Name: Radiosynthèse, contrôle de la qualité et imagerie par tomographie par émission de positons chez les petits animaux de 68nanomolécules marquées au Ga (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-04T14:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 55 s
Description: Découvrez la radiosynthèse et l'imagerie TEP chez les petits animaux avec des nanomolécules marquées au gallium-68. Cette méthode permet de visualiser les tumeurs pour améliorer les stratégies thérapeutiques en oncologie.

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<meta charset="utf8"></head><body>Radiosynthèse et imagerie TEP/TDM de 68nanobody marqués au ga dans des modèles de xénogreffes

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</ol>

<table><tbody><tr><td>EquipmentCompteur d’activité</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>ISOMED 2010</td><td>Nuviatech Healthcare&nbsp ;</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugeuse MIKRO 185</td><td>Andreas Hettich GmbH & Co. KG</td><td>1203</td><td></td></tr><tr><td>Test d’endotoxines Endosafe nexgen-PTS</td><td>Charles</td> <td>River-Bloc</td><td></td></tr> <tr><td>chauffant NANOCOLOR VARIO C2</td><td>Macherey-Nagel</td><td>919350</td><td></td></tr><tr><td>Système HPLC, y compris détecteur radio</td><td>Knauer & Logiciel</td> <td>d’analyse d’images Raytest-Pmod</td><td></td></tr> <tr><td>4.4</td><td>PMOD Technologies LLC-Système</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>PET/CT pour petits animaux &beta ;-CUBE et X-CUBE</td><td>Molecubes NV-TLC</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>MiniGITA*</td><td>Elysia-Raytest</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Materials</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.3 mm de diamètre PE10 tube</td><td>fisher scientific</td><td>22-204008</td><td></td></tr><tr><td>30G aiguille</td><td>B|Braun</td><td>4656300</td><td></td></tr><tr><td>Filtre centrifuge ; 10 kDa MWCO, 0,5 mL</td><td>Bande</td><td></td> de papier pour UFC501008 <td></td></tr><tr><td>chromatographie iTLC-SG</td><td>Agilent Technologies</td><td>SGI0001</td><td></td></tr><tr><td>Cartouche d’endotoxine, sensibilité 0,05 EU/ml&nbsp ;</td><td>Charles River</td><td>PTS-2005</td><td></td></tr><tr><td>Colonne HPLC Biosep SEC-s2000</td><td>Phenomenex-Tube</td><td></td><td></td></tr> à <tr><td>centrifuger (1,5 mL)</td><td>Eppendorf</td><td>0030125150</td><td></td></tr><tr><td>bandelette de pH 0,0 - 6,0</td><td>Merck KGaA</td><td>109531</td><td></td></tr><tr><td>bandelette de pH 0-14</td><td>Merck KGaA</td><td>109535</td><td></td></tr><tr><td>PS-H+ Cartouche SPE</td><td>Macherey Nagel GmbH &; Co. KG</td><td>731861</td><td></td></tr><tr><td>Flacon stérile 10 mL</td><td>ALK Life Science Solutions</td><td>SEV100</td><td></td></tr><tr><td>Reagents</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>68Ge/68Ga-Generator</td><td>NRF-iThembaLABS-Ammoniumacétate</td><td></td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Merck KGaA</td><td>101116</td><td></td></tr><tr><td>Acide citrique</td><td>Merck KGaA</td><td></td><td></td>100241</tr><tr><td>Acide chlorhydrique</td><td>Merck KGaA</td><td>320331</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Merck KGaA</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>Nanobody NM-02</td><td>Radiopharm Theranostics-P-SCN-Bz-DOTA-GA</td><td></td><td></td></tr> <tr><td></td><td>CheMatech</td><td>C115</td><td></td></tr><tr><td>Acide trifluoracétique</td><td>Merck KGaA</td><td>T6508</td><td></td></tr><tr><td>Eau ultrapure</td><td>Merck KGaA</td><td></td><td></td>101262</tr></tbody></table>

radiosynthèse, contrôle de la qualité et imagerie par tomographie par émission de positons chez les petits animaux de 68nanomolécules marquées au ga

Radiosynthesis, Quality Control, and Small Animal Positron Emission Tomography Imaging of 68Ga-Labelled Nano Molecules

