Name: Systèmes AAV et modèles murins pour l’étude de l’expression ectopique de Neurod1 dans des cellules transduites à des moments subaigus et chroniques post-AVC ischémique (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-29T13:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 40 s
Description: Découvrez l'expression ectopique de Neurod1 via AAV pour la récupération post-AVC ischémique chez la souris. Cette méthode évalue la reprogrammation neuronale et l'amélioration motrice aux phases subaiguë et chronique.

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<meta charset="utf8"></head><body>Systèmes AAV et modèles murins pour étudier l’expression ectopique de Neurod1 après un AVC

<ol><li>GBD 2016 Stroke Collaborators. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global%2C+regional%2C+and+national+burden+of+stroke%2C+1990-2016%3A+A+systematic+analysis+for+the+global+burden+of+disease+study+2016%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurol%22%5BJournal%5D)">Global, regional, and national burden of stroke, 1990-2016: A systematic analysis for the global burden of disease study 2016.</a> Lancet Neurol. 18 (5), 439-458 (2016).</li>
<li>Iadecola, C., Buckwalter, M. S., Anrather, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+responses+to+stroke%3A+Mechanisms%2C+modulation%2C+and+therapeutic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Immune responses to stroke: Mechanisms, modulation, and therapeutic potential.</a> J Clin Invest. 130 (6), 2777-2788 (2020).</li>
<li>Kuriakose, D., Xiao, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+and+treatment+of+stroke%3A+Present+status+and+future+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology and treatment of stroke: Present status and future perspectives.</a> Int J Mol Sci. 21 (20), 7609(2020).</li>
<li>Fifield, K. E., Vanderluit, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+degeneration+of+neurons+in+the+penumbra+region+following+a+small%2C+focal+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Rapid degeneration of neurons in the penumbra region following a small, focal ischemic stroke.</a> Eur J Neurosci. 52 (4), 3196-3214 (2020).</li>
<li>Burda, J. E., Sofroniew, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+gliosis+and+the+multicellular+response+to+CNS+damage+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Reactive gliosis and the multicellular response to CNS damage and disease.</a> Neuron. 81 (2), 229-248 (2014).</li>
<li>Kowalczyk, A., Kleniewska, P., Kolodziejczyk, M., Skibska, B., Goraca, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+endothelin-1+and+endothelin+receptor+antagonists+in+inflammatory+response+and+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Immunol+Ther+Exp+%28Warsz%29%22%5BJournal%5D)">The role of endothelin-1 and endothelin receptor antagonists in inflammatory response and sepsis.</a> Arch Immunol Ther Exp (Warsz). 63 (1), 41-52 (2015).</li>
<li>Silver, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+glial+scar+is+more+than+just+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">The glial scar is more than just astrocytes.</a> Exp Neurol. 286, 147-149 (2016).</li>
<li>Sofroniew, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+dissection+of+reactive+astrogliosis+and+glial+scar+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Molecular dissection of reactive astrogliosis and glial scar formation.</a> Trends Neurosci. 32 (12), 638-647 (2009).</li>
<li>Adams, K. L., Gallo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+diversity+and+disparity+of+the+glial+scar%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The diversity and disparity of the glial scar.</a> Nat Neurosci. 21 (1), 9-15 (2018).</li>
<li>Buscemi, L., Price, M., Bezzi, P., Hirt, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatio-temporal+overview+of+neuroinflammation+in+an+experimental+mouse+stroke+model%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Spatio-temporal overview of neuroinflammation in an experimental mouse stroke model.</a> Sci Rep. 9 (1), 507(2019).</li>
<li>Vasan, L., Park, E., David, L. A., Fleming, T., Schuurmans, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+neuronal+reprogramming%3A+Bridging+the+gap+between+basic+science+and+clinical+application%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Direct neuronal reprogramming: Bridging the gap between basic science and clinical application.</a> Front Cell Dev Biol. 9, 681087(2021).</li>
<li>Berninger, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+properties+of+neurons+derived+from+in+vitro+reprogrammed+postnatal+astroglia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Functional properties of neurons derived from in vitro reprogrammed postnatal astroglia.</a> J Neurosci. 27 (32), 8654-8664 (2007).</li>
<li>Chen, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+neurod1+aav-based+gene+therapy+for+functional+brain+repair+after+ischemic+injury+through+in+vivo+astrocyte-to-neuron+conversion%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">A neurod1 aav-based gene therapy for functional brain repair after ischemic injury through in vivo astrocyte-to-neuron conversion.</a> Mol Ther. 28 (1), 217-234 (2020).</li>
