L’élimination partielle immédiate des complexes cumulus-ovocytes : une approche affinée pour l’observation rapide de la fécondation in vitro

Nos recherches se concentrent sur l’amélioration des résultats de la FIV en évaluant si l’élimination partielle immédiate des compresses d’ovocytes du cumulus améliore la fécondation. L’efficacité de l’observation affecte la race de fécondation et la qualité de l’embryon, et optimise les procédures de laboratoire. Notre objectif est d’affiner les techniques de FIV pour obtenir de meilleurs résultats cliniques.

Nous avons établi que dans l’élimination partielle médiale des compresses d’ovocytes cumulus, améliore considérablement l’efficacité de l’observation de la fécondation dans la FIV. Cela permet d’améliorer le calendrier d’évaluation des événements de fécondation et d’optimiser potentiellement la qualité de l’embryon et les résultats de la FIV. Notre protocole améliore l’efficacité de la FIV en réduisant le temps et en minimisant l’exposition à l’environnement, ce qui pourrait améliorer la qualité de l’embryon.

Il offre une approche simplifiée et efficace par rapport aux techniques traditionnelles. Pour commencer, placez les boîtes de prélèvement d’ovocytes dans l’incubateur à 37 degrés Celsius pendant la nuit. Incuber 12 millilitres de milieu de manipulation des follicules dans des tubes à essai à fond rond de 14 millilitres à 37 degrés Celsius pendant la nuit.

Transférez ensuite les tubes dans le support de tube à essai préchauffé 30 minutes avant le prélèvement des ovocytes. Ensuite, ajoutez neuf millilitres de milieu manipulateur de follicules dans un tube à essai à fond rond de 14 millilitres et incubez à 37 degrés Celsius pendant la nuit. Le jour du prélèvement des ovocytes, transférez 4,5 millilitres du milieu dans une boîte de prélèvement d’ovocytes pré-incubée recouverte de deux millilitres d’huile de paraffine à 100 %.

Ajoutez ensuite 4,5 millilitres de milieu de fécondation dans une boîte de prélèvement d’ovocytes et incubez à 37 degrés Celsius pendant la nuit. Ensuite, ajoutez un millilitre de milieu de fertilisation dans un plat de six centimètres recouvert de 100 % d’huile de paraffine. Pour émousser et arrondir les pointes des pipettes de verre pasteur, brûlez-les sur une lampe à alcool pendant environ cinq secondes.

Fixez une tête d’aspiration à l’extrémité des pipettes pasteur afin qu’elle puisse toucher le fond du plat sans se rayer. Rincez le verre au-delà de vos pipettes dans des plats de 10 centimètres avec un milieu de manipulation des follicules. Brièvement, utilisez une aiguille de calibre 17 pour récupérer les ovocytes sous guidage échographique transvaginal.

Versez le liquide folliculaire recueilli dans le tube à essai à fond rond de 14 millilitres dans une boîte de 10 centimètres. Placez le plat sur une plate-forme à température constante. Observer l’OCCC au stéréomicroscope pour confirmer la présence d’ovocytes et évaluer leur maturité.

Confirmer s’il y a des ovocytes dans l’OCCC et faire une évaluation préliminaire de la maturité des ovocytes. Préparez au préalable une pipette d’aspiration en silicone à l’aide d’une pipette pasteur polie à flamme ronde. Aspirez l’OCCC tout en soulevant doucement la boîte de culture à la position 9 à 10:00 avec l’annulaire gauche et en l’inclinant d’environ 15 degrés vers la gauche.

Tout en crachant l’OCCC aspiré à la position 11:00 de l’antenne, doucement allongé horizontalement vers la droite. Observez ensuite la taille des cellules de la granulosa autour de l’OCCC élargi. Maintenant, utilisez une pipette pasteur pour retirer délicatement les cellules de granulose en excès avec une coupe rapide vers le bas à l’endroit approprié sur l’OCCC allongé.

Transvasez l’OCCC coupé dans un plat de collecte contenant une solution de rinçage d’OCCC. Versez le liquide folliculaire restant dans un récipient d’échantillon stérile. Pour commencer, évaluez la concentration, la motilité et la morphologie des spermatozoïdes de l’échantillon de sperme collecté au microscope optique.

Transférez ensuite la pastille de sperme dans un nouveau tube à centrifuger et lavez-la deux fois dans le milieu de fertilisation. Incuberz-les à 6 % de dioxyde de carbone et 37 degrés Celsius jusqu’à ce que vous en ayez besoin. Après avoir éliminé l’excès de cellules de granulose, ajoutez six à huit OCCC et un millilitre de milieu de fertilisation dans la boîte de fertilisation.

Inséminer les OCCC avec des spermatozoïdes modaux en une seule gouttelette, environ deux à trois heures après le prélèvement dans la boîte de fécondation. Pour une fécondation à court terme, co-incubez des OCCC avec des spermatozoïdes pendant quatre à six heures. Après l’incubation, retirez mécaniquement les cellules du cumulus qui entourent les ovocytes.

Aspirez les ovocytes à l’aide d’une pipette d’un diamètre intérieur légèrement inférieur à celui des ovocytes pour assurer l’élimination complète des cellules. Pour confirmer la fécondation, observez la présence de deux globules polaires. Les ovocytes, montrant un deuxième corps polaire, sont considérés comme fécondés.

Pour une fécondation régulière, prélever les cumulus à l’aide des pipettes après 18 à 20 heures de co-incubation pour l’évaluation de la fécondation. Cultivez les ovocytes fécondés pendant trois à cinq jours après le prélèvement de l’ovocyte. Évaluer la fécondation 20 heures après l’insémination pour déterminer le nombre de pronoyaux.

Par la suite, cultivez chaque zygote individuellement dans une gouttelette de milieu et transférez les embryons après la fécondation dans un milieu de clivage. Transférez les embryons du troisième jour dans le milieu blastocytaire et évaluez-les le cinquième jour. Rapportez les données continues sous forme de moyenne et d’écart-type, et exprimez les données ordinales sous forme de proportions.

Sur 47 patientes ayant bénéficié d’une insémination de courte durée, aucune différence significative n’a été observée en termes d’âge et de nombre d’ovocytes prélevés. La durée moyenne de la procédure était significativement plus courte dans le groupe de retrait partiel de l’OCC, par rapport au groupe témoin, bien qu’aucune différence significative n’ait été observée dans le taux de clivage, le taux optimal d’embryons et le taux optimal de blastocytes. Chez les patientes subissant une FIV traditionnelle, des similitudes ont été notées dans l’âge des patientes et le nombre d’ovocytes récupérés entre les deux groupes.

Bien qu’une durée moyenne d’opération légèrement plus courte ait été observée dans le retrait partiel du groupe OCCC, aucune différence statistiquement significative n’a été observée. Comme dans le groupe précédent, aucune anomalie significative n’a été identifiée dans le taux de clivage, le taux optimal d’embryons et le taux optimal de blastocytes.