Name: Perfusion hépatique de rat et isolement des hépatocytes primaires : une procédure ancienne cruciale pour la culture d’organoïdes 3D de pointe (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-22T13:20:00.000+00:00
Duration: 13 min 9 s
Description: Découvrez la perfusion hépatique chez le rat et l'isolement d'hépatocytes primaires pour créer des organoïdes 3D fonctionnels. Cette méthode optimise la culture longue durée des cellules hépatiques.

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<li>Peng, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+cytokine+TNFalpha+promotes+the+long-term+expansion+of+primary+hepatocytes+in+3D+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Inflammatory cytokine TNFalpha promotes the long-term expansion of primary hepatocytes in 3D culture.</a> Cell. 175 (6), 1607-1619.e15 (2018).</li>
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<li>Queral, A. E., DeAngelo, A. B., Garrett, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+different+collagenases+on+the+isolation+of+viable+hepatocytes+from+rat+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Effect of different collagenases on the isolation of viable hepatocytes from rat liver.</a> Anal Biochem. 138 (1), 235-237 (1984).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>A83-01- Inhibiteur d’ALK5 IV</td><td>Twin Helix</td><td>&nbsp ; T3031</td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>0080085SA</td><td></td></tr><tr><td>CFX Connect Système de détection PCR en temps réel&nbsp ;</td><td>&nbsp ; Bio-Rad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CHIR99021</td><td>Twin Helix</td><td>T2310</td><td></td></tr><tr><td>Click EdU Alexa 488 kit d’imagerie</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>C10499</td><td></td></tr><tr><td>Collagène, Type I, solution de queue de rat</td><td>Merck</td><td>C3867-1VL</td><td></td></tr><tr><td>Dexaméthasone&nbsp ;</td><td>Merck</td><td>D4902</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>Merck</td><td>&nbsp ; E9644</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin (FBS)</td><td>Euroclone</td><td>ECS0180L</td><td></td></tr><tr><td>GELTREX LDEV FREE RGF BME</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>A1413202</td><td></td></tr><tr><td>Héparine Sodique 25000 UI/5 ml</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>B01AB01</td><td></td></tr><tr><td>HGF</td><td>Peprotech</td><td>&nbsp ; 100-39H&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Solution insuline-transferrine-sélénium 100x&nbsp ;</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>41400045</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine solution</td><td>Euroclone</td><td>ECB3000D</td><td></td></tr><tr><td>Liver Digest Medium&nbsp ;</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>&nbsp ; 17703-034</td><td></td></tr><tr><td>Milieu de perfusion hépatique</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>17701038</td><td></td></tr><tr><td>supplément N2</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>N-acétylcystéine</td><td>Merck</td><td>A9165</td><td></td></tr><tr><td>Nicotinamide</td><td>Merck</td><td>&nbsp ; N-0636</td><td></td></tr><tr><td>Acides aminés non essentiels</td><td>Merck</td><td>M7145</td><td></td></tr><tr><td>Normocin</td><td>Aurogene</td><td>ant-nr-1</td><td></td></tr><tr><td>Tampon PBS 1X</td><td>PanReac AppliChem</td><td>A0964,9050</td><td></td></tr><tr><td>Solution de pénicilline-streptomycine 100x</td><td>Euroclone</td><td>ECB3001D</td><td></td></tr><tr><td>Percoll</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-296039A</td><td></td></tr><tr><td>Pompe péristaltique</td><td>Ismatec&commerce ; &nbsp ;</td><td>MS-4/12 Pompe</td><td></td>Numérique Reglo</tr><tr><td>TNFa</td><td>Peprotech</td><td>&nbsp ; 300-01A</td><td></td></tr><tr><td>TRI Réactif</td><td>Merck</td><td>T9424</td><td></td></tr><tr><td>Tube&nbsp ;</td><td>Ismatec&commerce ; &nbsp ;</td><td>&nbsp ; ID.2,79mm</td><td></td></tr><tr><td>Williams' E Medium, sans glutamine</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>31415029</td><td></td></tr><tr><td>Y27632</td><td>Twin Helix</td><td>T1725</td><td></td></tr></tbody></table>

perfusion hépatique de rat et isolement des hépatocytes primaires : une procédure ancienne cruciale pour la culture d’organoïdes 3d de pointe

Rat Liver Perfusion and Primary Hepatocytes Isolation: An Old Procedure Crucial for Cutting-Edge 3D Organoids Culture

À la fin des procédures de mise en place (étape 6.13), nous avons obtenu un rendement cellulaire allant jusqu’à 1 x 108 cellules par isolement à partir du foie d’environ 300 g d’un rat. La viabilité cellulaire entre 78 % et 97 % a été établie par comptage au bleu de trypan.
Comme déjà décrit dans des études précédentes 1,18,19, les hépatocytes primaires en culture perdent leur morphologie, ...

Perfusion hépatique de rat et isolement des hépatocytes primaires : une procédure ancienne cruciale pour la culture d’organoïdes 3D de pointe

Primary hepatocytes are a commonly used tool for in vitro liver-related studies. However, the maintenance of these cells has always been a challenge due ...

