Name: Mesure de la teneur en carbone dans les macrophages des voies respiratoires exposés à des matières particulaires contenant du carbone (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-12T14:15:00.000+00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Découvrez une méthode non invasive pour mesurer la teneur en carbone dans les macrophages des voies respiratoires, servant de biomarqueur d'exposition aux particules carbonées. Ce protocole améliore la précision des évaluations individuelles.

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<meta charset="utf8"></head><body>Quantification du carbone dans les macrophages pulmonaires par l’analyse des expectorations induites

<ol><li>Münzel, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+stressors+and+cardio-metabolic+disease%3A+part+I-epidemiologic+evidence+supporting+a+role+for+noise+and+air+pollution+and+effects+of+mitigation+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J%22%5BJournal%5D)">Environmental stressors and cardio-metabolic disease: part I-epidemiologic evidence supporting a role for noise and air pollution and effects of mitigation strategies.</a> Eur Heart J. 38 (8), 550-556 (2017).</li>
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<li>Bai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+DNA+content+in+blood+and+carbon+load+in+airway+macrophages.+A+panel+study+in+elderly+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Int%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial DNA content in blood and carbon load in airway macrophages. A panel study in elderly subjects.</a> Environ Int. 119, 47-53 (2018).</li>
<li>Jary, H., Rylance, J., Patel, L., Gordon, S. B., Mortimer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+methods+for+the+analysis+of+airway+macrophage+particulate+load+from+induced+sputum%2C+a+potential+biomarker+of+air+pollution+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Pulm+Med%22%5BJournal%5D)">Comparison of methods for the analysis of airway macrophage particulate load from induced sputum, a potential biomarker of air pollution exposure.</a> BMC Pulm Med. 15, 1-9 (2015).</li>
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<li>Dai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+occupational+exposure+to+carbon+black+on+peripheral+white+blood+cell+counts+and+lymphocyte+subsets%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Mol+Mutagen%22%5BJournal%5D)">Effects of occupational exposure to carbon black on peripheral white blood cell counts and lymphocyte subsets.</a> Environ Mol Mutagen. 57 (8), 615-622 (2016).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Pailles stériles de 3 mL</td><td>Shanghai YEASEN Biotechnology Co., LTD</td><td>84202ES03</td><td></td></tr><tr><td>Tube à centrifuger de 50 mL</td><td>Thermo Fisher Scientific, États-Unis</td><td>339652</td><td></td></tr><tr><td>Alcool éthylique absolu</td><td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co.</td><td>LTD 64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>Huile de cèdre</td><td>Shanghai McLean Biochemical Technology Co., LTD</td><td>C805296</td><td></td></tr><tr><td>Coloration rapide solution</td><td>Shanghai YEASEN Biotechnology Co., LTD</td><td>40748ES76</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol</td><td>Solebo Bio Co., LTD</td><td>D8220</td><td></td></tr><tr><td>Tampon phosphate de Duchenne (DPBS)</td><td>Thermo Fisher Scientific, USA</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>Caméra microscope</td><td>Olympus Corporation of Japan</td><td>DP72</td><td></td></tr><tr><td>Gommier d’arbre neutre</td><td>Solebo Bio Co., LTD</td><td>G8590</td><td></td></tr><tr><td>Membrane filtrante en nylon 70um</td><td>BD Falcon Bioscience, États-Unis</td><td>211755</td><td></td></tr><tr><td>Microscope optique</td><td>Olympus Corporation of Japan</td><td>BX60</td><td></td></tr><tr><td>Polyéthylène glycol</td><td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LTD</td><td>25322-68-3</td><td></td></tr><tr><td>Ultracentrifugeuse</td><td>Thermo Fisher Scientific, USA</td><td>SL40R</td><td></td></tr><tr><td>Lame visqueuse</td><td>Jiangsu SHitAI EXPERIMENTAL Equipment Co. LTD</td><td></td><td></td>188105</tr></tbody></table>

mesure de la teneur en carbone dans les macrophages des voies respiratoires exposés à des matières particulaires contenant du carbone

Measuring Carbon Content in Airway Macrophages Exposed to Carbon-Containing Particulate Matters

Les expectorations, conservées et traitées avec la solution fixatrice, ont montré la morphologie intacte des macrophages au microscope optique lors de l’examen morphologique. Les macrophages présentaient des noyaux cellulaires clairs, ronds ou en forme de rein, facilement colorables. Après la coloration, les noyaux cellulaires sont apparus bleu-violet, tandis que le cytoplasme était rose clair ou bleu clair. Le champ microscopique a montré des impuretés minimales, ce qui a facilité l’identification des cellules. À l’intérieur des cellules, les particules de carbone noir étaient clairement visibles en petits agrégats, ce qui a permis une analyse quantitative des particules de carbone.
Des images représentatives des macrophages d’expectoration sont présentées à la figure 1, représentant un nombre variable de particules de carbone dans différentes cellules. Par exemple, la figure 1A ne montre aucune particule de carbone, tandis que la figure 1D montre la concentration la plus élevée. Les valeurs de CCAM ont été mesurées à 0,00 %, 2,24 %, 6,64 % et 34,61 % pour les macrophages (A-D), respectivement. Au cours du processus de détermination des paramètres CCAM, une évaluation quantitative de la teneur en carbone de chaque macrophage a été réalisée afin d’atténuer les biais résultant des variations de la taille des macrophages et du chevauchement des particules de carbone avec les noyaux cellulaires. Le calcul et l’analyse de la CCAM ont été effectués pour 50 macrophages par sujet d’étude, comme le montre la figure 2.
L’étude a sélectionné des emballeurs de noir de carbone (CBP) d’une usine spécifique de noir de carbone acétylène comme groupe exposé et a recruté des travailleurs de pompes à eau provenant d’usines de traitement des eaux locales, qui n’avaient apparemment pas d’exposition professionnelle à des facteurs nocifs, comme groupe témoin (non-CBP). Les résultats présentés à la figure 2 indiquent un CCAM plus élevé chez les travailleurs de l’emballage de noir de carbone par rapport au groupe témoin.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66781/66781fig01.jpg"> 
Figure 1 : Image microscopique optique montrant des particules de carbone dans les macrophages des voies respiratoires. La couleur noire du cytoplasme représente les particules de carbone. Les panneaux (A-D) représentent des images représentatives des macrophages des voies respiratoires, chacun présentant des niveaux variables de CCAM. Les valeurs CCAM pour les macrophages dans (A-D) étaient respectivement de 0,00 %, 2,24 %, 6,64 % et 34,61 %. Le niveau le plus élevé de CCAM a été observé en (D). Barres d’échelle : 10 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66781/66781fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66781/66781fig02.jpg"> 
Figure 2 : Niveaux quantitatifs de CCAM dans la population. Cinquante macrophages cytoplasmiquement intacts et bien colorés ont été sélectionnés au hasard pour l’analyse et la quantification par sujet d’étude. Les données ont été analysées à l’aide du test t de Student : *P &lt; 0,05. CBP : emballeurs de noir de carbone ; Non-CBP : groupe témoin. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66781/66781fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>