<li>Ghazale, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ascl1+phospho-site+mutations+enhance+neuronal+conversion+of+adult+cortical+astrocytes+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Ascl1 phospho-site mutations enhance neuronal conversion of adult cortical astrocytes in vivo.</a> Front Neurosci. 16, 917071(2022).</li>
<li>Wang, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revisiting+astrocyte+to+neuron+conversion+with+lineage+tracing+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Revisiting astrocyte to neuron conversion with lineage tracing in vivo.</a> Cell. 184 (21), 5465-5481.e16 (2021).</li>
<li>Xie, Y., Zhou, J., Wang, L. L., Zhang, C. L., Chen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+aav+tools+fail+to+detect+neurod1-mediated+neuronal+conversion+of+muller+glia+and+astrocytes+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">New aav tools fail to detect neurod1-mediated neuronal conversion of muller glia and astrocytes in vivo.</a> EBioMedicine. 90, 104531(2023).</li>
<li>Bocchi, R., Masserdotti, G., Gotz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+neuronal+reprogramming%3A+Fast+forward+from+new+concepts+toward+therapeutic+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Direct neuronal reprogramming: Fast forward from new concepts toward therapeutic approaches.</a> Neuron. 110 (3), 366-393 (2022).</li>
<li>Huang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+promise+for+neuronal+repair%3A+Reprogramming+astrocytes+into+neurons+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Biosci+Rep%22%5BJournal%5D)">A promise for neuronal repair: Reprogramming astrocytes into neurons in vivo.</a> Biosci Rep. 44 (1), BSR20231717(2024).</li>
<li>Hickmott, J. W., Morshead, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glia-to-neuron+reprogramming+to+the+rescue%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regen+Res%22%5BJournal%5D)">Glia-to-neuron reprogramming to the rescue.</a> Neural Regen Res. 20 (5), 1395-1396 (2024).</li>
<li>Gao, X., Wang, X., Xiong, W., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+reprogramming+reactive+glia+into+iPSCs+to+produce+new+neurons+in+the+cortex+following+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">In vivo reprogramming reactive glia into iPSCs to produce new neurons in the cortex following traumatic brain injury.</a> Sci Rep. 6, 22490(2016).</li>
<li>Guo, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+direct+reprogramming+of+reactive+glial+cells+into+functional+neurons+after+brain+injury+and+in+an+alzheimer%27s+disease+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">In vivo direct reprogramming of reactive glial cells into functional neurons after brain injury and in an alzheimer's disease model.</a> Cell Stem Cell. 14 (2), 188-202 (2014).</li>
<li>Livingston, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ectopic+expression+of+neurod1+is+sufficient+for+functional+recovery+following+a+sensory-motor+cortical+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicines%22%5BJournal%5D)">Ectopic expression of neurod1 is sufficient for functional recovery following a sensory-motor cortical stroke.</a> Biomedicines. 12 (3), 663(2024).</li>
<li>Tai, W., Xu, X. M., Zhang, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+through+in+vivo+cell+fate+reprogramming+for+neural+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Regeneration through in vivo cell fate reprogramming for neural repair.</a> Front Cell Neurosci. 14, 107(2020).</li>
<li>Wu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+conversion+of+striatal+astrocytes+into+gabaergic+neurons+in+mouse+models+of+Huntington%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Gene therapy conversion of striatal astrocytes into gabaergic neurons in mouse models of Huntington's disease.</a> Nat Commun. 11 (1), 1105(2020).</li>
<li>Roome, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reproducible+endothelin-1+model+of+forelimb+motor+cortex+stroke+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A reproducible endothelin-1 model of forelimb motor cortex stroke in the mouse.</a> J Neurosci Methods. 233, 34-44 (2014).</li>
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<li>Balkaya, M., Krober, J. M., Rex, A., Endres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+post-stroke+behavior+in+mouse+models+of+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Assessing post-stroke behavior in mouse models of focal ischemia.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 33 (3), 330-338 (2013).</li>
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<li>Early, A. N., Gorman, A. A., Van Eldik, L. J., Bachstetter, A. D., Morganti, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+advanced+age+upon+astrocyte-specific+responses+to+acute+traumatic+brain+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Effects of advanced age upon astrocyte-specific responses to acute traumatic brain injury in mice.</a> J Neuroinflammation. 17 (1), 115(2020).</li>
<li>Donocoff, R. S., Teteloshvili, N., Chung, H., Shoulson, R., Creusot, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+tamoxifen-induced+cre+activity+and+its+effect+on+immune+cell+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Optimization of tamoxifen-induced cre activity and its effect on immune cell populations.</a> Sci Rep. 10 (1), 15244(2020).</li>
