Name: Récolte, intégration et culture de ganglions de la racine dorsale dans des dispositifs à compartiments multiples pour étudier les caractéristiques neuronales périphériques (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-28T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 56 s
Description: Découvrez la culture de ganglions de la racine dorsale de rats Sprague Dawley dans un dispositif à compartiments multiples. Cette méthode permet d'étudier l'hypersensibilité des nocicepteurs et de développer des traitements ciblés contre la douleur chronique.

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Ce travail a été soutenu par une subvention de la NSF (2152065) et une bourse NSF CAREER (1846857). Les auteurs tiennent à remercier tous les membres actuels et passés du Wachs Lab pour leur contribution à ce protocole. Les diagrammes de la figure 1 ont été réalisés dans Biorender.

Modèle in vitro avancé pour l’étude de l’hypersensibilité neuronale dans les cultures DRG

<ol><li>Vos, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global%2C+regional%2C+and+national+incidence%2C+prevalence%2C+and+years+lived+with+disability+for+310+diseases+and+injuries%2C+1990-2015%3A+A+systematic+analysis+for+the+global+burden+of+disease+study+2015%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Global, regional, and national incidence, prevalence, and years lived with disability for 310 diseases and injuries, 1990-2015: A systematic analysis for the global burden of disease study 2015.</a> Lancet. 388 (10053), 1545-1602 (2016).</li>
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<li>Kim, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coupled+activation+of+primary+sensory+neurons+contributes+to+chronic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Coupled activation of primary sensory neurons contributes to chronic pain.</a> Neuron. 91 (5), 1085-1096 (2016).</li>
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<li>Mohammed Izham, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploring+the+possibilities+of+using+in+vitro+model+for+neuropathic+pain+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Res+Notes%22%5BJournal%5D)">Exploring the possibilities of using in vitro model for neuropathic pain studies.</a> Neurosci Res Notes. 5, 144(2022).</li>
<li>Park, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+three-dimensional+in+vitro+model+of+the+peripheral+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22NPG+Asia+Mater%22%5BJournal%5D)">A three-dimensional in vitro model of the peripheral nervous system.</a> NPG Asia Mater. 13 (1), 2(2021).</li>
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<li>Krug, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+a+human+neurite+growth+assay+as+specific+screen+for+developmental+neurotoxicants%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of a human neurite growth assay as specific screen for developmental neurotoxicants.</a> Arch Toxicol. 87 (12), 2215-2231 (2013).</li>
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<li>Zhu, W., Oxford, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+gene+expression+of+neonatal+and+adult+DRG+neurons+correlates+with+the+differential+sensitization+of+TRPV1+responses+to+nerve+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Differential gene expression of neonatal and adult DRG neurons correlates with the differential sensitization of TRPV1 responses to nerve growth factor.</a> Neurosci Lett. 500 (3), 192-196 (2011).</li>
<li>Van De Wijdeven, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structuring+a+multi-nodal+neural+network+in+vitro+within+a+novel+design+microfluidic+chip%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Microdevices%22%5BJournal%5D)">Structuring a multi-nodal neural network in vitro within a novel design microfluidic chip.</a> Biomed Microdevices. 20, 1-8 (2018).</li>
<li>Chan, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NGF+controls+axonal+receptivity+to+myelination+by+Schwann+cells+or+oligodendrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">NGF controls axonal receptivity to myelination by Schwann cells or oligodendrocytes.</a> Neuron. 43 (2), 183-191 (2004).</li>
