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DOI: 10.3791/66703-v
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Ici, nous présentons la préparation étape par étape de l’amplification isotherme prémélangée et lyophilisée basée sur la recombinase et des réactions basées sur CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats), qui peuvent être utilisées pour la détection de biomarqueurs d’acides nucléiques d’agents pathogènes de maladies infectieuses ou d’autres marqueurs génétiques d’intérêt.
Nous développons des tests sur le lieu d’intervention pour détecter ces matériaux de maladies infectieuses. Ce test utilise l’amplification isotherme des acides nucléiques et la détection basée sur CRISPR. Avec une précision osmotique élevée similaire à la PCR, ils peuvent détecter de petites différences de séquence, y compris le polymorphisme nucléotidique unique, et peuvent être multiples.
CRISPR, les réactions osmotiques contiennent plusieurs composants et étapes et sont difficiles à réaliser sur le lieu de soins. Comme les osmotiques sont très sensibles, il existe un risque de contamination par transfert qui peut conduire à de faux résultats. Heureusement, ce problème peut être atténué si nous simplifions les procédures des réactions.
Nous proposons une méthode facile à utiliser pour détecter nos pathogènes et marqueurs génétiques à l’aide de la recombinase, de l’amplification isotherme et des réactifs basés sur CRISPR. Ces réactifs sont simples à stocker et à utiliser. Nous proposons également des conseils pour résoudre les problèmes courants lors de l’utilisation de ces méthodes et réactifs, ce qui facilite leur utilisation par les gens.
Le protocole utilise ici des réactifs CRISPR, qui facilitent le transport et le stockage. Les réactifs lyophilisés peuvent facilement être réhydratés aux points d’utilisation et conservent des efficacités d’amplification et de détection élevées. Nous espérons appliquer les technologies de diagnostic CRISPR pour détecter les maladies infectieuses endémiques et émergentes.
Si ce test peut être effectué régulièrement et correctement sur le lieu de soins, cela pourrait éclairer les options de traitement antiviral et antibiotique, potentiellement sauver des vies, réduire la surutilisation de médicaments et le développement de la résistance.
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