<li>Gresita, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Very+low+efficiency+of+direct+reprogramming+of+astrocytes+into+neurons+in+the+brains+of+young+and+aged+mice+after+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Aging+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Very low efficiency of direct reprogramming of astrocytes into neurons in the brains of young and aged mice after cerebral ischemia.</a> Front Aging Neurosci. 11, 334(2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>#77 Mèche (.018</td>")<td>David Kopf Instruments</td><td>8177</td><td></td></tr><tr><td>AAV5-GFAP(0.7)-mNeurod1-2A-iCre</td><td>Vecteur&nbsp ; Biolabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Suture résorbable avec aiguille Polysorb&trade ; Polyester CV-15 3/8 Cercle Pointe Conique Aiguille Taille 4 - 0 Tressé</td><td>Covidien</td><td>GL-881</td><td></td></tr><tr><td>Anti-NeuN Anticorps (lapin)&nbsp ;</td><td>Millipore Sigma</td><td>ABN78&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 Souris</td><td>Charles River</td><td>027</td><td></td></tr><tr><td>Chlorhexidine Solution</td><td>Partnar</td><td>PCH-020</td><td></td></tr><tr><td>Contec&trade ; &nbsp ; PRÉEMPT&trade ; Solution désinfectante RTU</td><td>Fisher Scientific</td><td>29-636-6212</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Thermo Scientific&nbsp ;</td><td>HM525 NX&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Endothéline 1</td><td>Millipore Sigma</td><td>05-23-3800-0.5MG</td><td></td></tr><tr><td>Rasoir de sécurité plume Microtome lames</td><td>Feather</td><td>12-631P</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand&nbsp ; Lunettes de protection : Rectangles</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-545M&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Support de montage de fluorescence</td><td>Agilent Technologies</td><td>S3023&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton Seringue</td><td>Hamilton Company</td><td>7634-01</td><td></td></tr><tr><td>Perceuse stéréotaxique à grande vitesse</td><td>David Kopf Instruments</td><td>1474</td><td></td></tr><tr><td>Solution Metacam (Meloxicam)</td><td>Boehringer Ingelheim</td><td></td><td></td></tr><tr><td>O.C.T Compound</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-730-571</td><td></td></tr><tr><td>pAAV2/5-GFAP-iCre</td><td>Vector Builder</td><td>P190924-1001suq</td><td></td></tr><tr><td>Pommade Polyderm USP</td><td>TARO</td><td>2181908</td><td></td></tr><tr><td>SOMNI Scientific&trade ; &nbsp ; Coussin chauffant pour la température animale</td><td>Fisher Scientific</td><td>04-777-177</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaxic Instruments</td><td>David Kopf Instruments</td><td>Modèle 902</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost Plus Lames de microscope, blanc</td><td>Fisherbrand</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>tdTomato Reporter Mice&nbsp ;</td><td>Le Jackson Laboratory</td><td>007914</td><td></td></tr><tr><td>V-1 Système d’anesthésie animale de laboratoire de table</td><td>VetEquip</td><td>901806</td><td></td></tr></tbody></table>

systèmes aav et modèles murins pour l’étude de l’expression ectopique de neurod1 dans des cellules transduites à des moments subaigus et chroniques post-avc ischémique

AAV Systems and Mouse Models for Investigating Ectopic Expression of Neurod1 in Transduced Cells at Subacute and Chronic Times Post-Ischemic Stroke

Examiner les résultats cellulaires de l’expression ectopique de Neurod1 induite par le promoteur GFAP court (gfaABC(1)D) dans les souches rapporteures de type sauvage (C57BL/6J) et transgéniques (en particulier, B6. Cg-Gt(ROSA)26Sortm14(CAG-tdTomato)Hze/J)22 deux systèmes basés sur AAV5 ont été utilisés chez des souris blessées par un AVC ET-1 (Figure 1A-C). Dans un modèle subaigu d’AVC, Neurod1 a été intégré dans le système AAV Cre-Flex et administré à des souris de type sauvage au jour 7 après l’AVC (Figure 1B). Le deuxième vecteur Flex contient la séquence inversée de la GFP pilotée par le promoteur CAG qui est flanquée de sites de recombinaison hétérotypiques et antiparallèles de type loxP (Figure 1B). Les deux constructions virales sont injectées ensemble en même temps après l’AVC. Une fois que Cre est exprimé dans les cellules transduites, la GFP est inversée et excisée aux sites de recombinaison, orientant la séquence dans la direction sensorielle, ce qui permet l’expression de la GFP. Par conséquent, les cellules qui expriment Cre seront GFP positives, ce qui indique qu’elles ont été transduites par les vecteurs Cre-Flex. Dans le modèle subaigu, les souris ont été sacrifiées 21 jours après la transduction (c’est-à-dire 28 jours après l’AVC), et le nombre de cellules transduites (GFP+), ainsi que le nombre de cellules NeuN+GFP+ (cellules transduites exprimant NeuN), ont été comptés dans le parenchyme des cerveaux blessés par AVC. Comme le montre la figure 2A, les neurones sont perdus sur le site de la lésion ischémique. La quantification des cellules transduites dans le paradigme subaigu à l’aide du système AAV Cre-Flex révèle significativement plus de neurones marqués (cellules NeuN+GFP+/GFP+) chez les souris traitées par Neurod1 par rapport aux souris témoins Stroke-Cre (43,05 +/- 5,50 % vs 18,43 +/- 3,03 % de cellules NeuN+GFP+/GFP+, dans Stroke-Neurod1 vs. souris traitées par Stroke-Cre (témoin), respectivement) (p = 0,0172) (figures 2B et C).
