Name: Diagnostic post-mortem de la rage chez les animaux par le test actualisé et multiplexé LN34 Real-time Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-02T12:35:00.000+00:00
Duration: 9 min 54 s
Description: Découvrez le protocole LN34 RT-PCR multiplex pour le diagnostic post-mortem de la rage animale. Cette méthode améliore la sensibilité et réduit les coûts par échantillon testé.

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<ol><li>Meechan, P. J., Potts, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMeechan%2C+PJ+%22Biosafety+in+Microbiological+and+Biomedical+Laboratories%22">Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories</a>. , Centers for Disease Control and Prevention. (2020).</li>
<li>Terrestrial Manual 2023. , World Organization for Animal Health. At
 <a target="_blank" href="https://www.woah.org/en/what-we-do/standards/codes-and-manuals">https://www.woah.org/en/what-we-do/standards/codes-and-manuals</a> (2023).</li>
<li>Laboratory Techniques in Rabies. Volume 1, World Health Organization. At
 <a target="_blank" href="https://iris.who.int/handle/10665/310836">https://iris.who.int/handle/10665/310836</a> (2018).</li>
<li>Laboratory Techniques in Rabies. Volume 2, World Health Organization. At
 <a target="_blank" href="https://iris.who.int/bitstream/handle/10665/310837/9789241515306-eng.pdf?ua=1">https://iris.who.int/bitstream/handle/10665/310837/9789241515306-eng.pdf?ua=1</a> (2019).</li>
<li>Genevie, R., et al. Protocol for postmortem diagnosis of rabies in animals by direct fluorescent antibody testing: A minimum standard for rabies diagnosis in the United States. , At
 <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/rabies/pdf/RabiesDFASPv2.pdf">https://www.cdc.gov/rabies/pdf/RabiesDFASPv2.pdf</a> (2003).</li>
<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22WHO+Expert+Consultation+on+Rabies%3A+Third+Report%22">WHO Expert Consultation on Rabies: Third Report</a>. , World Health Organization. Geneva. (2018).</li>
<li>Gigante, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-site+evaluation+of+the+LN34+pan-lyssavirus+real-time+RT-PCR+assay+for+postmortem+rabies+diagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Multi-site evaluation of the LN34 pan-lyssavirus real-time RT-PCR assay for postmortem rabies diagnostics.</a> PLoS One. 13 (5), e0197074(2018).</li>
<li>Wadhwa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Pan-Lyssavirus+Taqman+Real-Time+RT-PCR+assay+for+the+detection+of+highly+variable+rabies+virus+and+other+lyssaviruses%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">A Pan-Lyssavirus Taqman Real-Time RT-PCR assay for the detection of highly variable rabies virus and other lyssaviruses.</a> PLoS Negl Trop Dis. 11 (1), e0005258(2017).</li>
<li>Gigante, C. M., Wicker, V., Wilkins, K., Seiders, M., Zhao, H., Patel, P., Orciari, L., Condori, R. E., Dettinger, L., Yager, P., Xia, D., Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+pan-lyssavirus+LN34+assay+for+streamlined+rabies+diagnostics+by+real-time+RT-PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Virological+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimization of pan-lyssavirus LN34 assay for streamlined rabies diagnostics by real-time RT-PCR.</a> Journal Virological Methods. , In press (2024).</li>
