Name: Dévoilement du transport et des effets des xénobiotiques dans les mitochondries isolées : résultats des essais respiratoires et enzymatiques (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-07T12:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: Découvrez une méthodologie respirométrique et enzymatique pour évaluer les effets des xénobiotiques sur les mitochondries isolées chez les rats, moustiques et tiques. Cette approche optimise le développement de biopesticides ciblés et sécurisés.

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<meta charset="utf8"></head><body>Modification de la fonction mitochondriale pour des applications thérapeutiques et bioinsecticides

<ol><li>Javadov, S., Kozlov, A. V., Camara, A. K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+in+health+and+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Mitochondria in health and diseases.</a> Cells. 9 (5), 1177(2020).</li>
<li>Kummer, E., Ban, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+and+regulation+of+protein+synthesis+in+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms and regulation of protein synthesis in mitochondria.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 22 (5), 307-325 (2021).</li>
<li>Bock, F. J., Tait, S. W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+as+multifaceted+regulators+of+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mitochondria as multifaceted regulators of cell death.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 21 (2), 85-100 (2019).</li>
<li>Fulda, S., Galluzzi, L., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+mitochondria+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Targeting mitochondria for cancer therapy.</a> Nat Rev Drug Discov. 9 (6), 447-464 (2010).</li>
<li>Liu, Y., Shi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+as+a+target+in+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22MedComm%22%5BJournal%5D)">Mitochondria as a target in cancer treatment.</a> MedComm. 1 (2), 129-139 (2020).</li>
<li>Duque, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insecticidal+activity+of+essential+oils+from+American+native+plants+against+Aedes+aegypti+%28Diptera%3A+Culicidae%29%3A+an+introduction+to+their+possible+mechanism+of+action%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Insecticidal activity of essential oils from American native plants against Aedes aegypti (Diptera: Culicidae): an introduction to their possible mechanism of action.</a> Sci Rep. 13 (1), 2989(2023).</li>
<li>Kesari, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant-derived+natural+biomolecule+picein+attenuates+Menadione+induced+oxidative+stress+on+neuroblastoma+cell+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxidants+%28Basel%2C+Switzerland%29%22%5BJournal%5D)">Plant-derived natural biomolecule picein attenuates Menadione induced oxidative stress on neuroblastoma cell mitochondria.</a> Antioxidants (Basel, Switzerland). 9 (6), 552(2020).</li>
<li>Vanegas-Estévez, T., Duque, F. M., Urbina, D. L., Vesga, L. C., Mendez-Sanchez, S. C., Duque, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+elucidation+of+an+insecticide+from+natural+compounds+targeting+mitochondrial+proteins+of+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22Pestic+Biochem+Physiol%22%5BJournal%5D)">Design and elucidation of an insecticide from natural compounds targeting mitochondrial proteins of Aedes aegypti.</a> Pestic Biochem Physiol. 198, 105721(2024).</li>
<li>Hao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria-targeted+nanocarriers+doubled+the+toxicity+of+oxidative+phosphorylation+and+ATP+synthesis+disruptive+insecticides+against+Spodoptera+frugiperda%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Nano%22%5BJournal%5D)">Mitochondria-targeted nanocarriers doubled the toxicity of oxidative phosphorylation and ATP synthesis disruptive insecticides against Spodoptera frugiperda.</a> Environ Sci Nano. 9 (10), 3873-3884 (2022).</li>
<li>Lees, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insecticide+screening+platforms+indicate+that+Mitochondrial+Complex+I+inhibitors+are+susceptible+to+cross-resistance+by+mosquito+P450s+that+metabolise+pyrethroids%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">New insecticide screening platforms indicate that Mitochondrial Complex I inhibitors are susceptible to cross-resistance by mosquito P450s that metabolise pyrethroids.</a> Sci Rep. 10 (1), 16232(2020).</li>
<li>Leung, M. C. K., Meyer, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+as+a+target+of+organophosphate+and+carbamate+pesticides%3A+Revisiting+common+mechanisms+of+action+with+new+approach+methodologies%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Mitochondria as a target of organophosphate and carbamate pesticides: Revisiting common mechanisms of action with new approach methodologies.</a> Reprod Toxicol. 89, 83-92 (2019).</li>
<li>Al-Harbi, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+insecticidal+effects+of+plants+essential+oils+extracted+from+basil%2C+black+seeds+and+lavender+against+Sitophilus+oryzae%5BTitle%5D)+AND+%22Plants%22%5BJournal%5D)">Evaluation of insecticidal effects of plants essential oils extracted from basil, black seeds and lavender against Sitophilus oryzae.</a> Plants. 10 (5), 829(2021).</li>
