into mouse eyes.</a> STAR Protoc. 3 (1), 101143(2022).</li>
<li>Lozano, D. C., Twa, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+rat+schematic+eye+from+in+vivo+biometry+and+the+correction+of+lateral+magnification+in+sd-oct+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Development of a rat schematic eye from in vivo biometry and the correction of lateral magnification in sd-oct imaging.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (9), 6446-6455 (2013).</li>
<li>Castro, G., Navajas, E., Farah, M. E., Maia, M., Rodrigues, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migration%2C+integration%2C+survival%2C+and+differentiation+of+stem+cell-derived+neural+progenitors+in+the+retina+in+a+pharmacological+model+of+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22ISRN+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Migration, integration, survival, and differentiation of stem cell-derived neural progenitors in the retina in a pharmacological model of retinal degeneration.</a> ISRN Ophthalmol. 2013, 752161(2013).</li>
<li>Chai, G. R., Liu, S., Yang, H. W., Chen, X. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quercetin+protects+against+diabetic+retinopathy+in+rats+by+inducing+heme+oxygenase-1+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regen+Res%22%5BJournal%5D)">Quercetin protects against diabetic retinopathy in rats by inducing heme oxygenase-1 expression.</a> Neural Regen Res. 16 (7), 1344-1350 (2021).</li>
<li>Igarashi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tyrosine+triple+mutated+aav2-bdnf+gene+therapy+in+a+rat+model+of+transient+iop+elevation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Tyrosine triple mutated aav2-bdnf gene therapy in a rat model of transient iop elevation.</a> Mol Vis. 22, 816-826 (2016).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+efficacy+of+neural+stem+cells+originating+from+umbilical+cord-derived+mesenchymal+stem+cells+in+diabetic+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Therapeutic efficacy of neural stem cells originating from umbilical cord-derived mesenchymal stem cells in diabetic retinopathy.</a> Sci Rep. 7 (1), 408(2017).</li>
<li>Dorfman, D., Aranda, M. L., Rosenstein, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enriched+environment+protects+the+optic+nerve+from+early+diabetes-induced+damage+in+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Enriched environment protects the optic nerve from early diabetes-induced damage in adult rats.</a> PLoS One. 10 (8), e0136637(2015).</li>
<li>Barber, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+apoptosis+in+the+retina+during+experimental+and+human+diabetes.+Early+onset+and+effect+of+insulin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Neural apoptosis in the retina during experimental and human diabetes. Early onset and effect of insulin.</a> J Clin Invest. 102 (4), 783-791 (1998).</li>
<li>Steinle, J. J., Kern, T. S., Thomas, S. A., Mcfadyen-Ketchum, L. S., Smith, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+basement+membrane+thickness%2C+pericyte+ghosts%2C+and+loss+of+retinal+thickness+and+cells+in+dopamine+beta+hydroxylase+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Increased basement membrane thickness, pericyte ghosts, and loss of retinal thickness and cells in dopamine beta hydroxylase knockout mice.</a> Exp Eye Res. 88 (6), 1014-1019 (2009).</li>
<li>Polley, E. H., Walsh, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+flat+embedding+and+en+face+sectioning+of+the+mammalian+retina+for+autoradiography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Method%22%5BJournal%5D)">A technique for flat embedding and en face sectioning of the mammalian retina for autoradiography.</a> J Neurosci Method. 12 (1), 57-64 (1984).</li>
<li>Turner, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematoxylin+toluidine+blue-phloxinate+staining+of+glycol+methacrylate+sections+of+retina+and+other+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Stain+Technol%22%5BJournal%5D)">Hematoxylin toluidine blue-phloxinate staining of glycol methacrylate sections of retina and other tissues.</a> Stain Technol. 55 (4), 229-233 (1980).</li>