L’un des aspects les plus importants du contrôle de la qualité d’un produit radiopharmaceutique est le moyen de la HPLC, car elle permet non seulement de montrer la pureté chimique et radiochimique (98,2 % dans ce cas), mais aussi de prouver l’identité du produit radiopharmaceutique en comparant le temps d’élution et la forme du pic à ceux d’un composé de référence non radioactif. Ce composé de référence est, dans ce cas, un nanocorps non marqué, dont il a été prouvé qu’il s’agissait du bon composé par des techniques classiques telles que la spectrométrie de masse ou la résonance magnétique nucléaire. Ces techniques ne peuvent pas être appliquées directement au composé radioactif (il n’y a pas assez de masse pour générer un signal), mais en comparant le composé radioactif avec sa référence, on recueille suffisamment de preuves que le composé correct a effectivement été marqué et n’a pas été modifié pendant la synthèse. Notez la petite différence de temps de rétention entre le produit radioactif et la référence de la figure 1, correspondant à la mesure en série du débit HPLC (l’UV est mesuré en premier ; le débit a ensuite besoin d’environ 0,2 min pour atteindre le détecteur de radioactivité dans une configuration typique).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67048/67048fig01.jpg"> 
Figure 1 : Chromatogramme analytique HPLC typique pour le contrôle qualité de 68nanocorps NM-02 marqués au Ga (GLNM-02). L’absorbance UV du composé froid (c’est-à-dire le panneau supérieur) est mesurée à 280 nm et montre un pic à 4,18 min, avec un décalage de 0,22 min. Le pic du produit marqué au Ga 68est visible dans le détecteur gamma (c.-à-d. le panneau inférieur). Le rendement radiochimique est de 98,2 %. mAU = unités d’absorbance millimétriques, NM-02 = notre produit, UV = canal de lumière ultraviolette, nm = nanomètre, min = minute, CPS = nombre par seconde, GLMN-02 = 68nanocorps marqué au Ga NM-02, 68Ga-DOTA-GA = [68Ga]Ga-DOTA-GA, γ ChA = canal gamma. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67048/67048fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
En l’absence de HPLC ou en plus de celle-ci, la TLC peut être utilisée pour déterminer le rendement de l’étiquetage et la pureté du produit final (mais pas l’identité, et pas aussi détaillée que la HPLC). En raison de sa faible complexité, la CCM est idéale lorsque la voie de radiosynthèse est encore en cours d’optimisation. La figure 2 montre le chromatogramme CCM de 68nanocorps NM-02 marqués au Ga (pureté radiochimique apparente de 99,9 %).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67048/67048fig02.jpg"> 
Figure 2 : Chromatogramme analytique CCM typique pour le contrôle qualité de 68nanocorps NM-02 marqués au Ga (GLNM-02). Les comptages de surface sont tracés en fonction de la distance parcourue par le solvant (citrate) sur la plaque de CCM. Le Rf est de 0,2 et la pureté radiochimique est de 99,9 %. C = Comptage, mm = millimètre, GLNM-02 = 68Nanocorps marqué au Ga NM-02, CCM = chromatographie sur couche mince. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67048/67048fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
Dans le processus de préparation des données d’imagerie pour la publication, il est courant de montrer au moins une image CT et PET autonome. Cette approche permet une évaluation complète de la biodistribution des traceurs. L’échelle standard de la tomodensitométrie est comprise entre -1000 HU et 1000 HU, ce qui permet de visualiser tous les tissus mous dans une seule fenêtre. Comme le montre la figure 3A, cette méthode permet une démarcation claire des reins de souris tout en permettant une évaluation osseuse.
Pour le pont-bascule TEP, fixer le seuil inférieur à un VUS de 0,0 tout en maintenant un seuil supérieur minimal de 1,0 (figure 3B), de préférence en utilisant la normalisation du poids corporel lors du calcul du VUS (c.-à-d. VUSp.c.). De plus, pour la quantification, SUVmean est préféré à SUVmax ; si le SUVmax doit être utilisé, utilisez la moyenne des 10 voxels les plus chauds au lieu de la valeur du voxel unique le plus chaud dans le calcul du poidsnoir du SUV. Préparez des fusions de caractéristiques d’images TEP/TDM en fusionnant les coupes CT et TEP (Figure 3C).
Pour permettre aux lecteurs d’évaluer indépendamment la biodistribution du traceur du corps entier, la projection d’intensité maximale du même balayage TEP peut être présentée à l’aide de la même échelle que la tranche TEP (figure 3D).
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67048/67048fig03.jpg"> 
Figure 3 : Images TEP/TDM in vivo d’une souris porteuse d’une tumeur sous-cutanée SKOV-3. L’image a été acquise 3 h après l’injection intraveineuse de 5 nanocorps NM-02 marqués au Ga (GLNM-02) de 5 MBq 68. (A) L’image CT est mise à l’échelle entre -1000 HU et 1000 HU, tandis que (B) l’image TEP est comprise entre un SUV de 0,0 et 5,0. (C) La fusion TEP/TDM utilise la même échelle. (D) L’image TEP de projection d’intensité maximale (MIP) est également mise à l’échelle à l’aide d’un SUV de 0,0 et 5,0. Toutes les images TEP montrent une bonne absorption tumorale de GLNM-02, et la clairance rénale est clairement visible. CT = tomodensitométrie, TEP = tomographie par émission de positons, MIP = projection de l’intensité maximale, HU = unité de Hounsfield, SUV = valeur d’absorption standardisée. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67048/67048fig03large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
Dans le cas spécifique du nanocorps NM-02 marqué au Ga 68, une absorption tumorale notable peut être observée dans le flanc gauche de la souris. De plus, la clairance rénale du traceur est également évidente. En présentant la projection d’intensité maximale du TEP, l’activité de la vessie devient également visible, renforçant la clairance rénale du traceur. Dans ce cas précis, il convient de mentionner que le rein, la tumeur et la vessie ne peuvent pas être représentés dans la même tranche 2D. En incluant la projection d’intensité maximale dans les publications, l’ensemble de la biodistribution du traceur est présentée dans la même image.

