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Utilisation d’oligonucléotides synthétiques modifiés pour doser des enzymes métabolisant des acid...
Utilisation d’oligonucléotides synthétiques modifiés pour doser des enzymes métabolisant des acid...
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Biochemistry
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JoVE Journal Biochemistry
Using Modified Synthetic Oligonucleotides to Assay Nucleic Acid-Metabolizing Enzymes

Utilisation d’oligonucléotides synthétiques modifiés pour doser des enzymes métabolisant des acides nucléiques

Full Text
1,441 Views
05:33 min
July 5, 2024

DOI: 10.3791/66930-v

Ronja Stelzer1, Elizabeth Rzoska-Smith1, Sigurd Gundesø2, Ulli Rothweiler2, Adele Williamson1

1University of Waikato, 2ArcticZymes Technologies ASA

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Ici, un protocole pour doser les enzymes métabolisant les acides nucléiques est présenté, à l’aide d’exemples d’enzymes ligase, nucléase et polymérase. Le test utilise des oligonucléotides marqués par fluorescence et non marqués qui peuvent être combinés pour former des duplex imitant les dommages à l’ARN et/ou à l’ADN ou les intermédiaires de voie, permettant la caractérisation du comportement enzymatique.

Donc, mon groupe de recherche, nous nous intéressons vraiment aux enzymes impliquées dans la réplication et la réparation de l’ADN. En particulier, nous étudions les enzymes des micro-organismes extrêmophiles et aussi des agents pathogènes parce que nous voulons comprendre comment ces enzymes permettent à ces organismes de survivre aux défis environnementaux. Nous nous intéressons à la fois à la fonction biologique des enzymes et aux applications biotechnologiques.

Nous travaillons donc beaucoup avec l’ADN et l’ARN ligases, et nous avons récemment établi le rôle d’un type minimal d’ADN ligase qui semble être trafiqué vers l’extérieur de la cellule bactérienne. Et nous avons déterminé que cela joue un rôle dans la formation du biofilm chez l’agent pathogène Neisseria gonorrhoeae. Nous avons également, en collaboration avec nos collaborateurs d’ArcticZymes, caractérisé une nouvelle ligase ARN-ADN, capable de fixer des adaptateurs d’ADN à l’une ou l’autre extrémité d’un morceau d’ARN.

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Ce mois-ci dans JoVE numéro 209 Étiquettes fluorescentes Électrophorèse PAGE Tests non radioactifs Dommages à l’ADN Traitement de l’ADN Ligas d’ADN Nucléases Capacité de liaison à l’ADN Utilisation des cofacteurs Conception de substrat d’oligonucléotides

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