<li>Cheng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+optical+coherence+tomography+and+retinal+histology+in+normal+and+pro23his+retinal+degeneration+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Vis+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Correlation of optical coherence tomography and retinal histology in normal and pro23his retinal degeneration pig.</a> Transl Vis Sci Technol. 7 (6), 18(2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Acétone&nbsp ;</td><td>Chempur&nbsp ;</td><td></td><td></td>111024800</tr><tr><td>Dumont Pince à épiler #5, 11cm, 0.05 x 0.01mm Tips</td><td>World Precision Instruments</td><td>14095</td><td>petite, pince microchirurgicale</td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Mar-Four</td><td>4P.05.2001/L</td><td>Solution aqueuse</td></tr><tr><td>Alcool éthylique 96 %</td><td>Chempur&nbsp ;</td><td>CH.ET. AL.96 %CZDA. </td><td></td>CH</tr><tr><td>Alcool éthylique 99,9 %</td><td>Chempur&nbsp ;</td><td>Ch. ETYL. ALK.99,9 %BW</td><td>Utiliser pour préparer des solutions à 70 % et 80 % d’EtOH</td></tr><tr><td>Glacier - 86 &deg ; C Congélateur ultra-basse température NU-9483E</td><td>NuAire</td><td>13027D0034</td><td>Température de congélation - 80 &deg ; C</td></tr><tr><td>Lames en verre</td><td>Mar-Four</td><td>MI.15.01673</td><td>Lames en verre dépoli avec un champ mat double face pour la description</td></tr><tr><td>Leica CV5030 Couvre-croûte en verre entièrement automatisé</td><td>Leica Biosystems&nbsp ;</td><td>14,04,78,80,101</td><td>Scelleuse de lames automatisée&nbsp ;</td></tr><tr><td>Hématoxyline</td> de <td>Mayer Chempur&nbsp ;</td><td></td><td></td>124687402</tr><tr><td>Moules à base métallique 15 mm x 15 mm</td><td>Leica Biosystems.</td><td></td><td></td>3803081</tr><tr><td>Microme HM 340 E</td><td>Thermo Scientific</td><td>90-519-0</td><td>Microtome</td></tr><tr><td>Lames de rasoir Microtome</td><td>Mar-Four</td><td>HI. N.35</td><td>Angle de coupe 35&deg ;</td></tr><tr><td>Cassette de biopsie Micro-Twin</td><td>Mar-Four</td><td>LN.13874550</td><td></td></tr><tr><td>Processeur de tissus hybride à micro-ondes</td><td>Milestone</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Multistainer Leica ST5020</td><td>Leica Biosystems&nbsp ;</td><td></td><td>Colorateur de lames automatisé&nbsp ;</td></tr><tr><td>NanoZoomer 2.0-HT Scanner de lames</td><td>Hamamatsu</td><td>C9600</td><td>Scanner de lames histopathologiques</td></tr><tr><td>NDP.view2 Logiciel de visualisation d’images</td><td>Hamamatsu</td><td>U12388-01</td><td>Logiciel de visualisation</td></tr><tr><td>d’images Paraffine Pathowax Plus</td><td>Mar-Four</td><td>4P. PWP.010</td><td>Température de fusion 56 &deg ; C - 58 &deg ; C</td></tr><tr><td>Paraformaldéhyde</td><td>Sigma - Aldrich</td><td>441244-1KG</td><td>Préparer une solution à 4 % dans des comprimés PBS</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Merck Millipore</td><td>524650-1EA</td><td>Utiliser pour préparer une solution de solution saline tampon phosphate, selon les instructions du fabricant</td></tr><tr><td>Percer Tubes de microcentrifugation, 1,5 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>69715</td><td></td></tr><tr><td>Réfrigérateur-congélateur EN14000AW</td><td>Electrolux</td><td>925032562-00</td><td>Réfrigération 4 &deg ; C</td></tr><tr><td>Lame de scalpel</td><td>Swann-Morton</td><td>T.OST. SKAL00.024</td><td></td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>Chempur&nbsp ;</td><td></td><td></td>427720906</tr><tr><td>Ciseaux à ressort SuperCut, 12,5 cm, Curved</td><td>World Precision Instruments</td><td>501925</td><td>petits ciseaux microchirurgicaux incurvés</td></tr><tr><td>Ruban pour soudeuses automatiques</td><td>Mar-Four KP-3020</td><td>/SMRH001</td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Chempur&nbsp ;</td><td>Ch. KSYL.5l.METAL.OP&nbsp ;</td><td></td></tr></tbody></table>