Radiosynthèse, contrôle de la qualité et imagerie par tomographie par émission de positons chez les petits animaux de 68nanomolécules marquées au Ga

Small animal Positron Emission Tomography (PET) and Single Photon Emission Computed Tomography (SPECT) imaging techniques are crucial in preclinical ...

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Recherche

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Cancer Research

Recherche sur le cancer

Nous démontrons la synthèse radiochimique semi automatisée de [ 18 F] 3F4AP et des procédures de contrôle de qualité.

Synthèse radiochimique automatisée de [<sup&gt; 18</sup&gt; F] 3F4AP: Un nouveau traceur PET pour les maladies démyélinisantes

Les auteurs décrivent un protocole précliniques in vivo suivi des métastases cancéreuses. Il est issu d’un reporter de radionucléide-fluorescence combinant le sodium iodure symport, détecté par non invasive [18F] tétrafluoroborate-PET et une protéine fluorescente simplifiée ex vivo de confirmation. La méthode est applicable pour précliniques in vivo la cellule de suivi au-delà de biologie tumorale.

Gène rapporteur de radionucléide-fluorescence Imaging pour suivre la Progression tumorale dans les modèles de rongeurs tumeur

Nous présentons ici un protocole pour obtenir68Ga dopée à base d’oxyde de fer nanoparticles via rapide axée sur les micro-ondes synthèse. La méthode rend PET / (T1) MRI nanoparticules avec radiomarquage efficacité supérieure à 90 % et la pureté radiochimique de 99 % dans une synthèse de 20 min.

Synthèse de 68Ga dopée à base d’oxyde de fer nanoparticules pour tomographie par émission de double/imagerie de résonance magnétique (T1)

Tomographie par émission de positons (TEP) d’imagerie des sites qui sont impliqués dans plusieurs essais de recherche clinique précoce ont besoin de capacités de fabrication robuste et polyvalent de traceurs radioactifs. En utilisant des traceurs radioactifs [18F] Clofarabine à titre d’exemple, nous illustrons comment automatiser la synthèse d’un radiotraceur utilisant un radiosynthèse souple, axée sur la cassette et valider la synthèse pour l’usage clinique.