<li>Rao, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+modified+preexposure+prophylaxis+vaccination+schedule+to+prevent+human+rabies%3A+recommendations+of+the+advisory+committee+on+immunization+practices-United+States%2C+2022%5BTitle%5D)+AND+%22Morbidity+and+Mortality+Weekly+Report%22%5BJournal%5D)">Use of a modified preexposure prophylaxis vaccination schedule to prevent human rabies: recommendations of the advisory committee on immunization practices-United States, 2022.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 71 (18), 619(2022).</li>
<li>Condori, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+the+LN34+Pan-Lyssavirus+Real-Time+RT-PCR+assay+for+rabies+diagnosis+and+rapid+genetic+typing+from+formalin-fixed+human+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Using the LN34 Pan-Lyssavirus Real-Time RT-PCR assay for rabies diagnosis and rapid genetic typing from formalin-fixed human brain tissue.</a> Viruses. 12 (1), 120(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>7500 Rapide</td><td>Biosystèmes appliqués</td><td>N/A</td><td>Ne pas substituer sans validation</td></tr><tr><td>7500 Fast Dx&nbsp ;</td><td>Biosystèmes appliqués</td><td>N/A</td><td>Ne pas substituer sans validation</td></tr><tr><td>ABI ViiA 7</td><td>Biosystèmes appliqués</td><td>N/A</td><td>Ne pas substituer sans validation</td></tr><tr><td>Kit RT-PCR One-Step AgPath-ID &nbsp ;</td><td>ThermoFisher Scientific & nbsp ;</td><td>AM1005</td><td>Ne pas substituer sans validation</td></tr><tr><td>Beadbug6</td><td>Benchmark Scientific</td><td>D1036</td><td></td></tr><tr><td>Kit Direct-zol RNA MiniPrep &nbsp ;</td><td>Zymo Research</td><td>R2052</td><td></td></tr><tr><td>Perles vertes MagNA Lyser &nbsp ;</td><td>Roche</td><td>3358941001</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifugeuse</td><td>Eppendorf&nbsp ;</td><td>5425 R</td><td></td></tr><tr><td>Plaques de réaction optiques à 96 puits</td><td>ThermoFisher Scientific & nbsp ;</td><td>4346907</td><td></td></tr><tr><td>Caches adhésifs optiques</td><td>ThermoFisher Scientific & nbsp ;</td><td>4311971</td><td>Alternative : les capsules</td></tr><tr><td>Applicateur à extrémité de fibres de polyester & nbsp ;</td><td>Écouvillon d’application BD BBL en polyester à pointe de fibre</td><td>220690</td><td></td></tr><tr><td>QuantStudio 6Flex</td><td>Biosystèmes appliqués</td><td>4485691</td><td>Ne pas substituer sans validation</td></tr><tr><td>Désinfectant à l’ammonium quaternaire (1:256)</td><td>LYSOL</td><td>WBB56939</td><td>Ne pas substituer sans validation</td></tr><tr><td>RNase AWAY</td><td>ThermoFisher Scientific & nbsp ;</td><td>7002PK</td><td></td></tr><tr><td>RNaseZap</td><td>ThermoFisher Scientific & nbsp ;</td><td>AM9780</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel à usage unique, un scalpel avec un mécanisme de sécurité &nbsp ;</td><td>Integra Miltex&nbsp ;</td><td>4-510</td><td></td></tr><tr><td>Tubes microcentrifuges stériles en polyproylène (1,5 mL), sans nucléase</td><td>Sarstedt</td><td>72.692.405</td><td></td></tr><tr><td>Tubes microcentrifuges stériles en polyproylène (2 mL), sans nucléase</td><td>Sarstedt</td><td>72.694.600</td><td></td></tr><tr><td>Réactif de Trizol</td><td>ThermoFisher Scientific & nbsp ;</td><td>15596026</td><td>Ne pas substituer sans validation</td></tr></tbody></table>