Dans une série d’expériences distinctes, la conversion de l’AtN a été réalisée dans un modèle chronique d’AVC (Figure 1B,C). Le facteur de transcription Neurod1 a été administré à des souris rapporteures tdTom-Cre blessées par ET-1 lors d’un AVC le 21e jour après l’AVC (Figure 1C). Identique au système Cre-Flex utilisé chez les souris de type sauvage, l’expression de Neurod1 a été pilotée par le promoteur GFAP court. Cependant, dans ce système, une seule construction AAV a été utilisée avec la recombinase Cre après Neurod1 (Figure 1B). Par conséquent, les cellules exprimant GFAP produiront une recombinase Cre, induisant le rapporteur tdTom, indiquant que les cellules ont été transduites par AAV. Les souris ont été sacrifiées 77 jours après l’AVC (8 semaines après l’AAV) (figure 1C). Comme le montre la figure 3A, une lésion corticale est observée au jour 77 après l’AVC chez les souris tdTom-Cre. Le nombre de cellules transduites exprimant le marqueur neuronal, NeuN+, a été quantifié (pourcentage relatif de cellules (NeuN+tdTom+/tdTom+) au stade chronique post-AVC et a révélé que les souris ayant reçu Stroke-Neurod1 avaient significativement plus de neurones marqués que les souris témoins Stroke-Cre (74,81 +/- 4,835 % vs 53,05 +/- 5,028 % NeuN+/tdTom+ cellules dans Stroke-Neurod1vs. souris traitées par Stroke-Cre (témoin), respectivement) (p = 0,0355) (figures 3B et C).
Dans l’ensemble, les résultats démontrent une transduction de base des neurones et un nombre plus élevé de cellules transduites exprimant NeuN+ avec l’administration de Neurod1 dans les phases subaiguës et chroniques post-AVC chez des souris rapporteures de type sauvage et tdTom-Cre, avec deux systèmes différents basés sur l’AAV.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66965/66965fig01.jpg"> 
Figure 1 : Expression ectopique de Neurod1, vecteurs et chronologies. (A) Représentation graphique de l’induction d’un AVC par injection d’Endothéline-1 (ET-1) dans le cortex moteur de la souris. Virus adéno-associé (AAV) administré sur 3 sites, au site d’injection d’ET-1 ainsi qu’aux sites entourant la lésion, 1 mm antérieur et postérieur. Panneau zoomé montrant des cellules transduites avec AAV-Neurod1 dans le cortex moteur. (B) Schéma des deux vecteurs AAV du système Cre-Flex administrés à des souris de type sauvage (panneau supérieur). Le vecteur AAV5 1 contient le promoteur GFAP court, le facteur de transcription Neurod1 et la séquence de recombinase Cre flanquée d’un site loxP (triangle noir) et d’un site lox2272 (triangle blanc). Le vecteur AAV5 2 porte la séquence rapporteuse inversée du gène GFP flanquée d’une paire de sites loxP et lox2272. La transduction des deux vecteurs dans les cellules entraîne une excision et une inversion médiées par Cre, ce qui permet à l’expression de la GFP de marquer les cellules transduites. Neurod1 a également été administré à des souris tdTom-Cre à l’aide d’un vecteur AAV5 (panneau inférieur). Dans le vecteur AAV5 1, le promoteur GFAP court, le facteur de transcription Neurod1 et la séquence de recombinase Cre sont emballés. L’expression de Cre dans les cellules transduites entraîne l’excision du codon Stop aux sites loxP (triangle noir), permettant l’expression de tdTomato. (C) Le système Cre-Flex a été testé chez des souris de type sauvage avec des AAV injectés dans la période subaiguë post-AVC (post-AVC Jour 7). Des souris de type sauvage ont été sacrifiées 21 jours après la transduction de l’AAV (28 jours après l’AVC). L’AAV a été administré à des souris tdTom-Cre dans la période chronique post-AVC (post-AVC 21), et les souris ont été sacrifiées 56 jours après la transduction de l’AAV (77 jours après l’AVC). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66965/66965fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66965/66965fig02v4.jpg"> 