Automatisation d’un protocole de synthèse tomographie par émission de positons (TEP) traceurs radioactifs pour la Production de la clinique

Ici, nous représentons un protocole pour la radioétiquetage entièrement automatisé de [11C]SNAP-7941 et l'analyse de la cinétique en temps réel de ce PET-tracer sur les cellules exprimantes et non-exprimantes P-gp.

Aspect technique de la synthèse automatisée et de l'évaluation cinétique en temps réel de [11C]SNAP-7941

Cette méthode estime la dose absorbée de différentes structures pour le peptide-récepteur-radionucléide-thérapie (PRRT) avec la possibilité d’éviter le chevauchement d’organe sur les projections 2D. Les images planaires en série du corps entier permettent d’estimer les doses moyennes absorbées le long du corps tout entier, tandis que l’approche hybride, combinant des images planaires et l’image 3D-SPECT/CT, surmonte les limites du chevauchement de la structure.

Protocole de dosimétrie du corps entier pour la thérapie par radionucléide Peptide-Receptor (PRRT) : Image planaire 2D et méthodes hybrides d’image 2D-3D SPECT/CT

La synthèse des produits radiopharmaceutiques étiquetés fluor-18(18F) pour la tomographie par émission de positrons nécessite généralement des mois d'expérience. Lorsqu'il est incorporé dans un radiotraceur, le motif de l'accepteur de silicium-fluorure (SiFA) permet un simple protocole d'étiquetage F 18indépendant de l'équipement coûteux et de la formation préparatoire, tout en réduisant la quantité de précurseurs nécessaire et en utilisant des conditions de réaction plus douces.

18 ans, états-unis qui F-Labeling of Radiotracers Functionalized with a Silicon Fluoride Acceptor (SiFA) for Positron Emission Tomography

Cette étude a développé une méthode non invasive et en temps réel pour évaluer la distribution du ligand de mort programmée 1 dans l’ensemble du corps, basée sur l’imagerie tomographique par émission de positons de l’antagoniste du D-dodécapeptide [68Ga]. Cette technique présente des avantages par rapport à l’immunohistochimie conventionnelle et améliore l’efficacité de l’identification des patients appropriés qui bénéficieront d’un traitement par blocage des points de contrôle immunitaires.

Développement d’un traceur PET de peptide D marqué au gallium 68pour l’imagerie de l’expression programmée du ligand 1 de la mort

Ce travail décrit la production automatisée de jusqu’à 1,7 GBq de [68Ga]Ga-FAPI-46 sur le synthétiseur iPHASE MultiSyn pour l’imagerie TEP de la protéine d’activation des fibroblastes.

Radiosynthèse automatisée de [68Ga]Ga-FAPI-46 pour une utilisation clinique de routine

Ce protocole présente une procédure détaillée pour préparer quatre radiotraceurs de carbone 11 par le biais de la « méthode en boucle » de la méthylation du [11C]. Nous décrivons la procédure de synthèse du [11C]ER-176, avec des données pour trois radiotraceurs supplémentaires : [11C]MRB, [11C]mHED et [11C]PiB. La méthode en boucle permet une synthèse efficace avec des rendements radiochimiques accrus par rapport à la méthylation traditionnelle du récipient de réaction [11C].

Amélioration de l’efficacité et des rendements de radiomarquage des radioligands de carbone 11 pour la recherche clinique à l’aide de la méthode de la boucle

Cette recherche décrit le processus automatisé de production de [68Ga]Ga-3BP-3940 avec le synthétiseur GAIA V2, pour l’imagerie TEP de la protéine d’activation des fibroblastes. Les résultats des tests de contrôle de la qualité effectués sur trois lots d’essai sont également présentés.

Préparation automatisée de [68Ga]Ga-3BP-3940 sur un module de synthèse pour l’imagerie TEP du microenvironnement tumoral

Découvrez la radiosynthèse et l'imagerie TEP chez les petits animaux avec des nanomolécules marquées au gallium-68. Cette méthode permet de visualiser les tumeurs pour améliorer les stratégies thérapeutiques en oncologie.

Radiosynthèse, contrôle de la qualité et imagerie par tomographie par émission de positons chez les petits animaux de 68nanomolécules marquées au Ga (Vidéo) | JoVE Journal

Radiosynthèse, contrôle de la qualité et imagerie par tomographie par émission de positons chez les petits animaux de ⁶⁸nanomolécules marquées au Ga

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