diagnostic post-mortem de la rage chez les animaux par le test actualisé et multiplexé ln34 real-time reverse transcription-polymerase chain reaction

Postmortem Diagnosis of Rabies in Animals by the Updated, Multiplexed LN34 Real-Time Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction Assay

Diagnostic post-mortem de la rage chez les animaux par le test actualisé et multiplexé LN34 Real-time Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction

Rabies is a fatal zoonotic disease caused by Lyssavirus rabies (RABV) and related negative strand RNA viruses from the Lyssavirus genus (family ...

postmortem-diagnosis-rabies-animals-updated-multiplexed-ln34-real

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JoVE Journal

Biology

Biologie

Le test immunohistochimique rapide direct (DRIT) offre une alternative reconnue par l'Organisation mondiale de la santé animale et de l'Organisation mondiale de la santé (OIE/OMS) au test direct d'anticorps fluorescents (DFA) pour le diagnostic de la rage. Ce test permet des applications sur le terrain qui peuvent être effectuées en environ 1 h sur les impressions cérébrales à l'aide de la microscopie légère.

Surveillance accrue de la rage à l'aide d'un test immunohistochimique rapide direct

Une réaction en chaîne de polymérase de transcription inverse imbriquée de Pan-lyssavirus a été développée pour détecter spécifiquement tous les lyssavirus connus. La validation à l’aide d’échantillons de cerveau de la rage de différentes espèces animales a montré que cette méthode a une sensibilité et une spécificité équivalentes au test d’anticorps fluorescent étalon-or et pourrait être utilisée pour le diagnostic systématique de la rage.

Évaluation d’une réaction en chaîne de polymérase de transcription inverse imbriquée universelle pour la détection des lyssavirus

L'objectif de ce protocole est de démontrer des techniques d'autopsie sûres chez les petits et grands animaux afin d'obtenir des échantillons de tissus satisfaisants pour les tests de dépistage de la rage.

Techniques d'autopsie de la rage chez les grands et les petits animaux

Ce RT-PCR en temps réel utilisant le colorant intercalateur de dsDNA est approprié pour diagnostiquer des infections de lyssavirus. La méthode commence par l'ARN extrait d'échantillons pré-mortem ou post-mortem soupçonnés de rage, détaillant la préparation du mélange maître, l'ajout d'ARN, la configuration de la machine en temps réel et l'interprétation correcte des résultats.

Pan-lyssavirus en temps réel RT-PCR pour le diagnostic de la rage

Nous présentons un protocole complet pour le diagnostic post mortem de la rage animale dans des conditions de terrain utilisant un essai immunochromagraphic rapide de diagnostic (RIDT), de l’échantillonnage de biopsie de cerveau à l’interprétation finale. Nous décrivons également d’autres applications utilisant le dispositif pour l’analyse moléculaire et le génotypage viral.

Test de diagnostic immunochromatographique rapide sur le terrain postmortem pour les paramètres limités par les ressources avec d’autres applications moléculaires

Nous présentons ici un protocole de test d’immunohistochimie pour la détection de l’antigène du virus de la rage en tant que test de diagnostic alternatif pour les tissus fixés au for formel.

Test d’immunohistochimie pour la détection de l’antigène du lyssavirus à partir de tissus fixés au for formel

Ce protocole présente une approche basée sur qRT-PCR pour déterminer le numéro de copie de gène de nucléoprotéine de virus de rage (N) dans diverses structures anatomiques de cerveau bovin utilisant la transcription in vitro.

Quantitation du virus de la rage dans diverses structures cérébrales bovines

Les analyses qPCR Solaris expression des gènes sont de nouveaux pré-conçus qPCR amorce / sonde combinaisons conçues pour simplifier le processus de qPCR sans pour autant sacrifier la spécificité et la robustesse de l'analyse.

Quantitative PCR en temps réel utilisant le Thermo Scientific Solaris qPCR Assay

Quantitative PCR en temps réel (qRT-PCR) est un outil efficace pour diagnostiquer les niveaux d'ARNm dans les tissus des insectes et des stades de développement. Dans ce rapport, nous montrons l'utilisation de qRT-PCR pour déterminer les niveaux d'ARNm dans différents tissus des larves et les stades de développement de l'espèce d'insecte invasif, l'agrile du frêne.

Analyse de l&#39;expression génique dans l&#39;agrile du frêne ( Agrilus planipennis) En utilisant quantitative en temps réel-PCR

PCR a émergé comme une technique courante dans de nombreux laboratoires de biologie moléculaire. Pourvu voici un guide rapide à plusieurs protocoles de PCR classiques. Parce que chaque réaction est une expérience unique, les conditions optimales nécessaires pour générer un produit varie. Comprendre les variables dans une réaction permettra d'améliorer grandement l'efficacité de dépannage, augmentant ainsi les chances d'obtenir le résultat souhaité.

Polymerase Chain Reaction: Protocole Basic Plus Stratégies de dépannage et d&#39;optimisation

Découvrez le protocole LN34 RT-PCR multiplex pour le diagnostic post-mortem de la rage animale. Cette méthode améliore la sensibilité et réduit les coûts par échantillon testé.

Diagnostic post-mortem de la rage chez les animaux par le test actualisé et multiplexé LN34 Real-time Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction (Vidéo) | JoVE Journal

Diagnostic post-mortem de la rage chez les animaux par le test actualisé et multiplexé LN34 Real-time Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction

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