<li>Kim, S. -I., Roh, J. -Y., Kim, D. -H., Lee, H. -S., Ahn, Y. -J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insecticidal+activities+of+aromatic+plant+extracts+and+essential+oils+against+Sitophilus+oryzae+and+Callosobruchus+chinensis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Stored+Prod+Res%22%5BJournal%5D)">Insecticidal activities of aromatic plant extracts and essential oils against Sitophilus oryzae and Callosobruchus chinensis.</a> J Stored Prod Res. 39 (3), 293-303 (2003).</li>
<li>Kielkopf, C. L., Bauer, W., Urbatsch, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bradford+assay+for+determining+protein+concentration%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Bradford assay for determining protein concentration.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2020 (4), 102269(2020).</li>
<li>Zor, T., Selinger, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linearization+of+the+Bradford+protein+assay+increases+its+sensitivity%3A+theoretical+and+experimental+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Linearization of the Bradford protein assay increases its sensitivity: theoretical and experimental studies.</a> Anal Biochem. 236 (2), 302-308 (1996).</li>
<li>Voss, D. O., Campello, A. P., Bacila, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+respiratory+chain+and+the+oxidative+phosphorylation+of+rat+brain+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">The respiratory chain and the oxidative phosphorylation of rat brain mitochondria.</a> Biochem Biophys Res Commun. 4, 48-51 (1961).</li>
<li>Gonçalves, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composition+and+biological+activity+of+the+essential+oil+from+Thapsia+minor%2C+a+new+source+of+geranyl+acetate%5BTitle%5D)+AND+%22Ind+Crops+Prod%22%5BJournal%5D)">Composition and biological activity of the essential oil from Thapsia minor, a new source of geranyl acetate.</a> Ind Crops Prod. 35 (1), 166-171 (2012).</li>
<li>Somlo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+des+lactico-cytochrome+c+reductases+%28d-et+l-%29+de+la+levure+aerobie+par+les+lactates+%28d-+et+l%29%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+-+Gen+Subj%22%5BJournal%5D)">Induction des lactico-cytochrome c reductases (d-et l-) de la levure aerobie par les lactates (d- et l).</a> Biochim Biophys Acta - Gen Subj. 97 (2), 183-201 (1965).</li>
<li>Mason, T. L., Poyton, R. O., Wharton, D. C., Schatz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytochrome+c+Oxidase+from+Bakers%27+Yeast%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Cytochrome c Oxidase from Bakers' Yeast.</a> J Biol Chem. 248 (4), 1346-1354 (1973).</li>
<li>Nelson, D. L., Cox, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNelson%2C+DL+%22Lehninger+Principles+of+Biochemistry%3A+International+Edition%22">Lehninger Principles of Biochemistry: International Edition</a>. , Macmillan Learning. https://play.google.com/store/books/details?id=wZqp0AEACAAJ (2021).</li>
<li>Djafarzadeh, S., Jakob, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+respirometry+to+assess+mitochondrial+function+in+permeabilized+and+intact+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">High-resolution respirometry to assess mitochondrial function in permeabilized and intact cells.</a> J Vis Exp. 120, e54985(2017).</li>
<li>Maxwell, J. T., Tsai, C. -H., Mohiuddin, T. A., Kwong, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyses+of+mitochondrial+calcium+influx+in+isolated+mitochondria+and+cultured+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Analyses of mitochondrial calcium influx in isolated mitochondria and cultured cells.</a> J Vis Exp. (134), e57225(2018).</li>
<li>Vesga, L. C., Silva, A. M. P., Bernal, C. C., Mendez-Sánchez, S. C., Romero Bohórquez, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetrahydroquinoline%2F4%2C5-dihydroisoxazole+hybrids+with+a+remarkable+effect+over+mitochondrial+bioenergetic+metabolism+on+melanoma+cell+line+B16F10%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Chem+Res%22%5BJournal%5D)">Tetrahydroquinoline/4,5-dihydroisoxazole hybrids with a remarkable effect over mitochondrial bioenergetic metabolism on melanoma cell line B16F10.</a> Med Chem Res. 30, 2127-2143 (2021).</li>
<li>Vesga, L. C., Bueno, Y., Stashenko, E., Mendez Sánchez, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efecto+del+aceite+esencial+de+Eucalyptus+citriodora+sobre+el+metabolismo+energ%C3%A9tico+mitocondrial%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Colomb+Qu%C3%ADm%22%5BJournal%5D)">Efecto del aceite esencial de Eucalyptus citriodora sobre el metabolismo energético mitocondrial.</a> Rev Colomb Quím. 43 (2), 10-17 (2015).</li>
<li>Borrero-Landazabal, M. A., Duque, J. E., Mendez-Sanchez, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Model+to+design+insecticides+against+Aedes+aegypti+using+in+silico+and+in+vivo+analysis+of+different+pharmacological+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+C+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Model to design insecticides against Aedes aegypti using in silico and in vivo analysis of different pharmacological targets.</a> Comp Biochem Physiol C Toxicol Pharmacol. 229, 108664(2020).</li>