<li>Ng, B. K., Chen, L., Mandemakers, W., Cosgaya, J. M., Chan, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterograde+transport+and+secretion+of+brain-derived+neurotrophic+factor+along+sensory+axons+promote+Schwann+cell+myelination%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Anterograde transport and secretion of brain-derived neurotrophic factor along sensory axons promote Schwann cell myelination.</a> J Neurosci. 27 (28), 7597-7603 (2007).</li>
<li>Xiao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BDNF+exerts+contrasting+effects+on+peripheral+myelination+of+NGF-dependent+and+BDNF-dependent+drg+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">BDNF exerts contrasting effects on peripheral myelination of NGF-dependent and BDNF-dependent drg neurons.</a> J Neurosci. 29 (13), 4016-4022 (2009).</li>
<li>Seidlits, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+hyaluronic+acid+hydrogels+with+tunable+mechanical+properties+on+neural+progenitor+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The effects of hyaluronic acid hydrogels with tunable mechanical properties on neural progenitor cell differentiation.</a> Biomaterials. 31 (14), 3930-3940 (2010).</li>
<li>Tomal, W., Ortyl, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Water-soluble+photoinitiators+in+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Polymers%22%5BJournal%5D)">Water-soluble photoinitiators in biomedical applications.</a> Polymers. 12 (5), 1073(2020).</li>
<li>Leary, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Avma+guidelines+for+the+euthanasia+of+animals%3A+2013+edition%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">Avma guidelines for the euthanasia of animals: 2013 edition.</a> Veterinary Medical Association. , Schaumburg, Illinois. (2013).</li>
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<li>Naveed, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+methods+of+dissection+protocols+for+the+rapid+isolation+of+rat+dorsal+root+ganglia+under+the+non-microscopic+condition%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Research+Notes%22%5BJournal%5D)">Simple methods of dissection protocols for the rapid isolation of rat dorsal root ganglia under the non-microscopic condition.</a> Neuroscience Research Notes. 6 (2), 212(2023).</li>
<li>Perner, C., Sokol, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+for+dissection+and+culture+of+murine+dorsal+root+ganglia+neurons+to+study+neuropeptide+release%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protocols%22%5BJournal%5D)">Protocol for dissection and culture of murine dorsal root ganglia neurons to study neuropeptide release.</a> STAR Protocols. 2 (1), 100333(2021).</li>
<li>Bai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-resolution+anatomical+rat+atlas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anatomy%22%5BJournal%5D)">A high-resolution anatomical rat atlas.</a> J Anatomy. 209 (5), 707-708 (2006).</li>
<li>Bian, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+hyaluronic+acid+hydrogel+crosslinking+density+and+macromolecular+diffusivity+on+human+MSC+chondrogenesis+and+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The influence of hyaluronic acid hydrogel crosslinking density and macromolecular diffusivity on human MSC chondrogenesis and hypertrophy.</a> Biomaterials. 34 (2), 413-421 (2013).</li>
<li>Haberberger, R. V., Barry, C., Dominguez, N., Matusica, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+dorsal+root+ganglia%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Human dorsal root ganglia.</a> Front Cell Neurosci. 13, 271(2019).</li>
<li>Schwaid, A. G., Krasowka-Zoladek, A., Chi, A., Cornella-Taracido, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+rat+and+human+dorsal+root+ganglion+proteome%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Rep%22%5BJournal%5D)">Comparison of the rat and human dorsal root ganglion proteome.</a> Scientific Rep. 8 (1), 13469(2018).</li>
</ol>

