Procédures d’exploitation et de bioconfinement d’une installation pour souris de laboratoire avec un microbiome naturel : procédure d’immunophénotypage

Nous étudions les effets de la nutrition sur le système immunitaire. Et nous nous intéressons particulièrement aux effets anti-âge et anti-inflammatoires de la restriction calorique et des régimes de jeûne et au rôle du microbiote dans ces processus. Les souris sauvageons combinent le patrimoine génétique bien caractérisé des souches de souris de laboratoire et le microbiome naturel des souris en liberté.

Cependant, le microbiome naturel de ces souris sauvageons contient des virus, des bactéries et aussi des parasites, et pose donc un défi aux installations d’élevage. La contribution du QUEST Center for Responsible Research a été le développement du cadre des six R, qui améliore les trois R que nous connaissons de Russell et Burch, le remplacement, le raffinement et la réduction, en incorporant trois R supplémentaires : la robustesse, l’enregistrement et la déclaration. Ce cadre vise à améliorer la reproductibilité et la transparence de la recherche préclinique.

Et l’idée est que les résultats expérimentaux sont plus fiables, plus dignes de confiance et, en fin de compte, transposables dans des contextes cliniques. Au cours des quatre dernières années, nous avons élaboré le concept d’une installation pour les souris sauvageons avec des procédures de bioconfinement distinctes. Nous souhaitons partager notre expertise avec les chercheurs pour leur permettre d’inclure dans leurs travaux des souris dotées d’un microbiome naturel.

Les accidents vasculaires cérébraux sont plus fréquents chez les personnes âgées. Le système immunitaire possède des cellules mémoires qui combattent les particules infectieuses et vivent avec un microbiote hétérogène. Ainsi, la modélisation de l’AVC chez la souris sauvageon est un modèle affiné chez les rongeurs qui reflète mieux l’état des patients.

Après avoir enfilé un pantalon de zone, un cosaque et des couvre-chaussures jetables, retirez les chaussures et les chaussettes dans l’antichambre de la douche d’air. Mettez des chaussettes de zone et de l’équipement de protection individuelle complet, y compris une combinaison Tyvek, un filet à cheveux, des gants en coton, des gants en nitrile et des masques faciaux. Entrez dans la douche à air portant des chaussettes via le revêtement de sol adhésif.

Pendant la douche à l’air, levez les bras et effectuez une rotation à 360 degrés. Sortez de la douche d’air et mettez des chaussures de zone de l’autre côté. Transférez la souris de sa chambre dans une cage fermée et ventilée individuellement à la salle d’intervention.

Positionnez la souris anesthésiée sur la table désinfectée et saisissez la peau de son cou pour comprimer les veines du cou. D’une main, fixez la tête de la souris avec le pouce et l’index. Insérez un capillaire frais dans le canthus médial de l’œil sous la membrane nictitante à un angle de 45 degrés.

Faites pivoter axialement le capillaire à travers la membrane sinusale à l’arrière de l’orbite jusqu’à ce que le sang commence à circuler. Prélever un minimum de 15 microlitres de sang dans un tube de prélèvement sanguin contenant une goutte d’EDTA. Desserrez la prise sur la peau du cou avant de retirer le capillaire pour minimiser les saignements dans les tissus.

Utilisez une compresse de gaze ou un écouvillon propre pour arrêter le saignement et assurer l’hémostase. Faites pivoter légèrement le tube pour mélanger le sang et l’EDTA sans le secouer et stockez l’échantillon de sang sur de la glace. Après avoir terminé le prélèvement sanguin, changez de gants et désinfectez tous les matériaux et surfaces.

Enfilez de nouveaux vêtements de protection dans le flux d’air laminaire d’accès, ou LAF, situé devant la cabine LAF. Désinfectez les récipients d’échantillons et retirez-les par la porte coulissante située dans la paroi vitrée de la cabine LAF. Après avoir transféré les récipients d’échantillons à la deuxième personne, désinfectez toutes les surfaces.

Recevez des conteneurs d’échantillons désinfectés de la zone de sauvageon sans contact direct par la porte coulissante dans la paroi vitrée de la cabine LAF. Ensuite, laissez les combinaisons jetables et les chaussures de zone à l’intérieur de la zone désignée. Jetez le filet à cheveux, les gants en caoutchouc et le masque facial.

Entrez immédiatement dans la douche d’air en chaussettes de zone. Levez les bras et effectuez un virage à 360 degrés pendant que vous prenez une douche à l’air. Quittez la douche à air et placez les chaussettes dans le collecteur de linge.

Mettez des chaussettes personnelles, des chaussures et des couvre-chaussures jetables. Déposez les vêtements de la zone dans le collecteur de linge du vestiaire et mettez-les en vêtements ordinaires.