<li>Valmas, N., Zuryn, S., Ebert, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+uncouplers+act+synergistically+with+the+fumigant+phosphine+to+disrupt+mitochondrial+membrane+potential+and+cause+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial uncouplers act synergistically with the fumigant phosphine to disrupt mitochondrial membrane potential and cause cell death.</a> Toxicology. 252 (1-3), 33-39 (2008).</li>
<li>Slocińska, M., Rosinski, G., Jarmuszkiewicz, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+mitochondrial+uncoupling+protein+4+and+ATP-sensitive+potassium+channel+cumulatively+decreases+superoxide+production+in+insect+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Pept+Lett%22%5BJournal%5D)">Activation of mitochondrial uncoupling protein 4 and ATP-sensitive potassium channel cumulatively decreases superoxide production in insect mitochondria.</a> Protein Pept Lett. 23 (1), 63-68 (2016).</li>
<li>Borrero Landazabal, M. A., Carreño Otero, A. L., Kouznetsov, V. V., Duque Luna, J. E., Mendez-Sanchez, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+of+mitochondrial+electron+transport+chain+and+oxidative+stress+induced+by+alkaloid-like+%CE%B1-aminonitriles+on+Aedes+aegypti+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Pestic+Biochem+Physiol%22%5BJournal%5D)">Alterations of mitochondrial electron transport chain and oxidative stress induced by alkaloid-like α-aminonitriles on Aedes aegypti larvae.</a> Pestic Biochem Physiol. 144, 64-70 (2018).</li>
<li>Castillo-Morales, R. M., Carreño Otero, A. L., Mendez-Sanchez, S. C., Da Silva, M. A. N., Stashenko, E. E., Duque, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+affectation%2C+DNA+damage+and+AChE+inhibition+induced+by+Salvia+officinalis+essential+oil+on+Aedes+aegypti+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+C+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial affectation, DNA damage and AChE inhibition induced by Salvia officinalis essential oil on Aedes aegypti larvae.</a> Comp Biochem Physiol C Toxicol Pharmacol. 221, 29-37 (2019).</li>
<li>Montagut, D. C., Bueno, Y., Vesga, L. C., Stashenko, E. E., Mendez-Sanchez, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cymbopogon+flexuosus+%28nees+ex+steud.%29+w.+watson+essential+oil+effect+on+mitochondrial+bioenergetics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Essent+Oil+Res%22%5BJournal%5D)">Cymbopogon flexuosus (nees ex steud.) w. watson essential oil effect on mitochondrial bioenergetics.</a> J Essent Oil Res. 34 (3), 233-239 (2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2,6-dichlorophénolindophénol</td><td>Merck</td><td>119814</td><td>Préparer le même jour d’utilisation.</td></tr><tr><td>Réactif Bradford</td><td>Merck</td><td>B6916</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Merck</td><td>A7030</td><td></td></tr><tr><td>Carvacrol</td><td>Merck</td><td>W224511</td><td></td></tr><tr><td>Cytochrome c</td><td>Merck</td><td>C2506</td><td>Convertisseur photosensible couvrez-le d’une feuille d’aluminium. En solution, il doit être conservé au congélateur.</td></tr><tr><td>D-mannitol</td><td>Merck</td><td>M4125</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Merck</td><td>>E3889</td><td></td></tr><tr><td>Éthylènediamineacide tétraacétique sel tétrasodique dihydraté</td><td>Merck</td><td>E6511</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Merck</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>KCN</td><td>Merck</td><td>60178</td><td>En solution fonctionne bien pendant 2 semaines.</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Merck</td><td>P5655</td><td></td></tr><tr><td>Multiskan FC Photomètre sur microplaques</td><td>Thermo Scientific&nbsp ;</td><td></td><td></td>51119100</tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Merck</td><td>567550</td><td></td></tr><tr><td>Oroboros O2k&nbsp ;</td><td>Oroboros Instruments</td><td>10203-03</td><td>https://www.oroboros.at/index.php/product/o2k-startup/</td></tr> <tr><td>Méthosulfaté de phénazine&nbsp ;</td><td>Merck</td><td>P9625</td><td>Préparez-vous le même jour d’utilisation.</td></tr><tr><td>Ferricyanure de potassium</td><td>Merck</td><td>244023</td><td>Prepare le jour même de l’utilisation.</td></tr><tr><td>Potter Elvehjem tube</td><td></td><td></td><td></td>d’homogénéisateur</tr><tr><td>de tissus Rotenone Merck</td><td></td><td>557368</td><td>soluble dans l’éthanol. Le conver photosensible le recouvre d’une feuille d’aluminium. En solution, il doit être conservé au congélateur.</td></tr><tr><td>Sodium succinate</td><td></td><td>Merck S9637</td><td>En solution, il doit être conservé au congélateur.</td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>Merck</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>&beta ;-Nicotinamide adénine dinucléotide, réduit Hydrate de sel disodique</td><td>Merck</td><td>N8129</td><td>Photosensitive conver le couvrir d’une feuille d’aluminium. En solution, il doit être conservé au congélateur.</td></tr></tbody></table>