Les auteurs de cette étude déclarent qu’ils n’ont pas de conflit d’intérêts.

Ce protocole décrit une méthode pour récolter les Drg adultes de Sprague Dawley et les cultiver dans des hydrogels naturels en 3D. Contrairement à cette méthode, d’autres approches de récolte des DRG chez les souris et les rats impliquent l’isolement de la colonne vertébrale. La colonne vertébrale excisée est coupée en deux et la moelle épinière est retirée pour exposer les DRG23, 24, 25. Les lésions de la moelle épinière limite...

La douleur chronique est la principale cause d’invalidité et de perte d’emploi dans le monde1. La douleur chronique touche environ 20 % des adultes dans le monde et impose un fardeau sociétal et économique important2, avec des coûts totaux estimés entre 560 et 635 milliards de dollars chaque année aux États-Unis3.
La principale caractéristique périphérique présentée par les patients souffrant de douleurs chroniques est un seuil de stimulation abaissé des nerfs, ce qui conduit le système nerveux à être plus réactif aux stimuli 4,5. L’abaissement du seuil de stimulation peut entraîner une réponse douloureuse à un stimulus auparavant non douloureux (allodynie) ou une réponse accrue à un stimulus douloureux (hyperalgésie)6. Les traitements actuels de la douleur chronique ont une efficacité limitée, et les traitements qui réussissent sur des modèles animaux échouent souvent dans les essais humains en raison de différences mécanistes dans la manifestation de la douleur7. Les modèles in vitro qui peuvent imiter plus précisément les mécanismes de sensibilisation périphérique ont le potentiel d’augmenter la traduction de nouvelles thérapies 8,9. De plus, en modélisant les aspects clés des nerfs sensibilisés dans un système de culture, les chercheurs pourraient développer une compréhension plus profonde des mécanismes qui entraînent l’abaissement des seuils et identifier de nouvelles cibles thérapeutiques qui les inversent10.
Les plateformes in vitro ou les systèmes microphysiologiques idéaux incorporeraient la séparation physique des neurites distaux et du corps cellulaire des ganglions de la racine dorsale (DRG), un environnement cellulaire tridimensionnel (3D) et la présence de cellules de soutien natives pour imiter étroitement les conditions in vivo . Cependant, un article récent de Caparaso et al.11 montre que les plateformes actuelles de culture de DRG manquent d’une ou plusieurs de ces caractéristiques clés, ce qui les rend insuffisantes pour reproduire des conditions in vivo . Même si ces plateformes sont faciles à mettre en place, elles n’imitent pas la base biologique de la sensibilisation périphérique et peuvent donc ne pas se traduire par une efficacité in vivo . Pour remédier à cette limitation, un modèle in vitro physiologiquement pertinent a été développé pour la culture de ganglions de la racine dorsale (DRG) dans une matrice d’hydrogel avec trois compartiments isolés pour permettre l’isolement fluidique temporel des neurites et des corps cellulaires DRG11. Ce modèle offre une pertinence à la fois physiologique et anatomique, ce qui a le potentiel d’étudier la sensibilisation périphérique des neurones in vitro.
L’intérêt croissant pour l’utilisation des explants de DRG dans une culture 3D est dû à leur capacité à faciliter la croissance robuste des neurites, qui sert d’indicateur indirect de la viabilité des DRG12. Alors que les explants primaires de DRG néonatals ou embryonnaires sont principalement utilisés dans les plateformes de culture in vitro actuelles13,14, l’utilisation d’explants de rongeurs adultes fournit un meilleur modèle de la physiologie neuronale mature, qui imite étroitement la physiologie humaine des DRG par rapport aux explants de rongeurs néonatals ou embryonnaires15. Les DRG explant font référence à la préservation du tissu cellulaire et moléculaire du tissu DRG natif, principalement en maintenant les cellules de soutien non neuronales natives. Le présent protocole décrit la méthodologie de récolte et de culture des explants de DRG de rats Sprague Dawley adultes dans un dispositif à compartiments multiples (figure 1).
L’efficacité a été démontrée dans la culture de DRG à partir de la colonne cervicale, thoracique et lombaire, sans aucune différence observable dans la croissance des neurites. Pour cette application, l’objectif était de provoquer la croissance de neurites dans les compartiments extérieurs du dispositif ; par conséquent, cet article n’a pas fait de distinction entre les niveaux de DRG. Cependant, si nécessaire pour une expérience spécifique, le niveau DRG peut être adapté pour répondre aux besoins des expérimentateurs. Il existe actuellement d’autres modèles de culture compartimentée pour la culture 3D des DRG16, cependant, ces dispositifs ne contiennent pas de cellules de support non neuronales natives préservées, ce qui peut limiter la traduction. La préservation de la structure native des DRG récoltés est importante car elle assure la rétention des cellules de soutien non neuronales, dont les interactions avec les neurones DRG sont essentielles pour maintenir les propriétés fonctionnelles de ces neurones. Plusieurs études ont co-cultivé des DRG dissociés avec des cellules neuronales non natives telles que les cellules de Schwann pour favoriser la myélinisation des neurones 17,18,19.