préparation et analyse de lames histologiques de globes oculaires de rat et de souris pour évaluer la rétine

Preparation and Analysis of Histological Slides of Rat and Mouse Eyeballs to Evaluate the Retina

Grâce à l’utilisation du protocole présenté, l’anatomie et la morphologie de structures spécifiques du globe oculaire peuvent être évaluées en détail. Notre équipe se concentre sur la recherche des mécanismes pathologiques de la neurodégénérescence dans les troubles rétiniens, tels que le glaucome, la rétinopathie diabétique et la rétinopathie hypertensive. Pour évaluer les caractéristiques de la neurodégénérescence de la rétine, nous avons évalué le RT (globe oculaire de souris -Figure 2, globe oculaire de rat -Figure 3), ONL, OPL, INL et IPL (globe oculaire de souris -Figure 4, globe oculaire de rat -Figure 5), et le nombre de cellules du GCL (globe oculaire de souris -Figure 6, globe oculaire de rat -Figure 7). On s’attend à ce que la RT et les cellules de la GCL soient les plus élevées dans la rétine centrale et les plus faibles à la périphérie. En coupant le globe oculaire au niveau de la pupille, des coupes transversales à travers la rétine centrale (au pôle postérieur du globe oculaire) et périphérique (près du corps ciliaire) sont réalisées sur une seule lame.
Bien que le comptage des cellules GCL puisse être considéré comme assez objectif, le biais causé par une section asymétrique peut influencer les résultats de la mesure des couches rétiniennes spécifiques. Pour éviter les biais, les mesures peuvent être présentées sous la forme du rapport entre l’épaisseur d’une couche donnée et la valeur RT : ONL/RT, OPL/RT, INL/RT et IPL/RT.
<img alt="Schéma de l’anatomie de l’œil montrant les parties étiquetées : rétine, sclère, lentille, cornée, nerf optique, macula." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> 
Figure 1 : Anatomie du globe oculaire. Coupe transversale sagittale d’un globe oculaire avec l’étiquetage de ses plus grandes structures. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Image microscopique d’une coupe transversale de la rétine, montrant les couches de tissus, mesure de l’épaisseur 125 μm." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig02.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> 
Figure 2 : Épaisseur de la rétine chez une souris. Mesure de l’épaisseur rétinienne (RT) de la membrane limitante externe à la membrane limitante interne au point le plus large, marqué par la barre verte. Globe oculaire de souris (souche : C57Bl/6, âge : 44 semaines). La barre d’échelle dans le coin gauche indique la longueur de 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a>
<img alt="Coupe histologique montrant des couches rétiniennes de 53,4 μm d’épaisseur ; Image microscopique, étude tissulaire." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig03.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> 
Figure 3 : Épaisseur de la rétine chez un rat. Mesure de l’épaisseur rétinienne (RT) de la membrane limitante externe à la membrane limitante interne au point le plus large, marqué par la barre verte. Globe oculaire de rat (souche : Lewis, âge : 16 semaines). La barre d’échelle dans le coin gauche indique la longueur de 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig03large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a>
<img alt="Schéma en coupe transversale du tissu rétinien ; couches mesurées : IPL, INL, OPL, ONL ; Analyse microscopique." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig04.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 4"> 
Figure 4 : Couches rétiniennes chez une souris. Mesure de l’épaisseur des différentes couches de la rétine : couche nucléaire externe (ONL), couche plexiforme externe (OPL), couche nucléaire interne (INL) et couche plexiforme interne (IPL), marquées de barres vertes. Globe oculaire de souris (souche : C57Bl/6, âge : 44 semaines). La barre d’échelle dans le coin gauche indique la longueur de 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig04large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a>
<img alt="Image microscope de la coupe efficace de la rétine avec couches marquées : OPL, ONL, IPL, INL ; Barre d’échelle 100 μm." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig05.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 5"> 
Figure 5 : Couches rétiniennes chez un rat. Mesure de l’épaisseur des différentes couches de la rétine : couche nucléaire externe (ONL), couche plexiforme externe (OPL), couche nucléaire interne (INL) et couche plexiforme interne (IPL), marquées de barres vertes. Globe oculaire de rat (souche : Lewis, âge : 16 semaines). La barre d’échelle dans le coin gauche indique la longueur de 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig05large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a>
<img alt="Coupe histologique montrant la structure cellulaire en couches, image microscope, analyse tissulaire, échelle de 500 μm." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig06.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 6"> 
Figure 6 : Comptage des cellules de la couche de cellules ganglionnaires chez une souris. Méthode de comptage des cellules de la couche de cellules ganglionnaires (GCL) le long de la rétine sur une longueur de 500 μm. Les corps unicellulaires ont été identifiés comme des corps ronds, colorés à l’hématoxyline, situés dans la couche de cellules ganglionnaires. Les cellules sont marquées de cercles noirs. Globe oculaire de souris (souche : DBA/2, âge : 44 semaines). La barre d’échelle dans le coin gauche indique la longueur de 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig06large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a>
<img alt="Lame d’histologie, coupe transversale de la rétine ; couches de tissus visibles ; Examen microscopique, échelle 100 μm." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig07.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 7"> 
Figure 7 : Comptage des cellules de la couche de cellules ganglionnaires chez un rat. Méthode de comptage des cellules de la couche de cellules ganglionnaires (GCL) le long de la rétine sur une longueur de 100 μm. Les corps unicellulaires ont été identifiés comme des corps ronds, colorés à l’hématoxyline, situés dans la couche de cellules ganglionnaires. Les cellules sont marquées de cercles noirs. Globe oculaire de rat (souche : Lewis, âge : 16 semaines). La barre d’échelle dans le coin gauche indique la longueur de 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig07large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a>

Préparation et analyse de lames histologiques de globes oculaires de rat et de souris pour évaluer la rétine

A rodent eyeball is a powerful tool for researching the pathomechanisms of many ophthalmic diseases, such as glaucoma, hypertensive retinopathy, and many ...

