Un modèle de pancréatite chronique obstructive établi par électrocoagulation

Il existe de nombreuses méthodes pour construire des modèles animaux de pancréatite chronique, y compris l’injection intrapéritonéale de sodium et la ligature du canal pancréatique, qui ont leurs limites. Notre équipe a récemment mis au point un nouveau modèle d’électrocoagulation de la pancréatite chronique chez la souris, qui présente l’avantage de ne pas nécessiter de médicaments à injection longue ou une méthode difficile à maîtriser. Et ils peuvent facilement établir un modèle de pancréatite chronique.

L’utilisation de la coagulation électrique pour induire une pancréatite chronique chez la souris fournit un modèle plus pratique et expérimental, offrant une voie prometteuse pour les recherches futures dans ce domaine. Pour commencer, placez la souris anesthésiée sur un coussin chauffant pour maintenir la température corporelle. À l’aide d’une tondeuse, rasez les poils entre la poitrine et le bas-ventre.

Ensuite, utilisez des ciseaux pour faire une incision de deux centimètres de long dans le centre de l’abdomen, suivie d’une incision d’un centimètre entre la partie supérieure de l’abdomen et le processus xiphoïde. Utilisez un expanseur abdominal pour localiser la zone du pancréas pour l’électrocoagulation. À l’aide d’un coton-tige stérile, identifiez le duodénum à l’arrière de la partie supérieure gauche de l’abdomen et tournez-le pour visualiser le canal biliaire reliant le foie.

Occlure temporairement le canal cholédoque proximal à l’aide d’une pince microvasculaire pour empêcher la perfusion rétrograde dans le foie. Connectez le tuyau en polyéthylène de 0,25 x 0,35 millimètre à une aiguille de 0,25 millimètre et percez la zone environnante de l’ampoule, en visant la grande papille duodénale. Insérez le tube dans la papille et passez-le à mi-chemin dans le canal biliaire, puis arrêtez l’entrée.

Démarrez la pompe à perfusion et perférez une solution de bleu de méthylène à 0,2 % jusqu’à ce que le canal pancréatique devienne bleu. Après la perfusion, retirez le tube en polyéthylène et retirez le clip microvasculaire. Utilisez des cotons-tiges stériles pour fixer le pancréas et dirigez le couteau d’électrocoagulation vers la zone de couleur bleue.

Après avoir réglé les paramètres de fonctionnement de l’électrocoagulation, utilisez du cuivre pur comme matériau d’électrode et appliquez le traitement sur le pancréas pendant deux à trois secondes en évitant les vaisseaux sanguins. Poursuivez l’électrocoagulation jusqu’à ce que la région tachée de bleu de méthylène change de couleur en jaune ou en brun. Lorsque la solution de coloration bleue n’est plus visible dans le pancréas, arrêtez l’électrocoagulation.

Après l’opération, placez la souris dans une boîte en polyéthylène doublée de matériau de litière. Après électrocoagulation du canal pancréatique, anesthésez la souris et placez-la sur une plate-forme d’opération. Pour recueillir le sang à travers le plexus orbitaire, tenez doucement la peau sur le dos pour créer une légère saillie du globe oculaire.

Ensuite, placez l’extrémité d’un tube capillaire dans le coin de l’œil et insérez-le doucement sous le globe oculaire à un angle de 30 à 45 degrés. Faites pivoter le capillaire jusqu’à ce que le sang commence à couler. Après le prélèvement sanguin, fermez les paupières en appliquant une légère pression avec de la gaze.

Centrifugez le sang à 1 200 g pendant 15 minutes et recueillez le surnageant dans un nouveau tube. Mesurez l’amylase, la bilirubine et l’acide hyaluronique à l’aide de kits disponibles dans le commerce, en suivant les recommandations du fabricant. Ensuite, placez la souris euthanasiée sur la table d’opération réglée à quatre degrés Celsius.

À l’aide de ciseaux et de pinces, faites une incision en V dans la paroi abdominale pour exposer la cavité abdominale. Retirez le pancréas et divisez-le en trois parties pour le colorer. Fixez le pancréas dans une solution de polyformaldéhyde à 4 %, puis incorporez le pancréas fixe dans de la paraffine pour la section.

Coupez les blocs de paraffine en sections de 0,5 millimètre d’épaisseur et colorez-les à l’hématoxyline et à l’éosine, ainsi qu’à la coloration de Masson pour l’analyse immunohistochimique. Observez le tissu pancréatique coloré au microscope optique. La coloration à l’hématoxyline-éosine a montré des cellules acineuses pancréatiques dispersées et des signes de pancréatite chronique dans le groupe d’électrocoagulation au jour 14.

Au 28e jour, des signes de récupération tissulaire et d’inversion de la pathologie dans les cellules acineuses pancréatiques ont été observés. La coloration de Masson a révélé une fibrose significativement plus importante dans le groupe d’électrocoagulation que dans le groupe fictif. La coloration immunohistochimique a montré des taux élevés d’alpha un, de collagène de type un et d’actine musculaire lisse alpha dans le groupe d’électrocoagulation, indiquant un degré plus élevé de pancréatite chronique.

Les niveaux d’acide hyaluronique ont augmenté dans le groupe d’électrocoagulation, atteignant un pic vers le 21e jour, tout en restant stables dans le groupe fictif. Les taux de bilirubine ont augmenté de manière significative au 14e jour dans le groupe d’électrocoagulation, montrant un pic vers le 21e jour, tandis que le groupe fictif n’a montré aucun changement. Les taux d’amylase dans le groupe d’électrocoagulation ont augmenté le 14e jour, suivis d’une baisse le 28e jour, le groupe placebo montrant peu de variation.