<table><tbody><tr><td>#5 pince</td><td>Outils de science fine</td><td>11252-00</td><td>Pour tailler et couper DRG</td></tr><tr><td>10x DMEM</td><td>MilliporeSigma</td><td>D2429</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS (autoclavé)</td><td>Préparé en laboratoire</td><td></td><td>7,3 - 7,5 pH</td></tr><tr><td>24 plaques de puits</td><td>VWR</td><td>82050-892</td><td>Pour stocker temporairement les DRG récoltés et coupés</td></tr><tr><td>Seringue stérile, à usage unique</td><td>BD</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>48 plaques de puits</td><td>Greiner Bio-One</td><td>677180</td><td></td></tr><tr><td>60 mm Boîte de Pétri</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875713A</td><td>Pour maintenir les supports pour le rognage et la coupe</td></tr><tr><td>Feuille d’aluminium</td><td>Fisherbrand</td><td>01-213-104</td><td></td></tr><tr><td>B27 Plus 50x</td><td>ThermoFisher</td><td>17504044</td><td>Pour supports DRG</td></tr><tr><td>Collagène type I</td><td>Ibidi</td><td>50205</td><td></td></tr><tr><td>Courbé tasse Friedman Pearson Rongeur</td><td>Fine Science Tools</td><td>16221-14</td><td>Pour la dissection</td></tr><tr><td>Pince Dumont #3</td><td>Outils de science fine</td><td>11293-00</td><td>Pour la dissection</td></tr><tr><td>Sérum de veau fœtal (FBS)</td><td>ThermoFisher</td><td>16000044</td><td>Pour le média DRG</td></tr><tr><td>Form cure</td><td>Form Labs</td><td>Agent de durcissement</td>Form wash Form Labs <td></td></tr><tr><td></td><td>Pour laver l’excès de résines</td><td></td><td></td> du MC</tr><tr><td>Stérilisateur à billes de verre</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9531961</td><td></td></tr><tr><td>Flacons en verre (8 mL)</td><td>DWK Life Sciences (Wheaton)</td><td>224724</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMax</td><td>ThermoFisher</td><td>35050-061</td><td>Pour média DRG</td></tr><tr><td>HEPES (1M)</td><td>Millipore Sigma</td><td>H0887</td><td></td></tr><tr><td>Haute température V2 Résine</td><td>FormLabs</td><td>FLHTAM02</td><td></td></tr><tr><td>Acide hyaluronique Sel de sodium</td><td>MilliporeSigma</td><td>53747</td><td>Utilisé pour fabriquer MAHA</td></tr><tr><td>Irgacure</td><td>MilliporeSigma</td><td>410896</td><td></td></tr><tr><td>Laminin</td><td>R& D Systems</td><td>344600501</td><td></td></tr><tr><td>Grands ciseaux à bec émoussé</td><td>Militex</td><td>EG5-26</td><td>Pour la dissection</td></tr><tr><td>Grandes pinces (pointes dentelées)</td><td>Militex</td><td>9538797</td><td>Pour la dissection</td></tr><tr><td>Grands ciseaux à bec pointu</td><td>Outils de science fine</td><td>14010-15</td><td>Pour la dissection</td></tr><tr><td>Pointes de pipette à faible rétention</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-707-017</td><td>Pour le pipetage du collagène et MAHA</td></tr><tr><td>Acide hyaluronique méthacrylé (MAHA)</td><td>Préparé en laboratoire</td><td>N/A</td><td>85 - 115 % méthacrylation</td></tr><tr><td>Facteur de croissance nerveuse (NGF)</td><td>R& D Systems</td><td>556-NG-100</td><td>Pour les médias DRG</td></tr><tr><td>Neurobasal A Media</td><td>ThermoFisher</td><td>10888022</td><td>Pour les médias DRG</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM996</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM996</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline/Streptomycine (PS)</td><td>EMD Millipore</td><td>516106</td><td>Pour les médias DRG</td></tr><tr><td>Bandelettes de test de pH</td><td>VWR International</td><td>BDH35309.606</td><td></td></tr><tr><td>Pointes de pipette (1000 & micro ; L)</td><td>USA Scientific</td><td>1111-2021</td><td></td></tr><tr><td>Preform 3.23.1 software</td><td>Formslab</td><td></td><td>Pour télécharger le fichier STL</td></tr><tr><td>Rat</td><td>Charles River</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Résine Imprimante 3D</td><td>Form</td><td>Labs Form 3L</td><td>Impression 3D MC Dispositif</td></tr><tr><td>Petits ciseaux à bec pointu</td><td>Outils de sciences fines</td><td>14094-11</td><td>Pour la dissection</td></tr><tr><td>Bicarbonate</td> <td>de sodiumMilliporeSigma</td><td>S6014</td><td></td></tr><tr><td>Rongeur à coupelle droite</td><td>Fine Science Tools</td><td>16004-16</td><td>Pour la dissection</td></tr><tr><td>Ciseaux à ressort à bord droit</td><td>Outils pour les sciences fines</td><td>15024-10</td><td>Pour la dissection</td></tr><tr><td>Lame chirurgicale Scaplel (N° 10)</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-079-690</td><td></td></tr><tr><td>Filtres à seringue, PES (0.22 &micro ; m)</td><td>Celltreat</td><td>229747</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux à ressort minuscules</td><td>World Precision Instruments</td><td>14003</td><td>Pour la coupe et la coupe</td></tr><tr><td>Lampe UV</td> DRG <td>Analytik Jena US</td><td></td><td>Pour photocrosslink hydrogel (15 - 18 mW/cm2)</td></tr></tbody></table>

