Etablissement d’un modèle murin d’endomètre mince

L’endomètre mince a été largement reconnu comme la cause critique de l’infertilité. Les études sur la pathogenèse de l’endomètre mince s’appuient sur des modèles animaux, ce qui rend cruciale la sélection d’un modèle approprié. Ici, nous décrivons un protocole détaillé qui produit un modèle d’endomètre mince fiable et reproductible chez la souris.

L’opération est traumatisante, car nous devons disséquer la souris et exposer la corne utérine de la souris pour la manipulation. Une mauvaise utilisation peut provoquer une infection ou même entraîner la mort des souris. En effet, une formation et une expérience minutieuses sont nécessaires avant l’opération expérimentale.

Nous avons réussi à développer un modèle d’endomètre avec un temps de perfusion allant d’une à trois minutes pour reproduire les différents degrés de symptômes de l’endomètre mince observés dans les cas cliniques. Cela nous permet de créer des modèles avec différents niveaux de dommages, en fonction des besoins spécifiques de notre recherche. La méthode utilisée dans notre protocole offre l’avantage d’un faible coût, d’une pertinence, ainsi que d’une période expérimentale.

Il étudie le mécanisme pathologique et le traitement en trois premières fois par rapport à d’autres techniques. Pour commencer, placez la souris anesthésiée en décubitus dorsal sur la table d’opération préchauffée et, à l’aide de ruban adhésif, fixez les membres de la souris. À l’aide de ciseaux stériles et de pinces, faites une incision d’un centimètre dans l’abdomen, située à environ un centimètre de l’orifice urétral, s’étendant jusqu’à la cavité péritonéale.

Écartez doucement les entrailles à l’aide d’une pince stérile pour localiser l’utérus. Exposez la corne utérine droite et appliquez des pinces hémostatiques à l’extrémité proximale près du col de l’utérus et à l’extrémité distale près de l’ovaire. À l’aide d’une seringue de calibre 25, instillez environ 50 microlitres d’éthanol à 95 % dans la cavité utérine, en tenant l’aiguille parallèlement à la corne utérine.

Maintenez la seringue pendant une à cinq minutes, selon le cas. Ensuite, retirez l’éthanol de la cavité utérine et rincez la cavité utérine avec une solution saline stérile cinq fois pour éliminer l’éthanol restant. Maintenant, retirez les pinces hémostatiques et remettez l’utérus et les entrailles dans leur position d’origine.

À l’aide de sutures chirurgicales résorbables 5/0, suturez le péritoine, puis l’épiderme. Pour commencer, placez un modèle de souris mince euthanasiée de l’endomètre sur la table de dissection et coupez les sutures à l’aide de ciseaux chirurgicaux pour exposer l’utérus. Ensuite, à l’aide d’une pince chirurgicale, extrayez soigneusement l’utérus entier et détachez l’utérus des entrailles environnantes.

Retirez immédiatement les deux cornes utérines et divisez chaque corne en trois à quatre petits segments. Placez les tissus utérins dans un millilitre de paraformaldéhyde à 4 % pris dans un tube de microcentrifugation de 1,5 millilitre. Placez les échantillons fixés au formol dans des cassettes de tissus et transférez les cassettes de tissus à travers une série de concentrations d’éthanol, suivies de xylène et de paraffine.

Remplissez un moule à cire avec de la cire de paraffine fondue chauffée à 55 degrés Celsius. À l’aide d’une pince chauffée, vous pouvez transférer rapidement les segments de tissu infiltrés de la cassette d’enrobage dans le moule en cire. Une fois que les segments de tissu sont correctement positionnés, placez le bas de la cassette d’enrobage sur le dessus du moule d’histologie.

Ensuite, placez le moule directement sur une plaque de refroidissement réglée à quatre degrés Celsius pendant au moins 20 minutes pour laisser la paraffine se solidifier. Ensuite, retirez l’échantillon du moule et utilisez une coupe-paraffine pour couper tout excès de cire autour de celui-ci. L’épaisseur de l’endomètre et le nombre de glandes endométriales ont considérablement diminué dans les groupes d’une, deux et trois minutes par rapport au groupe témoin.

Une forte adhérence utérine et une cavité utérine presque invisible ont été observées dans les groupes de quatre et cinq minutes, et aucune glande endométriale n’a été trouvée. La fibrose de l’endomètre augmentait avec la durée de la perfusion d’éthanol, comme le montre une coloration excessive dans des groupes d’une à cinq minutes par rapport au témoin.