Mesure de la teneur en carbone dans les macrophages des voies respiratoires exposés à des matières particulaires contenant du carbone

Pulmonary macrophages exhibit a dose-dependent pattern in phagocytizing particles. Following engulfment, these macrophages are subsequently excreted with ...

measuring-carbon-content-airway-macrophages-exposed-to-carbon

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Cellules épithéliales pulmonaires peuvent être isolés par les voies respiratoires des souris et cultivés à interface air-liquide comme un modèle de l'épithélium respiratoire différencié. Un protocole est décrit pour l'isolement, la culture et d'exposer ces cellules à la fumée de cigarette dominante, afin d'étudier les réponses moléculaires à cette toxine de l'environnement.

L&#39;isolement de la souris les cellules épithéliales respiratoires et l&#39;exposition à la fumée de cigarette expérimentale chez Air interface liquide

Ici, nous décrivons les protocoles pour la récolte des macrophages alvéolaires murins, qui sont des résidents cellules immunitaires innées dans le poumon, et en examinant leur activation en réponse à la co-culture avec des nanoparticules polyanhydride.

La récolte macrophages alvéolaires murins et l&#39;évaluation d&#39;activation cellulaire induite par des nanoparticules polyanhydride

Cette vidéo démontre l’immunomarquage des pièges extracellulaires de macrophages, METs, dans les macrophages broncho-alvéolaires à partir de liquide de lavage broncho-alvéolaire, et leur visualisation à l’aide d’un microscope confocal.

Visualisation de pièges extracellulaires dans les macrophages à partir de fluides de lavage broncho-alvéolaire humain

Une méthode pour évaluer la capacité des macrophages alvéolaires isolés de la souris pour contrôler la croissance des spores d'Aspergillus phagocytées par microscopie confocale.

Évaluation de l&#39;activité anti-fongique isolé macrophages alvéolaires par microscopie confocale

L’objectif de ce protocole est de fournir des méthodes automatisées pour quantifier les pathologies pulmonaires chroniques dans un modèle murin de BPCO. Le protocole comprend l’exposition de souris à la fumée de cigarette (CS), la mesure de la fonction pulmonaire, le gonflement des poumons et l’utilisation de méthodes de morphométrie pour mesurer l’emphysème et le remodelage des petites voies respiratoires chez la souris.

Mesure automatisée de l&#39;emphysème pulmonaire et petites remodelage des voies aériennes dans la cigarette de fumée souris exposées

Ce protocole décrit des techniques pour la quantification et la caractérisation des aberrations chromosomiques in vitro dans les macrophages murins RAW264.7 après le traitement avec la matière particulaire de l' air ambiant.

Analyse de la Aberrations chromosomiques Ambient particules induite par l&#39;aide d&#39;un<em&gt; In vitro</em&gt; système

Macrophage pièges extracellulaires sont une entité nouvellement décrite. Cet article se concentre sur les méthodes de microscopie confocale et comment elles sont visualisées in vitro et in vivo des échantillons pulmonaires.

Visualisation des pièges extracellulaires de Macrophage à l’aide de la microscopie confocale

Nous décrivons une méthode pour traiter le liquide de lavage bronchoalveolar et le sang périphérique assorti des individus chroniquement HIV-infectés sur la thérapie antirétrovirale pour évaluer les réservoirs pulmonaires de HIV. Ces méthodes ont comme conséquence l'acquisition des cellules T cD4 très pures et des macrophages alvéolaires qui peuvent plus tard être employés pour l'immunophénotypage et les quantifications d'ADN/ARN de HIV par réaction en chaîne ultrasensible de polymérase.

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Évaluation in vivo de l'efférocytose du macrophage alvéolif après l'exposition à l'ozone

Décrit est la culture cellulaire et la méthode d’exposition d’un modèle bronchique in vitro pour l’exposition réaliste et répétée par inhalation aux particules pour l’essai de toxicité.

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Mesure de la teneur en carbone dans les macrophages des voies respiratoires exposés à des matières particulaires contenant du carbone (Vidéo) | JoVE Journal

Mesure de la teneur en carbone dans les macrophages des voies respiratoires exposés à des matières particulaires contenant du carbone

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