récolte, intégration et culture de ganglions de la racine dorsale dans des dispositifs à compartiments multiples pour étudier les caractéristiques neuronales périphériques

Harvesting, Embedding, and Culturing Dorsal Root Ganglia in Multi-compartment Devices to Study Peripheral Neuronal Features

La caractéristique neuronale périphérique la plus courante de la douleur est un seuil de stimulation abaissé ou une hypersensibilité des nerfs terminaux des ganglions de la racine dorsale (DRG). L’une des causes proposées de cette hypersensibilité est associée à l’interaction entre les cellules immunitaires du tissu périphérique et les neurones. Les modèles in vitro ont fourni des connaissances fondamentales pour comprendre comment ces mécanismes entraînent une hypersensibilité des nocicepteurs. Cependant, les modèles in vitro sont confrontés au défi de traduire l’efficacité chez l’homme. Pour relever ce défi, un modèle in vitro pertinent sur le plan physiologique et anatomique a été développé pour la culture de ganglions de la racine dorsale intacts (DRG) dans trois compartiments isolés d’une plaque de 48 puits. Les DRG primaires sont récoltés sur des rats Sprague Dawley adultes après euthanasie sans cruauté. Les racines nerveuses en excès sont coupées et le DRG est coupé à des tailles appropriées pour la culture. Les DRG sont ensuite cultivés dans des hydrogels naturels, ce qui permet une croissance robuste dans tous les compartiments. Ce système multi-compartiments offre une isolation anatomiquement pertinente des corps cellulaires DRG à partir des neurites, des types de cellules physiologiquement pertinents et des propriétés mécaniques pour étudier les interactions entre les cellules neurales et immunitaires. Ainsi, cette plateforme de culture fournit un outil précieux pour étudier les stratégies d’isolement du traitement, conduisant finalement à une meilleure approche de dépistage pour prédire la douleur.

Le présent protocole décrit une technique de récolte et de culture de DRG sur des rats Sprague Dawley adultes dans un dispositif à compartiments multiples (MC). Comme le montre la figure 1, le DRG récolté sur des rats adultes a été taillé et coupé en ~0,5 mm. Les DRG coupés et coupés ont ensuite été intégrés dans un hydrogel dans la région soma du dispositif MC (Figure 2) et cultivés pendant 27 jours avant la quantification des neurites. Le DRG ...

Ce protocole fournit une technique pour récolter et cultiver le ganglion de la racine dorsale (DRG) explanté de rats Sprague Dawley adultes dans un dispositif à compartiments multiples (MC).

Récolte, intégration et culture de ganglions de la racine dorsale dans des dispositifs à compartiments multiples pour étudier les caractéristiques neuronales périphériques

The most common peripheral neuronal feature of pain is a lowered stimulation threshold or hypersensitivity of terminal nerves from the dorsal root ganglia ...

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Nous décrivons ici la technique de la préparation et l'entretien des chambres compartimentées pour les neurones sensoriels en culture des ganglions de la racine dorsale.

Préparation et entretien des neurones ganglions de la racine dorsale dans les cultures à compartiments

Étude génétique de la régénération des axones avec cultivées adultes dorsaux neurones ganglion de la racine

Dans cette vidéo, nous démontrons l’extraction du ganglion de la racine dorsale ou DRG d’une épine de rat récoltée pour des applications en aval.