dévoilement du transport et des effets des xénobiotiques dans les mitochondries isolées : résultats des essais respiratoires et enzymatiques

Unveiling Xenobiotic Transport and Effects in Isolated Mitochondria: Insights from Respirometric and Enzymatic Assays

Avant d’analyser les résultats obtenus avec ce protocole, il est essentiel de retenir un peu de la biochimie de la chaîne de transport d’électrons dans les mitochondries. Tout d’abord, le NADH fournit une paire d’électrons aux centres d’oxydoréduction situés dans le complexe I. Là, il commence le transport d’électrons qui passent du complexe I à l’ubiquinone, puis au complexe III, qui les donne au cytochrome c, et enfin au complexe IV, où l’oxygène est l’accepteur final d’électrons, le réduisant en eau. D’autre part, le ...

Dévoilement du transport et des effets des xénobiotiques dans les mitochondries isolées : résultats des essais respiratoires et enzymatiques

Mitochondria are often referred to as the cell's powerhouse due to their crucial role in energy production through the electron transport chain (ETC). ...

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Biochimie

La comparaison du potentiel de membrane mitochondriale entre les échantillons fournit des informations précieuses sur l’état cellulaire. Les étapes détaillées de l’isolement des mitochondries et de l’évaluation de la réponse aux inhibiteurs et aux découpleurs à l’aide de la fluorescence sont décrites. La méthode et l’utilité de ce protocole sont illustrées par l’utilisation d’une culture cellulaire et d’un modèle animal de stress cellulaire.

Isolement et analyse fonctionnelle des mitochondries de cellules cultivées et de tissus de souris

Méthodes pour la biopsie du vaste externe, préparation de mitochondries purifiées, et le profilage respirométrique sont décrits. L'utilisation de petit volume musculaire rend cette technique convient pour des applications de recherche clinique.

Préparation et respirométrique évaluation des mitochondries isolées de tissu musculaire squelettique Obtenu par biopsie percutanée aiguille

Les méthodes présentées fournissent des instructions étape par étape pour la réalisation d’une collection de tests respiratoires basés sur des microplaques utilisant des mitochondries isolées à partir de quantités minimales de muscle squelettique de souris. Ces tests sont capables de mesurer les changements/adaptations mécanistes de la consommation d’oxygène mitochondrial dans un modèle animal couramment utilisé.