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Biologie

Une nouvelle méthode pour obtenir des macrophages de culture primaire de cellules de foie de rat est décrit. Cette méthode utilise la prolifération des macrophages dans la culture, suivie par la secousse de flacons de culture et de la purification par l'attachement sélectif plats en plastique. Cette technique fournit efficacement des macrophages du foie, sans équipement complexe et des compétences.

Une méthode simple et efficace pour isoler les macrophages de mixte cultures primaires de cellules hépatiques adultes

L'étude des cellules endothéliales sinusoïdales du foie (secs) doit être effectuée avec des cellules primaires provenant de l'animal car aucune des lignées de cellules existent. Cette méthode repose sur la digestion du foie et centrifugation différentielle pour la purification de la SEC pour la culture subséquente et l'expérimentation.

Dans l&#39;endocytose hépatique in vivo suivie d&#39;une purification des cellules du foie par perfusion du foie

Hépatocytes primaires constituent un outil précieux pour évaluer biochimiques, moléculaires fonctions, et métabolique dans un système physiologiquement pertinente expérimentale. Nous décrivons un protocole fiable pour le rat en perfusion du foie in situ, ce qui génère constamment hépatocytes viables jusqu'à à 1,0 ×...

L&#39;isolement et la culture primaire de cellules de foie de rat

Une procédure en deux étapes de la collagénase de perfusion modifié pour l'isolement d'hépatocytes humains est décrit. Cette méthode peut également être appliquée à d'autres foies de mammifères. Les hépatocytes isolés sont disponibles en haute rendement et la viabilité, les un modèle approprié pour la recherche scientifique dans des domaines tels que la régénération du foie, la pharmacocinétique et la toxicologie faire.

Isolement des hépatocytes humains par un deux-étape collagénase procédure de perfusion

Une technique permettant d’isoler des hépatocytes humains et des cellules hépatiques non parenchymateuses du même donneur est décrite. Les différents types de cellules hépatiques constituent la base des modèles hépatiques fonctionnels et de l’ingénierie tissulaire. Cette nouvelle méthode vise à isoler les cellules hépatiques avec un rendement et une viabilité élevés.

Protocole pour l&#39;isolement des hépatocytes humains primaires et correspondant Principales populations de cellules hépatiques non parenchymateuses

Le but du présent protocole est d’obtenir la grande viabilité et à haut rendement des hépatocytes et des cellules endothéliales sinusoïdales du foie. Ceci est accompli en perfusant le foie avec une solution de collagènase de type IV via la veine porte, suivie d’une centrifugation différentielle afin d’obtenir des hépatocytes et des cellules endothéliales sinusoïdales.

Purification des hépatocytes et des cellules endothéliales sinusoïdales foie de souris Perfusion

Présenté ici est un protocole pour l'isolement des hépatocytes de souris des foies adultes de souris utilisant une technique modifiée de perfusion de collagène. On décrit également la culture à long terme des hépatocytes dans un arrangement 3D de sandwich de collagène aussi bien que l'immunolabeling des composants cytosquelettiques pour étudier la formation canaliculaire biliaire et sa réponse au traitement.

Isolement et 3D Collagen Sandwich Culture of Primary Mouse Hepatocytes to Study the Role of Cytoskeleton in Bile Canalicular Formation In Vitro

Les hépatocytes primaires sont un outil précieux pour étudier la réponse hépatique et le métabolisme in vitro. En utilisant des réactifs disponibles dans le commerce, un protocole amélioré d’efficacité en termes de temps et de main-d’œuvre pour l’isolement des hépatocytes primaires chez la souris a été développé.

Un protocole amélioré d’efficacité en termes de temps et de main-d’œuvre pour l’isolement des hépatocytes primaires chez la souris

Ce protocole détaille l’utilisation d’un cathéter intraveineux spécial, d’un tube jetable stérile standardisé, d’un contrôle de la température complété par une surveillance en temps réel et d’un système d’alarme pour la procédure de perfusion de collagénase en deux étapes afin d’améliorer la cohérence de la viabilité, du rendement et de la fonctionnalité des hépatocytes primaires isolés chez le rat.

Isolement des hépatocytes primaires de rat avec contrôle de perfusion multiparamétrique

Un système de culture organoïde 3D ex vitro à long terme a été établi à partir d’hépatocytes de souris. Ces organoïdes peuvent être passés et génétiquement manipulés par l’infection à lentivirus de la construction shRNA/ectopique, la transfection de siRNA et l’ingénierie CRISPR-Cas9.

Établissement et manipulation génétique d’organoïdes d’hépatocytes murins

Nous présentons ici une méthode robuste de perfusion in situ du foie de souris pour étudier la régulation aiguë et directe du métabolisme hépatique sans perturber l’architecture hépatique mais en l’absence de facteurs extra-hépatiques.

La production hépatique de glucose, l’uréagénèse et la lipolyse quantifiées à l’aide du modèle de foie de souris perfusé

Découvrez la perfusion hépatique chez le rat et l'isolement d'hépatocytes primaires pour créer des organoïdes 3D fonctionnels. Cette méthode optimise la culture longue durée des cellules hépatiques.

Perfusion hépatique de rat et isolement des hépatocytes primaires : une procédure ancienne cruciale pour la culture d’organoïdes 3D de pointe (Vidéo) | JoVE Journal

Perfusion hépatique de rat et isolement des hépatocytes primaires : une procédure ancienne cruciale pour la culture d’organoïdes 3D de pointe

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