Figure 2 : L’administration ectopique de Neurod1 à l’aide d’AAV Cre-Flex dans la phase subaiguë post-AVC conduit à une augmentation du nombre de cellules transduites exprimant NeuN. (A) Immunocoloration des sections cérébrales coronales à travers le cortex moteur au jour 28 après l’AVC chez les souris témoins Stroke-Cre (à gauche) et Stroke-Neurod1 (à droite). Une perte neuronale est observée au site de la lésion (lignes pointillées blanches). Des cellules transduites (GFP+, vertes), des neurones (NeuN+, rouges) et des cellules NeuN+GFP+ colocalisées (orange) sont observées dans le cortex. Barres d’échelle : 250 μm. (B) Images représentatives du tissu cérébral témoin Stroke-Cre (en haut) et Stroke-Neurod1 (en bas) montrant les neurones (NeuN+, rouge) et la GFP+ transduite par AAV (vert). Les encarts entourés de blanc montrent un gros plan des cellules pour chaque canal individuel. Les pointes de flèche blanches indiquent les cellules transduites par AAV (GFP+). Les flèches blanches indiquent des cellules NeuN+GFP+ colocalisées. Barres d’échelle : 125 μm. (C) Quantification des cellules NeuN+GFP+/GFP+ chez les souris Stroke-Cre et Stroke-Neurod1. N = 3 souris par groupe. Les données sont représentées sous forme de moyenne ± MEB. Test de Shapiro-Wilk (p = 0,3223). Test t non apparié, *p &lt; 0,05. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66965/66965fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66965/66965fig03.jpg"> 
Figure 3 : L’administration ectopique de Neurod1 chez les souris rapporteures tdTom-Cre dans la phase chronique post-AVC conduit à une augmentation du nombre de cellules transduites exprimant NeuN. (A) Immunomarquage de sections cérébrales coronales à travers le cortex moteur au jour 77 après l’AVC à partir de souris témoins Stroke-Cre et Stroke-Neurod1. La perte neuronale est observée au site de la lésion ischémique (lignes pointillées blanches). Les cellules transduites sont marquées avec tdTom (rouge) dans le péri-infarctus. NeuN+tdTom+ (orange) sont des cellules transduites qui expriment des marqueurs neuronaux. Barres d’échelle : 250 μm. (B) Images représentatives du tissu cérébral témoin Stroke-Cre (en haut) et Stroke-Neurod1 (en bas) montrant les neurones (NeuN+, vert) et les cellules transduites par AAV (tdTom+, rouge). Les encarts entourés de blanc montrent un gros plan des cellules pour chaque canal individuel. Les pointes de flèche blanches indiquent les cellules transduites par AAV (tdTom+). Les flèches blanches indiquent des cellules NeuN+tdTom+ colocalisées. Barres d’échelle : 125 μm. (C) La quantification des cellules NeuN+tdTom+/tdTom+ dans le paradigme chronique montre un nombre significativement plus élevé de cellules transduites exprimant NeuN+ (cellules NeuN+tdTom+/tdTom+) chez les souris traitées par Neurod1. N = 3 souris par groupe. Les données sont représentées sous forme de moyenne ± MEB. Test de Shapiro-Wilk (p = 0,2044). Test t non apparié, *p &lt; 0,05. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66965/66965fig03large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>

Systèmes AAV et modèles murins pour l’étude de l’expression ectopique de Neurod1 dans des cellules transduites à des moments subaigus et chroniques post-AVC ischémique

Ectopic expression of neurogenic factors in vivo has emerged as a promising approach for replacing lost neurons in disease models. The use of neural basic ...

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