Utilisation de mitochondries isolées à partir des quantités minimes de souris muscle squelettique pour microplaques à haut débit respiratoire mesurée

Ici, nous présentons une modification d’une méthode précédemment rapportée qui permet d’isoler des mitochondries purifiées de haute qualité à partir de plus petites quantités de muscle squelettique de souris. Cette procédure aboutit à des mitochondries fortement couplées qui respirent avec une fonction élevée lors des tests respiratoires sur microplaques.

Isolement des mitochondries à partir des quantités minimes de souris muscle squelettique pour les mesures à haut débit microplaques respiratoires

Haute résolution de respirométrie est utilisé pour déterminer la consommation d'oxygène des mitochondries. Cette technique est simple de déterminer les complexes de la chaîne respiratoire mitochondriale »(I-IV) de la fréquence respiratoire, la capacité maximale du système de transport d'électrons mitochondriale, et l'intégrité de la membrane externe mitochondriale.

Haute résolution Respirométrie pour évaluer la fonction mitochondriale dans perméabilisées et des cellules intactes

Ici, un échantillon de muscle quadriceps est prélevé sur un porc anesthésié et les mitochondries sont isolées par centrifugation différentielle. Ensuite, les fréquences respiratoires des complexes de la chaîne respiratoire mitochondriale I, II et IV sont déterminées à l’aide de la respirométrie à haute résolution.

Isolement des mitochondries Intact du muscle squelettique par centrifugation différentielle pour respirométriques mesures haute résolution

Dans ce travail, nous décrivons un protocole modifié pour tester le flux de substrat respiratoire mitochondrial en utilisant la perfringolysine O recombinante en combinaison avec la respirométrie à base de microplaques. Avec ce protocole, nous montrons comment la metformine affecte la respiration mitochondriale de deux lignées cellulaires tumorales différentes.

Mesure du flux de substrat mitochondrial dans les cellules O-perméabilisées de perfringolysine recombinante

L’évaluation de la phosphorylation oxydative à l’aide de respiromètres à haute résolution est devenue une partie intégrante de l’analyse fonctionnelle des mitochondries et du métabolisme énergétique cellulaire. Ici, nous présentons des protocoles pour l’analyse du métabolisme énergétique cellulaire à l’aide de respiromètres haute résolution à chambre et à microplaques et discutons des principaux avantages de chaque appareil.

La respirométrie à haute résolution pour évaluer la bioénergétique dans les cellules et les tissus à l’aide de respiromètres à chambre et à plaques

Ici, nous décrivons une méthode détaillée pour l’isolement des mitochondries du muscle squelettique de la souris et l’analyse ultérieure de la respiration par taux de consommation d’oxygène (OCR) à l’aide de tests respirométriques sur microplaques. Ce pipeline peut être appliqué pour étudier les effets de multiples interventions environnementales ou génétiques sur le métabolisme mitochondrial.

Isolement des mitochondries du muscle squelettique de la souris pour les tests respirométriques

Ces protocoles aideront les utilisateurs à sonder le métabolisme énergétique mitochondrial dans les sphéroïdes dérivés de lignées cellulaires cancéreuses 3D à l’aide de l’analyse du flux extracellulaire Seahorse.

Exploration du métabolisme énergétique mitochondrial des sphéroïdes de microtissu 3D uniques à l’aide de l’analyse du flux extracellulaire

La respiration mitochondriale dans les cellules entières de levure est un indicateur précieux de la bioénergétique cellulaire. Nous présentons ici un protocole pour quantifier ce phénotype applicable à différentes espèces de levures.

Quantification de la respiration mitochondriale dans des cellules entières de levure

Découvrez une méthodologie respirométrique et enzymatique pour évaluer les effets des xénobiotiques sur les mitochondries isolées chez les rats, moustiques et tiques. Cette approche optimise le développement de biopesticides ciblés et sécurisés.

Dévoilement du transport et des effets des xénobiotiques dans les mitochondries isolées : résultats des essais respiratoires et enzymatiques (Vidéo) | JoVE Journal

Dévoilement du transport et des effets des xénobiotiques dans les mitochondries isolées : résultats des essais respiratoires et enzymatiques

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