Récolte de DRG à partir de la colonne vertébrale du rat : une procédure pour extraire le ganglion de la racine dorsale de la colonne vertébrale d’un modèle de rat

Cette vidéo montre une procédure permettant d’isoler les neurones du ganglion de la racine dorsale (DRG) à partir d’embryons de rats et de les co-cultiver avec des précurseurs de cellules de Schwann pour générer des cellules de Schwann matures. Les DRG isolés sont traités pour isoler les neurones et les cellules gliales. Les cellules isolées sont cultivées pour purifier les neurones, qui sont ensuite co-cultivés avec des cellules de type cellules de Schwann (SCLC) dans un milieu de co-culture.

Isolement de neurones DRG et coculture avec des précurseurs de cellules de Schwann pour générer des cellules de Schwann

Cette vidéo présente une méthode pour développer des ganglions de la racine dorsale ou une culture d’explants DRG et des modèles cellulaires dissociés de DRG à l’aide de tissus DRG de souris isolés. Ces modèles aident à étudier divers mécanismes d’interactions neurones-gliales dans un environnement contrôlé.

Génération d’un explant ganglionnaire racinaire dorsal et d’une culture cellulaire dissociée

Cette vidéo présente une méthode de prélèvement de neurones dans les ganglions de la racine dorsale (DRG). Les DRG de la colonne vertébrale d'un rat sont isolés, traités avec des enzymes, puis dissociés mécaniquement pour obtenir une suspension unicellulaire. Les neurones sont séparés des cellules gliales par centrifugation à gradient de densité et cultivés dans un milieu de croissance.

Technique de prélèvement et de dissociation des ganglions de la racine dorsale pour les cultures neuronales

Ganglions de la racine dorsale (DRG) sont des structures contenant les neurones sensoriels du système nerveux périphérique. Lorsqu'ils sont dissociés, ils peuvent être co-cultivées avec des cellules souches du tissu adipeux SC-like (ASC), fournissant un modèle précieux pour étudier in vitro la régénération nerveuse et la myélinisation, imitant l'environnement in vivo au site de la lésion.

Les ganglions rachidiens neurones et les cellules souches différenciées dérivées de tissu adipeux: Un<em&gt; In Vitro</em&gt; Co-culture modèle pour étudier la régénération des nerfs périphériques

Les cultures primaires (DRG) les ganglions de la racine dorsale sont fréquemment utilisés pour étudier les fonctions physiologiques ou pathologie imprévisibles dans les neurones sensoriels. Ici, nous montrent l’utilisation de cultures DRG lombaires pour détecter la libération de neurotransmetteurs après le type de récepteur de neuropeptide FF 2 stimulation avec un agoniste sélectif.

Isolement des ganglions de la racine dorsale et la Culture primaire afin d’étudier la libération des neurotransmetteurs

Ici, nous présentons un système de culture monocouche mixte ex-vivo pour l'étude de la migration des cellules de gliome humain (hGC) en temps réel. Ce modèle permet d'observer les interactions entre les hGC et les axones myélinisés et non myélinisés dans une chambre compartimentée.

Surveillance en temps réel de la migration cellulaire des gliomes humains sur les co-cultures d'Axon-Oligodendrocyte de Ganglion de racine dorsal

Ce protocole décrit les méthodes d’établissement de cultures entières et dissociées de ganglions de la racine dorsale (DRG) de souris et leur utilisation pour évaluer les interactions tumeur-nerf.

Établissement de modèles in vitro de culture de ganglions de la racine dorsale : approches complémentaires pour l’étude de la diaphonie cancéreux-nerf

Découvrez la culture de ganglions de la racine dorsale de rats Sprague Dawley dans un dispositif à compartiments multiples. Cette méthode permet d'étudier l'hypersensibilité des nocicepteurs et de développer des traitements ciblés contre la douleur chronique.

Récolte, intégration et culture de ganglions de la racine dorsale dans des dispositifs à compartiments multiples pour étudier les caractéristiques neuronales périphériques (Vidéo) | JoVE Journal

Récolte, intégration et culture de ganglions de la racine dorsale dans des dispositifs à compartiments multiples pour étudier les caractéristiques neuronales périphériques

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