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Médecine

Le protocole décrit ici concerne l’évaluation structurelle d’une préparation rétinienne entière. Cela comprend des descriptions de dissection tissulaire, de montage sur un insert de membrane en polytétrafluoroéthylène (PTFE) hydrophilisé, de chargement en bolus avec des marqueurs fluorescents et une comparaison de la fixation avec du carbodiimide et du paraformaldéhyde pour l’analyse immunohistochimique des composants cellulaires et synaptiques.

Protocole optimisé pour la rétine Wholemount Préparation pour l&#39;imagerie et immunohistochimie

La rétine de rongeur a depuis longtemps été reconnue comme une fenêtre accessible au cerveau. Dans ce document technique que nous fournissons un protocole qui utilise le modèle de souris de la rétinopathie induite par l'oxygène d'étudier les mécanismes qui conduisent à l'échec de la régénération vasculaire dans le système nerveux central après lésion ischémique. Le système décrit peut également être mise à profit pour explorer des stratégies pour favoriser la repousse des vaisseaux sanguins...

Évaluation de la régénération vasculaire dans le SNC Utilisation de la rétine de souris

Nous montrons trois techniques de préparation de tissus différents pour la visualisation d’immunohistochemical des péricytes microvasculaire rétine de rat, c'est-à-dire, cryo-sections, ensemble-montages et hypotonique isolement du réseau vasculaire.

Rétiniennes Cryo-sections, ensemble-montages et préparations hypotonique vaisseaux isolés pour la visualisation d’Immunohistochemical des péricytes microvasculaire

Ce rapport décrit des méthodes complètes pour préparer les sections congelées de rétine de souris pour l'immunohistochimie (IHC).  Les méthodes décrites incluent la dissection de la tasse postérieure oculaire, la fixation de paraformaldehyde, l'intégration dans la température de coupe optimale (OCT) orientation de médias et de tissu, sectionnement et immunostaining.

Préparation de la souris Retinal Cryo-sections pour l'immunohistochimie

La rétinopathie diabétique est l’une des principales causes de cécité. L’histologie, le test de dégradation de la barrière hémato-rétinienne et l’angiographie par fluorescence sont des techniques précieuses pour comprendre la physiopathologie de la rétine, ce qui pourrait améliorer encore le dépistage efficace des médicaments contre la rétinopathie diabétique.

Évaluation physiopathologique rétinienne dans un modèle de rat

L’objectif de ce protocole est de caractériser un nouveau modèle de neurodégénérescence glaucomateuse basé sur une cautérisation thermique à 360° du plexus vasculaire limbique, induisant une hypertension oculaire subaiguë.

Cautérisation complète du plexus vasculaire limbique pour le glaucome induit chirurgicalement chez les rongeurs

Cet article présente un protocole pour la microdissection oculaire chez les rongeurs. Le processus implique l’énucléation du globe oculaire avec la membrane nictitante (c’est-à-dire la troisième paupière). Ceci est ensuite suivi par la séparation des cupules postérieures et antérieures.

Microdissection de l’œil de rongeur

Les modèles murins peuvent être des outils utiles pour étudier la biologie de l’épithélium pigmenté rétinien (EPR). Il a été établi que les souris peuvent développer un éventail de pathologies RPE. Ici, nous décrivons un protocole de phénotypage pour élucider et quantifier les pathologies RPE chez la souris en utilisant la lumière, l’électron de transmission et la microscopie confocale.

Protocole d’évaluation et de quantification des pathologies de l’épithélium pigmenté rétinien dans des modèles murins de dégénérescence maculaire liée à l’âge

Un protocole pour la préparation de cryocoupes rétiniennes de souris et la réalisation d’immunomarquage sur les photorécepteurs est décrit. Cet article permet aux chercheurs de produire de manière cohérente des coupes rétiniennes congelées de souris avec une morphologie bien préservée et des résultats d’immunomarquage de haute qualité.

Cryosectionnement et immunomarquage de la rétine de souris

B7-H1 (PD-L1) et sa liaison au PD-1 fournissent une importante induite par la tumeur de signal immunosuppresseur dans le micro de la tumeur. Une technique de coloration immunohistochimique pour caractériser l'expression et la localisation de B7-H1 dans l'adénocarcinome pancréatique est décrite ici.

Coloration immunohistochimique de B7-H1 (PD-L1) sur la paraffine Diapositives de tissus adénocarcinome pancréatique

Apprenez la préparation de lames histologiques de globes oculaires de rongeurs pour évaluer la rétine en microscopie optique. Ce protocole détaillé facilite l'étude des maladies ophtalmiques et neurodégénératives.

Préparation et analyse de lames histologiques de globes oculaires de rat et de souris pour évaluer la rétine

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